戴佳琳，黄 江*，廖兴江，申萍香，周灵贵，刘玉江

(贵阳医学院多媒体形态学实验室，贵州贵阳550004)

猪带绦虫呈世界性分布，人是该寄生虫唯一的终宿主，成虫寄生于人的肠道可引起囊尾蚴病(囊虫病)。因此，对猪带绦虫功能基因组学研究，筛选与猪带绦虫结构、生长发育、物质和能量代谢、侵袭和免疫调节等密切相关的功能基因，是控制及消灭猪带绦虫的前提。本课题组前期已经成功构建了亚洲带绦虫、牛带绦虫及猪带绦虫成虫cDNA文库[1-2]，从该文库中筛选出腺苷酸激酶(adenylate kinase，ADK)。ADK分布广泛，是细胞中一种重要的核苷酸激酶，与其他磷酸转移酶对维持细胞中腺苷酸的正常含量及在能量代谢和酶活性调节中起着重要的作用。国内外对猪带绦虫ADK方面的研究尚未见报道，本研究对ADK原核表达和免疫学鉴定，为进一步探讨它的酶学特性及猪带绦虫能量代谢及非能量代谢方面的研究奠定了基础。

1 材料和方法

1.1 实验材料 亚洲带绦虫病人、猪带绦虫病人及牛带绦虫病人血清取自粪检阳性的带绦虫病人；猪带绦虫成虫cDNA质粒文库构建，ADK基因筛选均由本课题组完成[3]。原核表达质粒pET-28a(+)及E.coliBL-21/DE3由中山大学热带病防治教育部重点实验室惠赠。BamHⅠ、XhoⅠ、ExTaq酶、DNA Marker，蛋白分子量标准等试剂购自TaKaRa公司；T4连接酶、IPTG购自Promega公司。

1.2 引物设计及PCR扩增 根据已获得的全长ADK基因序列，利用DNAclub软件设计引物，由上海英骏生物公司合成。P1：5'-ATAGGATCCATG CCCGGGAATTC3'，在5'端引入BamHⅠ酶切位点；P2：5'-CCGCTCGAGTTACTTGATTCCCTTC3'，在 5'端引入XhoⅠ酶切位点。PCR产物经0.8 g/L琼脂糖凝胶电泳鉴定回收。

1.3 重组……