钟加滕,刘 菲,衣豪伟,孙 琳,于慧美,杨冬艳

(1.吉林大学基础医学院病理生理教研室,吉林长春130021;2.吉林大学临床医学七年制;3.吉林大学中日联谊医院,吉林 长春130033)

肾细胞癌(renal cell carcinoma,RCC)是成年人最常见的肾脏恶性肿瘤,而且其发病率仍在逐年增加[1]。肾细胞癌的自然过程极难预料,总的5年生存率很低。Notch信号途径是通过局部细胞间相互作用控制细胞命运的一种途径,它在进化中非常保守,在发育过程的调控中发挥重要作用.本实验对手术获得的肾细胞癌标本Notch信号通路相关受体、配体mRNA的表达水平进行研究,明确Notch与肾细胞癌的关系,为其作为肾癌筛选标志物提供理论依据,揭示肾细胞癌发生发展的可能分子机制,从而提高治疗的合理性和有效性。

1 材料与方法

1.1主要试剂Trizol试剂、RT-PCR试剂盒购自Invitrogen公司;高保真TaqDNA聚合酶、MMV逆转录酶、DNAMarker、DNA凝胶回收试剂盒均购自大连宝生物工程公司;琼脂糖购自北京鼎国生物技术有限公司。引物合成由上海生工生物工程技术服务公司完成。溴化乙锭DEPC购自德国Merk公司;dNTP购自Promega公司;其它常规化学试剂均为分析纯产品。

1.2标本获取与保存超声引导下穿刺活检及手术获得2007年9月至2009年5月到中日联谊就诊并被诊断为肾细胞癌的患者的肾细胞癌标本,将收集好的标本立即放入液氮中保存。

1.3RT-PCR 检测Notch信号通路受体Notch-2、Notch-3和Notch信号通路配体 Jagged-1、Delta-1mRNA水平液氮研磨组织块,用TRIzol试剂提取组织中的总RNA,采用逆转录酶和Oligo d(T)18、dNTP将总 RNA逆转录成 cDNA,之后取 1 μ l进行 PCR(Takara)反应。以GAPDH为内参照,引物序列……