宋 丽 金呈强 刘 仿 杜宁超 肖 红 (广东医学院微生物与免疫教研室,湛江524023)

CD4+CD25+Foxp3+T调节性T细胞(regulation T cell,Tr细胞)是维持机体免疫耐受的重要调控者,在自身免疫病中的作用已引起关注。急性特发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura,ITP)患儿外周血中Tr细胞数量的减少及相关细胞因子(IL-10、TGF-β)含量的降低,与急性ITP患儿的细胞免疫失调有关。而IL-2是Th1类细胞因子,IL-2能否促进或抑制Tr细胞的增殖尚未见报道。为探讨ITP患儿Tr细胞数量受细胞因子IL-2的影响状况,我们用流式细胞术和ELISA法分析患儿外周血中Tr细胞及细胞因子IL-2的变化。

1 材料及方法

1.1 研究对象 35例急性ITP患儿系广东医学院附属第一医院和附属湛江中心医院住院病人,急性ITP患儿均符合急性ITP诊断标准,正常对照为30例健康体检者,详细情况见表1。

1.2 试剂和仪器 PerCp-抗人CD3 mAb,FITC-抗人CD4 mAb和APC-Cy7-抗人CD8 mAb,流式细胞检测试剂均购自BD公司。鼠抗人IL-2mAb(mAHuIL-2)为Biosource公司产品。流式细胞仪为美国BD公司产品(型号:FACSCanto),酶联仪为 Biotek公司ELX800型。

1.3 方法

1.3.1 外周血CD4+CD25+Foxp3+T细胞检测 取未刺激的外周肝素抗凝全血50μl后加入10μl的CD4-FITC与CD25-APC cocktail,并于4℃下避光孵育30分钟以标记CD4+CD25+T细胞;经溶血洗涤后使用1 ml Fixatior/Perm缓冲液穿膜45分钟,而后用洗涤缓冲液洗涤后加入1μl正常鼠血清于4℃封闭15分钟,之后直接加入 10μl PE-抗人 Foxp3 mAb,于4℃避光孵育30分钟。经洗涤缓冲液洗涤2次后用300μl染色缓冲液重悬并上FACSCanto流式细胞仪检测。

1.3.2 IL-2的检测 患儿和健康儿童肝素抗凝血5 ml,室温静置 30分钟后,离心分离血浆冻存于-70℃。同批用ELISA法分别测IL-2的含量。

1.4 统计学处理 全部数据均经SAS 8.22统计软件分析。数据用±s表示,两变量的相关程度用直线相关分析法,以P＜0.05为差异有显著性。……