万 李

（重庆医科大学附属第二医院，重庆 400010）

健脑颗粒由淫羊藿、枸杞子、川芎等多味药材组成，具有益气养血、滋阴生津的功效，适用于气血两亏、阴津不足所致失眠多梦、神疲健忘、头晕头痛等症。为有效控制其质量，笔者对该产品的质量标准进行了研究，用薄层色谱（TLC）法对制剂中的川芎、枸杞子进行定性鉴别，对淫羊藿的有效成分淫羊藿苷的含量采用高效液相色谱（HPLC）法进行测定，现将结果报道如下。

1 仪器与试药

2690/2996型高效液相色谱仪（美国Waters公司）；BPQⅠ型薄层板自动铺板器（重庆南岸新力实验电器厂）；三用紫外分析仪（上海顾村电光仪器厂）。淫羊藿苷对照品（批号为110737-200312）、枸杞子对照药材、川芎对照药材均由中国药品生物制品检定所提供，健脑颗粒为市售品，乙腈为色谱纯，水为去离子水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别[1]

枸杞子：取本品及按本品工艺制备的缺枸杞子的阴性对照品各5 g，分别加水15 mL，超声处理10 min，过滤，滤液用乙酸乙酯提取2次，每次10 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，分别得到供试品溶液及阴性对照品溶液。取枸杞子对照药材0.5 g，加水 35 mL，加热回流 15 min，滤过，滤液用乙酸乙酯15 mL提取，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，即得枸杞子对照药材溶液。照TLC法[2005年版《中国药典（一部）》附录ⅥB]试验，吸取上述3种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶H薄层板上，以苯-乙酸乙酯-甲酸（8 ∶7 ∶0.8）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。结果供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点，阴性对照品溶液色谱无相同斑点出现（见图1 A）。

图1 薄层色谱图

川芎：取本品及按本品工艺制备的缺川芎的阴性对照品各5 g，分别加水15 mL，超声处理10 min，过滤，滤液用乙酸乙酯提取2次，每次10 mL，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，分别得到供试品溶液和阴性对照品溶液。取川芎对照药材1 g，分别加三氯甲烷20 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1 mL使溶解，即得川芎对照药材溶液。照TLC法[2005年版《中国药典（一部）》附录ⅥB]试验，吸取上述3种溶液各6 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯（4∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。结果供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点，阴性对照品溶液色谱无相同斑点出现（见图1 B）。

2.2 淫羊藿苷含量测定

2.2.1 色谱条件

色谱柱：Symmetry C18柱（200 mm ×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈 -水（30 ∶70）；流速：0.8 mL/min；检测波长：270 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。在此色谱条件下的色谱图见图2。

图2 高效液相色谱图

2.2.2 溶液制备

精密称取本品2 g，加水20 mL，超声处理20 min，滤过，滤液通过聚酰胺（3 g）柱，用70 mL水洗涤，弃去洗涤液，再用乙酸乙酯60 mL洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，蒸干，残渣用甲醇溶解并置10 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。精密称取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.1 mg淫羊藿苷的溶液，即得对照品溶液。取按处方比例及制备工艺制备的不含淫羊藿的阴性样品适量，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.2.3 方法学考察

线性关系考察：精密吸取对照品溶液 2，6，8，10，16 μL，按上述色谱条件进样测定，以测得峰面积为纵坐标、淫羊藿苷进样量（μg）为横坐标进行线性回归，得回归方程 A=1 812 181.5 C-19 436，r=0.999 9。结果表明，淫羊藿苷进样量在0.20～1.60 μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

精密度试验：精密吸取对照品溶液10 μL，重复进样5次，测得峰面积值的 RSD=1.04%，表明仪器精密度良好。

稳定性试验：精密量取样品1份，照拟订的供试品溶液制备方法和测定条件，分别于 0，4，8，10，16 h进样，淫羊藿苷峰峰面积的RSD为1.12%，结果表明供试品溶液在16 h内稳定性良好。

重现性试验：精密称取同一批样品5份，按供试品溶液制备方法制备溶液，按上述色谱条件进样10 μL测定，计算含量，结果的RSD=1.22%。

加样回收试验：精密称取已知含量的同一批样品6份，分别精密加入淫羊藿苷对照品，按供试品溶液制备方法制备溶液，按上述色谱条件进样测定，计算回收率。结果见表1。

2.2.4 样品含量测定

按供试品溶液制备方法操作，分别将3批样品制成供试品溶液，并按上述色谱条件进样测定，以外标法计算淫羊藿苷含量。结果批号为070401，070402，070403的3批样品中，每5 g样品分别含淫羊藿苷 2.45，2.76，2.88 mg。

表1 淫羊藿苷加样回收试验结果（n=6）

3 讨论

本制剂由多味药材提取制成，样品成分复杂，对供试品溶液的不同提取方法（正丁醇提取法、大孔树脂纯化法、聚酰胺纯化法）进行比较，结果有的干扰较大，有的含量偏低，而聚酰胺法操作简便，含量测定结果比较满意。本品的薄层色谱鉴别均作了阴性对照试验，结果表明各薄层斑点不受样品中其他各药的干扰，专属性较强，简单易行，TLC法可作为本品的定性检测方法。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：化学工业出版社，2005：229，附录 31.