肖淼生 ，叶立红 ，姜华军 ，郭 鹏

（1.武汉大学药学院，湖北 武汉 430072； 2.郧阳医学院附属十堰市太和医院，湖北 十堰 442000）

氯霉素二甲亚砜溶液是医院自制的一种外用溶液剂[鄂药制字（2001）第GX02-040号]，有抑菌、消炎作用，临床主要用于治疗毛囊炎。氯霉素的含量测定方法有旋光法[1]、紫外分光光度（UV）法[2]、高效液相色谱（HPLC）法[3]等。笔者采用HPLC法和UV法分别测定了氯霉素的含量，并将两种方法进行了比较，报道如下。

1 仪器与试药

Dionex Ultimate 3000型高效液相色谱仪（戴安公司）；Chromeleon色谱工作站（Dionex公司）；TU-1901型紫外-可见分光光度仪（北京普析通用公司）；FA2004型电子天平（上海精密科学仪器有限公司）；TP-150型超声波震荡器（北京鹏程公司）。氯霉素对照品（批号为130555-200602，中国药品生物制品检定所）；氯霉素二甲亚砜溶液（批号分别为20071013，20071215，20080228，本院制剂室）；甲醇为色谱纯，水为注射用水，其他试剂为分析纯或色谱纯。

2 方法与结果

2.1 高效液相色谱法

2.1.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Phenomenex Luna C18（2）不锈钢柱（250 mm ×4.6 mm，5μm）；流动相：甲醇 - 水（40 ∶60）；流速：1 mL/min；进样量：10 μL；检测波长：278 nm；灵敏度：0.01 AUFS；柱温：30℃。在上述色谱条件下，对照品溶液、供试品溶液及阴性对照品溶液色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

2.1.2 溶液制备

精密称取氯霉素对照品适量，用甲醇稀释成含氯霉素1 g/L的溶液，摇匀，用0.45 μm的微孔滤膜过滤，得对照品溶液。精密吸取氯霉素二甲亚砜溶液2 mL，置50 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，0.45 μm的微孔滤膜过滤，得供试品溶液。照氯霉素二甲亚砜溶液制备工艺，制成不含氯霉素的阴性样品溶液，精密吸取该溶液2 mL，置50 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，0.45 μm的微孔滤膜过滤，得阴性对照品溶液。

2.1.3 方法学考察

线性关系考察：取对照品溶液适量，分别用甲醇配成含氯霉素0.1，0.2，0.4，0.6，0.8 g/L 的溶液，进样，记录色谱图，测定峰面积。以峰面积为纵坐标（Y）、质量浓度为横坐标（X）绘制标准曲线，得回归方程 Y=309.704 7 X-2.123 7，r=0.999 9（ n=5）。结果表明，氯霉素质量浓度在0.1～0.8 g/L范围内与峰面积有良好的线性关系。

精密度试验：取质量浓度为0.4 g/L的对照品溶液，重复进样6次，测定氯霉素的峰面积。结果的 RSD=0.57%（n=6），表明仪器精密度良好。

重现性试验：取样品（批号为20071215）5份，依法重复平行测定。结果氯霉素的平均含量为标示量的100.2%，RSD=0.82%（n=5），表明方法重现性好。

稳定性试验：精密吸取同一供试品（批号为20071215）溶液，室温放置，10 h内依法每隔2 h测定1次，结果氯霉素含量的 RSD=0.38%（n=6），表明供试品溶液在10 h内稳定。再每隔1 d测定峰面积1次，共3 d，其 RSD为0.86%，表明供试品溶液在3 d内相对稳定。

加样回收试验：取阴性对照品溶液共3份，分别精密加入氯霉素对照品适量，按供试品溶液制备方法制备溶液，依法进行含量测定。结果见表1。

表1 HPLC法加样回收试验结果（n=9）

2.2 紫外分光光度法2.2.1 溶液制备

按2.1.2项下对照品溶液的制备方法制得对照品溶液。精密量取氯霉素二甲亚砜溶液1 mL，置50 mL量瓶中，用水稀释至刻度，再取10 mL置100 mL量瓶中，用水稀释至刻度，即得供试品溶液。

2.2.2 方法学考察

线性关系考察：取上述对照品溶液适量，分别用甲醇配成含氯霉素 0.1，0.2，0.4，0.6，0.8 g/L 的系列溶液，照 UV 法测定。以质量浓度（Y）对吸收度（X）进行线性回归，得回归方程 Y=34.2224X-0.629 3，r=0.999 9。结果表明，氯霉素质量浓度线性范围为0.1～0.8 g/L。

精密度试验：取质量浓度为0.4 g/L的对照品溶液，连续进样5次。结果吸收度的 RSD为0.83%（n=5）。

稳定性试验：取同一供试品溶液，室温放置，每隔1 d测定，共3 d。结果的 RSD为1.51%（n=3），表明供试品溶液在3 d内相对稳定。

加样回收试验：取2.1.2项下阴性对照品溶液共3份，分别精密加入一定量的氯霉素对照品，按供试品溶液制备方法制备溶液，摇匀，依法测定并计算回收率。结果见表2。

2.3 样品含量测定

取3批氯霉素二甲亚砜样品溶液，分别照上述两种方法项下供试品溶液制备方法制备相应的溶液，各自依法测定，分别计算其含量。结果见表3。

表2 UV法加样回收试验结果（n=9）

表3 两种方法样品含量测定结果比较（n=3）

3 讨论

用HPLC法测定氯霉素的含量，文献报道涉及几种不同的流动相[3-5]。由于甲醇-水（40∶60）配制简单、分离效果较好，故以此为流动相。称取适量氯霉素对照品，置50 mL量瓶中，用水稀释至刻度；按样品比例同法配制二甲亚砜溶液，稀释倍数同氯霉素。在TU-1901型全自动紫外分光光度计上，分别以水为空白，在200～400 nm波长范围内扫描，氯霉素最大吸收波长为278 nm，而在此波长处二甲亚砜对氯霉素含量测定不产生干扰。故选择278 nm为检测波长。

本研究采用HPLC法和UV法测定氯霉素二甲亚砜溶液中氯霉素的含量，样品可以不经过提取分离和预处理，方法简单可行，结果准确可靠，表明两种方法都可以作为该制剂的含量测定方法，而本试验建立的HPLC法测定氯霉素二甲亚砜溶液中氯霉素的含量尚未见文献报道，值得推广。由于医院制剂通常品种多而量少，采用HPLC法测定制剂含量虽然准确，但操作较为费时；UV法操作简便，对使用者要求不高。因此，可将UV法用于制剂半成品的含量控制，而将HPLC法用于成品的含量控制，这样既可保证制剂质量，也可缩短制剂的检验时间。

[1]马慧平，郝丹力.氯霉素苯海拉明二甲基亚砜溶液的含量测定[J].兰州医学院学报，1994，20（1）：23.

[2]中华人民共和国卫生部.中国医院制剂规范·西药制剂[M].第2版.北京：中国医药科技出版社，1995：159-160.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[M].北京：化学工业出版社，2005：776.

[4]曹宁芳，刘鹏鸣.高效液相色谱法测定氯霉素注射液的含量[J].西北药学杂志，2007，22（4）:167-168.

[5]刘晓菁，魏光榕.HPLC同时测定氯强滴眼液中氯霉素及醋酸泼尼松龙的含量[J]. 海峡药学，2007，19（3）:57-58.