陈兆国，米荣升，于慧珠，郝言明，胡义彬，黄 燕，李正锋，李 艳，林矫矫

(中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室/上海动物生物技术研究中心，上海200241)

鸡球虫病是由艾美耳属(Eimeria)球虫引起的一种寄生虫病，严重危害鸡的生长发育，对雏鸡的危害尤为严重。鸡球虫分为：堆型艾美耳球虫(E.acervulina)、布氏艾美耳球虫(E.brunetti)、巨型艾美耳球虫(E.maxima)、和缓艾美耳球虫(E.mitis)、毒害艾美耳球虫(E.necatrix)、早熟艾美耳球虫(E.praecox)和柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)7种。其中E.praecox是一种“早熟型”球虫，卵囊相对较大，最短孢子化时间为12 h，最短潜在期为83 h。由于该虫种对鸡的致病性较弱，因而对其研究较少。由于鸡球虫病多为球虫混合感染引起，并且感染率高，对养鸡业造成的损失巨大，因此愈来愈受到人们的关注。

本研究对上海田间球虫混合样品进行分离和鉴定，为丰富我国鸡球虫虫种资源，发展球虫病防治技术奠定基础。

1 材料和方法

1.1 球虫样品和实验动物 含E.praecox卵囊的多个艾美耳球虫虫种，分离自上海郊区某鸡场，经鸡传代后收集卵囊，孢子化后4℃保存备用；黄羽肉鸡购自上海郊区某大型鸡场。

1.2 菌株和载体E.coliDH5α由本实验室保存；pMD18-T载体购自TaKaRa公司。

1.3 主要试剂 TaKaRa Universal Genomic DNA Extraction Kit Ver.3.0、ExTaq酶、限制性内切酶EcoRⅠ和HindⅢ均购自TaKaRa公司；DNA胶回收试剂盒购自爱思进生物技术有限公司；100 bp DNA Ladder购自北京天根生化科技有限公司。

1.4 引物设计 根据Schnitzler等报道设计鸡球虫虫种鉴定引物[4-5](表1)。根据Barta等报道设计鸡球虫18S rRNA鉴定引物[6]，上游引物ERIB1：5'-ACC TGGTTGATCCTGCCAG-3'，下游引物ERIB10：5'-C TTCCGCAGGTTCACCTACGG-3'。由上海桑尼生物技术有限公司合成。……