邓雨修，招丽婵，苏润环，潘永飞，杨明柳，吴德铭，李春梅，宋延华

(广东温氏食品集团有限公司温氏研究院，广东 新兴 527400)

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)是由PRRS病毒(PRRSV)引起的一种严重危害养猪业的病毒性传染病，其临床症状主要表现为母猪繁殖障碍和仔猪呼吸系统疾病。该病自1987年美国首次报道以来，世界上很多国家都有相继报道[1-3]。郭宝清等于1996年首次在国内分离到PRRSV，证实了该病在中国的存在[4]。自2006年夏季以来，高致病性PRRSV变异株引起的PRRS的暴发与流行，给我国养猪业造成巨大的经济损失[5]。对分离的PRRSV全基因序列测序分析表明，病原的基因序列变化主要是在Nsp2区缺失了30个氨基酸，其中仅在一段基因序列中就连续缺失了29个氨基酸[6-8]。本研究在临床流行病学研究的基础上，分离病毒，经基因序列分析及人工猪体感染发病试验，鉴定为新缺失表型高致病性PRRSV美洲型毒株，补充和丰富了毒株的基因组信息数据，为深入开展该毒株的遗传变异分析及生物学特性研究奠定了基础。

1 材料和方法

1.1 病毒株及主要试剂 PRRSV TM分离株由本实验室分离并保存；PRRSV TP变异株为本实验室分离、鉴定并保存(EU864233)；Ingelvac PRRS MLV为Boehringer Ingelheim公司产品；Marc-145细胞由本实验室保存；pMD18-T、TOP10菌株、PrimeSTAR®HS DNA Polymerase、PrimeScriptTMReverse Transcriptise(RNase H-)、DNA Marker DL15000 购 自TaKaRa公司；TRIzol Reagent购自Invitrogen公司。

1.2 引物设计 参照GenBank中登录的Ingelvac PRRS MLV(AF066183）、TP(EU864233)等毒株基因序列及苏润环等发表的序列[9]，设计三对引物(表1)，由宝生物工程(大连)有限公司合成。

表1 PRRSV Nsp2基因检测及鉴别扩增引物Table 1 Primes of detection and identification the PRRSV Nsp2 gene

1.3 病料的采集与处理 参照文献[10]方法进行。

1.4 病毒分离 病毒悬液上清接种单层Marc-145细胞，37℃吸附1 h后，用含2%胎牛血清的DMEM培养液培养5 d～7 d，当70%～80%出现细胞病变(CPE)时收集病毒液并盲传3代。……