乙肝血清学标志物与HBV-DNA含量关系的分析
2010-06-07董瑶佳刘晓峰陈雪礼
郭 卉,董瑶佳,刘晓峰,陈雪礼
(1、九江市第一人民医院检验科,江西 九江332000;2、九江市妇幼保健医院,江西 九江 332000)
乙型肝炎是一种严重危害人类健康的传染病,由乙型肝炎病毒感染引起。我国是乙型肝炎病毒感染高发地区,乙肝病毒携带者数量众多。本研究旨在探讨乙肝血清学标志物与HBV-DNA含量之间的关系,了解本地区乙肝感染情况,为乙肝病情的临床判别和疗效评估提供理论参考。
1 资料与方法
1.1 研究对象 选择2009年1月至2009年12月在江西省九江市第一人民医院门诊及住院的患者,要求于一周内进行乙肝五项(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb)及 HBVDNA检验,共选取1020例,年龄8~85岁,其中男652例,女368例。
1.2 观察指标 乙肝五项:HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HbcAb;HBV-DNA 含量。
1.3 检测仪器 科华ST-360酶标仪(上海科华试验科技有限公司);DNX-9620洗板机(北京普朗新技术有限公司);DA-7600 PCR扩增荧光定量检测仪(中山大学达安基因股份有限公司)。
1.4 检测试剂 乙肝标志物检测试剂由北京万泰生物有限公司提供;HBV-DNA检测试剂由广州中山大学达安基因股份有限公司提供。
1.5 检测方法
1.5.1 乙肝五项检测(ELISA法)
1.5.2 HBV-DNA含量检测(荧光定量PCR法)。DNA提取:吸取血清40μl至5ml离心管中,再加入40μl DNA提取液,充分混匀,沸水浴10min(误差不超过1min),转至4℃静置6~8h,10000r/min离心5min;取上清液 5μl进行 PCR反应。 扩增:将点好样的PCR管置于PCR仪,93℃2min预变性,然后按 93℃ 45s→55℃60s,反应 10个循环,再按 93℃30s→55℃45s反应30个循环。每批PCR试验均做阴、阳性对照、临界阳性。检测灵敏度为≥0~500IU/ml,参考范围0~500IU/mL。
1.6 统计学方法 所有数据采用SPSS 13.0统计软件进行分析,多组数据之间的比较采用K-W检验,两组数据之间采用SNK检验,HBeAg阳性和HBV-DNA阳性的相关性采用Spearman等级相关。……
