王金河,孙海林,李洪敏,吴雪琼,梁建琴,冯士生,孙 静

(1.解放军第309医院结研所结核二科,北京100091;2.鄂尔多斯二院结核科;3.朝阳区疾病预防控制中心,吉林长春130021)

当前,结核病在世界范围内疫情回升,迄今仍然是危害人类健康的主要传染病。结核病已成为传染病中的第一号杀手和最大的死亡病因之一。为探索结核病控制的新途径,利用BACTEC MGIT 960仪器分析动物实验模型主要脏器的结核分枝杆菌(MT)生长情况,观察MT的MPT64、ESAT6质粒DNA疫苗预防结核病的效力。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1实验动物 BALB/C小鼠由北京药检所动物中心提供。

1.1.2MT强毒株(H37RV)由中国药品生物制品鉴定所提供。

1.1.3质粒 JW4303-MPT64和JW4303-ESAT 6重组表达质粒、宿主菌大肠杆菌DH5a由本院研究室提供,卡介苗由成都生物制品研究所提供。

1.2BACTEC MGIT 960全自动分枝杆菌培养仪及其相关试剂由美国BD提供。

1.3方法

1.3.1实验分组 6～8周龄雌性的 BALB/C小鼠38只,购于北京药检所动物中心,分为五组。A组6只,双侧胫前肌各注射生理盐水0.1 ml;B组6只,缓慢注射50 μ g/50 μ l载体质粒;C 组6只,注射卡介苗 0.1 ml;D 组 10 只 ,缓慢注射 50 μ g/50 μ l重组质粒JW4303-MPT64 DNA;E组10只,注射重组质粒JW4303-ESAT6 DNA(方法同D组)除C组外,其他四组分别于0、3、6周各免疫3次。

1.3.2H37RV MT强毒株(5X106 CFU/ML)攻击小鼠。在9周时每只注射0.5 ml于小鼠腹腔内。攻击一个月后,将每组前3只小鼠杀死。用75%乙醇浸泡小鼠20分钟,开腹取出肺、肝、脾。用无菌生理盐水冲洗,然后放入组织研磨器内研磨。取研磨好的组织悬液0.1 ml加入到0.9 ml生理盐水中混匀,取0.5 ml接种于BACTEC MGIT 7H9培养管中,加入0.8 ml添加剂,放入BACTEC MGIT 960培养仪内进行培养。各组剩余的小鼠被攻击两个月后,将其全部杀死,重复上述操作步骤,用BACTEC MGIT 960培养仪进行培养。……