胡朝英 钱 柳 程伟志 黄秋愉 汪 萍 余奇文 张继英 陈雪华 张冬青

(上海交通大学医学院上海市免疫学研究所,上海 200025)

人类γ δ T细胞据其δ链可分为δ 1和δ 2两个亚群,δ 1亚群主要分布于外周器官的粘膜和皮下,在不同的组织部位,其数量不等;δ 2亚群主要存在于外周血中,占T淋巴细胞的0.5%～10%[1,2]。外周血中的γ δ T细胞约占人体总γ δ T细胞的90%以上,且主要取用Vγ 9Vδ 2 TCR基因片段,它能够直接识别抗原分子而不受MHC分子限制,在固有免疫中发挥重要作用[3,4]。近年来γ δ T细胞是免疫学的一个研究热点,国内外学者对其分化和功能进行了广泛深入的研究[5,6],但以动物实验多见,且集中在抗感染和抗肿瘤等方面[7,8],而有关人类γ δT细胞的亚型分化及免疫调节功能的研究尚处早期。本文旨在应用异戊烯焦磷酸(Isopentenyl pyrophosphate,IPP)诱导健康人外周血和新生儿脐带血γ δT细胞扩增,分析其不同亚型的分化格局,从而进一步丰富对人类γ δ T细胞异质性的认识,为深入研究γ δT细胞与自身免疫病关联性提供实验依据,更为应用γ δT细胞干预自身免疫性疾病探索其可能性。

1 材料与方法

1.1 标本来源 本实验所用的人外周血细胞均来自本校健康学生志愿者,共15名,其中男8名,女7名;年龄18～35岁;新生儿脐带血来自妇幼保健院足月自然分娩健康新生儿结扎剪断脐带后脐静脉采血。

1.2 主要试剂 RPMI1640培养基(Gibco,BRL);胎牛血清(FBS,Gibco);IL-2(Roche);异戊烯焦磷酸(Sigma);结核杆菌多肽抗原(Mtb-Ag)由蚌埠医学院李柏青教授惠赠;γ δ TCR,CD4,CD8磁珠分选试剂盒(Miltenyi Biotec);抗 CD3-FITC/PerCP,抗 γ δ TCR-PE,抗 γ 9-FITC,抗 δ 2-FITC/PE,抗 CD80/86-FITC,抗HLADR-PE/PE-Cy5,抗 CD69-PE,抗 CD27-PE,抗CD45RA/RO-PE-Cy5(所有荧光标记单抗均购自BD公司);淋巴细胞分离液(LymphoprepTM,Axis-shield)。……