石文达，刘永刚，王洪峰，王淑杰，马 平，徐 敏，武佳斌，蔡雪辉

(中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室，黑龙江哈尔滨150001)

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)是一种严重危害养猪业的传染病，表现为母猪繁殖障碍和仔猪及生长猪呼吸系统障碍[1]。1987年，美国首先报道了该病的发生。PRRS自20世纪90年代中期在我国发现以来，现已广泛存在，并且疫情较为严重[2-3]。Meulenberg等1993年首先完成了第一个欧洲型PRRS病毒(PRRSV)分离株Lelystad的全基因组克隆和测序，随后，美洲型分离株的全基因组测序相继被完成。Faaberg等2001年对商品化疫苗株RespPRRS MLV进行了全基因组测序，并与亲本株ATCC VR-2332的全序列进行了比较分析，数据显示只有ORF7基因和3'UTR区域未发生变异。而国内对致弱毒株的全基因组测序报道较少。

本研究通过对国内的PRRSV致弱疫苗株CH-1R株进行全基因组的克隆和测序，填补了我国PRRSV致弱毒株基因组信息数据的空白，同时对了解PRRSV致弱毒株的基因型及防制具有重要的意义。

1 材料和方法

1.1 病毒株 PRRSV为CH-1R株[4]，由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所保存[5]。本研究采用CH-1a致弱毒株的第171代，即CH-1R株。

1.2 菌种、质粒和试剂E.coliJMl09菌种由本室保存；克隆载体pMD18-T载体和常用工具酶及试剂盒购自宝生物技术工程(大连)有限公司。

1.3 引物设计 根据GenBank中登录的16株PRRSV全基因组序列，用Oligo 6.0软件经多重比较后，设计8对顺序重叠的特异性引物(如有需要，作者可以提供)。

1.4 病毒的增殖与RNA的提取 将病毒在Marc-145细胞中培养，收获病毒。按TRIzol LS试剂说明书操作方法，提取病毒总RNA。……