束晓梅 王晓红 彭 昌 (遵义医学院附属医院儿科,遵义 563003)

空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni,CJ)感染与自身免疫性周围神经病——Guillain-Barre综合征(GBS)关系密切,但机制不清[1]。CJ的脂寡糖(lipooligosaccharide,LOS)结构上存在多种神经节苷脂样结构,可能通过分子模拟发生周围神经免疫性损伤。waaF基因编码庚糖转移酶,催化转移庚糖连接到LOS外核上。理论上说,waaF基因敲除后,变异株丢失LOS上所有的神经节苷脂表位[2],即 waaF变异株不含有模拟神经节苷脂样结构,不能诱导动物产生神经节苷脂抗体及免疫性周围神经损伤。我们用Benjamin博士馈赠的 waaF基因敲除变异株,对照亲代株研究两者诱导动物抗体产生及周围神经损伤的改变,对进一步证实 CJ诱发GBS的分子模拟理论及探索waaF变异株作为减毒活菌苗的可能性具有十分重要意义。

1 材料与方法

1.1 材料 CJ亲代株(菌号HB9313,血清型HS:19)及其waaF变异株由澳大利亚皇家墨尔本研究所Benjamin N Fry博士馈赠。神经节苷脂GM1、GD1a、GD1b、GD3、GT1b 及辣根过氧化物酶标记的IgG抗体购自Sigma公司,亲代株(HB9313)的LOS由本实验室纯化,经SDS-PAGE鉴定纯度达到95%。3月龄日本大耳兔由重庆医科大学动物中心提供,体重2～2.5千克,雌雄不限。

1.2 方法

1.2.1 灭活CJ菌液制备 两菌株均微需氧环境,42℃生长于Skirrow培养基中,变异株需加入终浓度为0.03 μ g/L的卡那霉素。用含甲醛0.1 mol/L的磷酸盐缓冲液(PBS)灭活,3 500 r/min离心30分钟,9 g/L盐水洗涤沉淀物2次,3 500 r/min室温离心10分钟,弃上清液,调至终浓度为3×1012CFU/L的灭活菌液备用。

1.2.2 实验动物分组 日本大耳兔26只,随机分为3个实验组:亲代株组(10只)、waaF变异株组(10只)及对照组(6只)。

1.2.3 免疫方法 初次免疫:取完全弗氏佐……