赵 鑫 王 宏 向军俭 朱中松 宋其芳 邓 宁

(暨南大学生命科学技术学院抗体工程研究中心,广州 510632)

VEGF作为血管形成和通透性诱导因子[1],其表达水平与原发肿瘤的大小、血管生成、淋巴管转移等多种因素成正相关[2,3],因此已成为抗肿瘤血管新生治疗中理想的靶分子之一。

噬菌体表面展示技术自Smith于1985年首次阐明以来,已得到长足进步,被广泛应用于生物、医药及化学结构分析等领域。噬菌体表面展示的融合蛋白与编码该蛋白的DNA序列直接相关,根据该DNA序列可自我复制的特性,能很容易直观地识别和扩增目的蛋白克隆。并且表达于噬菌体表面的融合蛋白能表现出与其相应天然蛋白一样或相似的功能及特点。本研究通过计算机模拟得到一系列VEGF相关表位序列,用噬菌体展示技术将其展示于噬菌体表面,检测这些多肽在抗肿瘤增殖和抗血管新生方面的效用,从而筛选有明显抗肿瘤、抗血管形成的多肽片段,为抗肿瘤多肽疫苗药物研发打下基础。

1 材料与方法

1.1 材料 原代HUVEC细胞由中山大学中山医学院高国全教授惠赠,高转移细胞B16F10购自南京凯基生物有限公司,B16细胞、pCANTAB5-E、VCSM13、XL1-Blue均系本实验室保存,RPMI1640和DMEM培养基购自Gibco公司,M199培养基购自Hyclone公司,小牛血清购自兰州民海生物有限公司,ECGS、MTT、ECM gel均购自 Sigma公司,Transwell购自Corning公司,T4连接酶购自NEB公司,HindⅢ、NotⅠ以及T载体连接试剂盒购自TaKaRa公司,胶回收、质粒提取试剂盒购自Axygen公司。

1.2 方法

1.2.1 VEGF表位肽载体pCANTAB5-E的构建 根据pCANTAB5-E载体序列以及人VEGF189基因序列设计引物序列(见表1),由上海生物工程技术有限公司合成。……