李晓峰 孙伟芬 黄 苹 刘 玉, 黄伟贤 苏 齐 陈 强 叶韵斌

细胞因子诱导杀伤细胞（cytokine induced killers，CIK）是将人外周血单个核细胞在体外用多种细胞因子共同培养而获得的一群异质细胞群，因其兼具有T淋巴细胞强大的抗瘤活性和NK细胞的非主要组织相容抗原（MHC）限制性杀瘤特点，从而成为肿瘤过继免疫治疗的重要手段之一[1]。已有研究提示，CIK细胞的杀伤机制可能是由NKG2D介导的细胞毒效应，即通过CIK细胞上的活化性受体-NKG2D与肿瘤细胞上相应的配体（NKG2DL）的相互作用，启动杀伤效应[2]。本研究通过在常规培养体系中加入IL-15诱导CIK细胞，并选择细胞膜高表达MHCⅠ链相关分子A （MHC classⅠchain-related gene A，MICA）和不表达MICA的两种乳腺癌细胞作为靶细胞，初步观察IL-15对CIK细胞NKG2D的表达及体外杀伤活性的影响，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 细胞和主要试剂

人乳腺癌细胞株SKBr-3、MDA-MB-231（购自上海细胞所）本室常规培养。我们之前研究表明，MDA-MB-231细胞膜高表达MICA，而SKBr-3细胞膜不表达MICA[3]。

淋巴细胞分离液（Ficoll，相对密度1.077，中国医学科学院天津血液研究所），D-PBS及人淋巴细胞培养液KBM-551（日本Takara公司），IL-1α（美国Peprotech公司），IL-2（双鹭制药有限公司），IFN-γ（丽珠生物有限公司），IL-15（美国Amoytop Biotech公司），CD3单抗、CD3-FITC、CD4-PE、CD8-PE、CD56-PE、purified-NKG2D单抗，NKG2D-APC及羊抗鼠IgG1-APC（均美国BD公司）。胰蛋白酶（美国Sigma公司），胎牛血清（Hyclone公司），RPMI-1640、MEM、DMEM培养基（美国Gibco公司），MTT（美国Biomo公司）。

1.2 CIK细胞的制备

共有15例健康供血者的外周血纳入研究，将每例健康供血者的外周血分为2份，分别用于常规培养组（常规组）及常规培养+IL-15组（IL-15组）的培养，每组15份。参照并稍调整本实验室建立的CIK细胞培养方法[4]，将抗凝外周血用淋巴细胞分……