陈 曼,祝 绚,谭积善,胡启飞,吴民泸,段佳慧,代 娟,赖 翼

(1.成都医学院医学检验系,四川成都610083;2.成都市第九人民医院,四川成都610015;3.成都军区总医院,四川成都610083;4.成都第一制药厂,四川 成都610504)

肺结核病是严重威胁人类健康的重大传染性疾病之一,“是单病因所致的感染性疾病中死亡率最高的疾病”[1],但只要能早期诊断合理用药,绝大多数的结核病人可以治愈。因此提高诊断阳性率和诊断速度对于防治结核病具有重要意义[2]。现有的结核病实验室诊断方法阳性率普遍较低[3]。荧光定量PCR(FQ-PCR)能够快速检出结核杆菌,但是在不同的样品中阳性率差异较大,特别是对于有污染的样品,常常发现有抑制现象[4]。本文通过自制的盐酸胍消化液对样品进行处理,希望提高在不同样品中的结核杆菌的检出率,以期对肺结核病人的早期诊断及治疗。

1 材料和方法

1.1标本来源收集成都医学院附属第一人民医院、成都军区总医院和成都第九人民医院临床疑是肺结核病患者标本185份,男 124例,女61例,年龄在20-75岁之间。标本类型有痰液、血液、尿液、脓液、胸腹水、肺泡灌洗液和心包积液等。

1.2主要仪器中山大学达安基因股份有限公司生产的DA7600型实时荧光定量PCR仪。

1.3主要试剂

1.3.1盐酸胍消化液 自制(5 mol/L盐酸胍,50 mmol/L Tris-CI pH7.5,25 mmol/L EDTA和0.1 mol/Lβ-巯基乙醇)。

1.3.2结核分支杆菌(TB)核酸扩增(PCR)荧光检测试剂盒,结核分支杆菌阳性定量参考欠,购于中山大学达安基因股份有限公司;L-J培养基购于成都飞奥生物技术有限公司。

1.4方法

1.4.1将各种类型的标本分成相同的2份,为对照组,按照医院的常规方法涂片镜检和培养,并按照试剂盒书说明提取DNA,另一份对不同标本处理如下:血液加入等体积的盐酸胍消化液混合,对部分有凝块样品,37°孵育20 min。……