周 刚，牛成明，司昌德，韩凌霞

(中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室，黑龙江哈尔滨150001)

禽白血病(Avian leukosis，AL)是由反转录病毒科甲型反转录病毒属AL病毒(ALV)引起的禽类造血组织中某些细胞成分过度增生的肿瘤性疾病[1]；ALV的感染还可引起鸡群的免疫抑制[2]和生产力的严重下降。根据致病性和感染宿主的不同，ALV被划分为A-J 10个亚群[3]，其中A-D亚群为外源性ALV，主要感染蛋鸡，A、B亚群主要诱发鸡的淋巴细胞白血病，而C、D亚群在野外极为少见；E～I亚群为内源性ALV，其中E亚群为整合在鸡染色体中一种前病毒DNA，在鸡群中普遍存在[4]，而F～I亚群的宿主为野生禽类，包括雉、鹧鸪、鹌鹑和鹰等[5]。J亚群具有独特的亚群特异性，主要引起肉鸡的髓细胞瘤[6]。外源性ALV能诱发肿瘤，可垂直和水平传播，而内源性ALV的致瘤性很低，不能产生感染性病毒粒子[7]，但内外源性ALV的重组将导致高致病性毒株的产生[8]。

近年来报道了多种ALV的检测方法，但均无法区分内源性和外源性ALV[9]。本研究根据ALV各亚群共有的p27基因和决定ALV亚群特异性的env基因设计引物，建立了ALV的通用检测并鉴别内、外源性ALV的多重PCR检测方法，以期为ALV的临床诊断提供有效的手段。

1 材料和方法

1.1 病毒株和主要试剂 A亚群ALV标准毒株(RAV-1)购自中国兽医药品监督所，网状内皮组织增生症病病毒(REV)、鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)和DF-1细胞由本实验室保存；SPF鸡胚由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所提供；M-MLV反转录酶、rTaqDNA聚合酶、pMD18-T载体等均购自大连宝泰克生物有限公司；……