黄国祥 王玉忠 周文斌 肖 波 吴志国 梁静慧 (中南大学湘雅医院神经内科,长沙 410008)

实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)是一种主要由CD4+T细胞介导的、以中枢神经系统(Central nervous system,CNS)炎性脱髓鞘性为特征的自身免疫性疾病,因其与多发性硬化(Multiple sclerosis,MS)有着相似的临床及病理表现而成为研究MS的理想模型,其具体发病机制目前尚未明确。

Th17细胞是新近发现的辅助性CD4+T细胞,它通过分泌IL-17A(即 IL-17)、IL-17F和TNF-α等因子而发挥促炎作用。IL-17作为IL-17家族的代表性因子,已经发现在EAE中表达升高,IL-17-/-小鼠对EAE不敏感[1]。IL-23是IL-12家族新成员,由p19和p40两个亚基组成,其中p40亚基为IL-12和IL-23两者所共有。研究发现,IL-23对于维持Th17细胞的功能具有重要的作用,而IL-23参与的Th17细胞介导的炎症反应即IL-23/Th17炎症轴被认为在自身免疫性疾病的发生、发展中起了至关重要的作用[2]。

早有研究发现转化生长因子β1(Transforming growth factor beta1,TGF-β1)能减轻MS 的病情[3],但TGF-β1对MS的作用机制仍不清楚。本研究参照Mendel造模方法[4]建立慢性EAE模型并给予外源性TGF-β1,拟观察EAE小鼠病情变化和不同时期IL-23p19、IL-17和IL-6的动态表达,探讨TGF-β1在EAE中可能的作用机制,以期为MS的临床治疗提供指导。

1 材料与方法

1.1 实验动物及主要试剂 72只健康雌性C57BL/6小鼠,清洁级,8～10周,委托中南大学动物学部代为购买。MOG35-55多肽(MEVGWYRSPFSRVVHLY RNGK)由西安美联多肽合成有限公司合成(纯度＞97%);百日咳毒素购自List Biological,Campbell,CA;完全弗氏佐剂购自美国Sigma公司;小鼠IL-17、IL-23、IL-6 ELISA试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司;小鼠 IL-17、IL-23p19、IL-6及内参GAPDH 引物由上海生工技术有限公司合成。GAPDH:Sense:5′-GCTACAGCTTCACCACA-3′,Anti-sense:5′-ACATCTGCTGGAAGGTGGAC-3′,产物大小为107 bp;IL-23p19:Sense:5′-CCAAAGGAGGTGGATAGG-3′,Anti-sense:5′-TGTCAGAGTCAAGCAGGT-3′,产物大小为 402 bp;IL-17:Sense:5′-GGCCAAGGACTTCCTCCA-3′,Anti-sense:5′-CAGCTTTCCCTCCGCATT-3′,产物大小为 211 bp;IL-6:Sense:5′-CTGATGCTGGTGACAACCAC-3′Anti-sense:5′-CAGAATTGCCATTGCACAAC-3′,产物大小为175bp。

1.2 EAE模型的建立 72只C57BL/6小鼠随机分为EAE组、佐剂组、干预组和假干预组。……