猪血浆蛋白粉中IgG含量的酶联免疫检测方法研究
2010-06-07刘中勇马孝斌高东微王雅静
饲料工业 2010年15期
刘中勇 马孝斌 高东微 刘 津 王雅静
血浆蛋白粉(Spray-dried Plasma Protein,SDPP)是利用现代生物技术和加工手段,对新鲜血液进行抗凝处理和分离,将血浆从血液中分离出来,再进行压缩和低温保存,然后采取特殊的工艺进行喷雾干燥,最后制成乳白色或浅褐色的粉末状产品[1-2]。由于血浆蛋白粉含有丰富的营养物质,其作为一种新型、高效、安全的功能性蛋白质饲料,在断奶仔猪饲养中已经成为必不可少的蛋白饲料。
血浆蛋白粉目前还无统一质量标准,但已形成业内认可的检测指标,如感官检测、显微镜分析、水溶性检测、常规指标检测、凝胶实验及免疫球蛋白IgG定量检测[3]。其中IgG的检测基层使用的主要是免疫单扩散法,该方法耗时长,一般需要1~2 d才能出结果,重复性也差[3]。而作为国家标准的液相色谱方法由于仪器及检测成本较高,在基层难以推广[4]。因此目前亟需一种快速检测方法解决这个问题。本研究通过制备猪IgG单克隆抗体,进行调试优化,建立了基于间接竞争酶联免疫原理的快速检测方法。
1 实验材料与方法
1.1 试剂
猪IgG、牛IgG、猪乳铁蛋白等参考标准品,弗氏完全和不完全佐剂、细胞培养液等均购自美国Sigma公司;辣根过氧化物酶标记羊抗鼠IgG二抗为博奥森生物公司产品;四甲基联苯胺购自欣经科生物科技公司;其他常用有机试剂、无机试剂均为分析纯,由北京化学试剂公司提供。
1.2 材料和仪器
酶标板条、细胞培养板等(华美生物工程公司),MK3酶标仪(热电公司),振荡器(海门市其林贝尔仪器制造有限公司),细胞培养箱(日本三洋),电子天平(德国赛多利斯),其余为实验室常规仪器。……
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