聂明非，李 岩，温 凯，贾 莹，王君伟

(东北农业大学动物医学院，黑龙江哈尔滨150030)

牛病毒性腹泻(Bovine viral diarrhea，BVD)是由BVD病毒(BVDV)引起的一种以腹泻、黏膜病、持续感染、免疫抑制以及母畜流产为主要症状的接触性传染病[1]。该病呈全球性分布，给养牛业造成了很大的经济损失。BVDV与猪瘟病毒(CSFV)、羊边界病病毒(BDV)同属黄病毒科瘟病毒属成员，其基因组为单股正链RNA，全长约12.3 nt～12.5 nt[2]，整个基因组含有一个大的开放阅读框架(ORF)和两侧的非翻译区(UTR)[2]。

E2(gP53)位于BVDV ORF 2077位～3198位核苷酸，由374个氨基酸残基组成，有5个可能的N-端糖基化位点,这些位点在BVDV不同毒株中非常保守，去糖基化分子量约为42 ku[3]。E2与Erns和E1是病毒的结构蛋白，形成表面突起伸向囊膜表面[4]。在BVDV所有结构蛋白之中，E2蛋白是免疫原性最强的糖蛋白，靠近N末端的一半含有多种依赖于构象的抗原结构域，其N端伸出BVDV囊膜表面，是决定BVDV抗原性的主要部位，也是与抗BVDV抗体结合、介导免疫中和反应及与宿主细胞识别、吸附的主要部位[5-7]。

本实验利用BVDV基因免疫BALB/c小鼠，用病毒作为筛选抗原制备单抗，旨在筛选出针对BVDV的特异性单克隆抗体(MAb)，为BVD诊断方法的建立提供一定的物质材料。

1 材料和方法

1.1 病毒株、质粒、细胞及实验动物 BVDV VEDEVAC株和CSFV C株、pcDNA-E2质粒、骨髓瘤细胞SP2/0、MDBK细胞由本实验室保存；PK-15细胞由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所仇华吉研究员惠赠；4～6周龄清洁级BALB/c雌鼠购自中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物中心。

1.2 主要试剂 FITC标记羊抗鼠IgG、HRP标记羊抗鼠IgG购自北京中衫金桥公司；FITC标记兔抗猪IgG、FITC标记兔抗牛二抗购自北京博奥森生物技术有限公司；……