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猪圆环病毒2型分离株优势基因型分析与检测

2010-05-21郭抗抗张彦明刘华科宁蓬勃王晶钰

中国预防兽医学报 2010年10期
关键词:差异检测

郭抗抗,张彦明,张 红,刘华科,宁蓬勃,王晶钰

(西北农林科技大学 动物医学院,陕西 杨凌 712100)

猪圆环病毒(Porcine circovirus,PCV)是圆环病毒科(Circoviridae)、圆环病毒属(Circovirus)成员,为环状、无囊膜、单链DNA病毒[1]。按致病性可将PCV分为2个型,即无致病性的PCV1和致病性的 PCV2[2]。PCV2是猪圆环病毒相关疾病(Porcine circovirus associated disease,PCVAD)的病原,可以引起以断奶仔猪多系统衰竭综合征(Postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)为代表的多种疾病,对养猪业的危害严重[3]。研究表明,根据基因组序列的差异将PCV2分为2个主要的型(群),即PCV2A和PCV2B[4-5]。PCV2A基因组全长为1768 bp,PCV2B为1767 bp,两者主要的差异位于ORF2区域,是由1040位(存在于ORF2)核苷酸的缺失或插入造成的。PCV2B在ORF2中有一段序列1486-TCA/AAC/CCC/CG,而PCV2A中序列则为ACC/AAC/AAA/AT,这是2个基因型的最大差异区域。有研究表明PCV2A和PCV2B致病性不同,PCV2B是造成近年来猪圆环病毒病在全球许多国家,特别是在北美地区暴发流行的主要原因,Carman[6]、Gagnon[5]和 Cheung[7]等都先后在研究中发现了PCV2B分离株大量增加的现象。

我国也是受PCV2危害严重的国家之一,国内有学者对PCV2分离株的基因型进行了检测分类,认为目前国内猪群中也是以PCV2B型感染为主[8],但在PCV2基因型的变化和当前主要流行基因型的分析方面可参考的资料有限。本研究对1999年~2009年GenBank登录的PCV2分离株的基因型变化进行了分析。同时,建立了PCV2A和PCV2B PCR检测方法,并对陕西省杨凌地区收集的部分病料的PCV2进行了检测和基因型分析。

1 材料和方法

1.1 病毒株与病料 PCV2A和PCV2B的PK-15细胞培养物,由西北农林科技大学动物医学院重大动物疾病防治与畜产品安全实验室保存;病猪组织病料(肾脏、脾脏、肺和淋巴结)采自陕西省杨凌地区3个猪场的17头患病仔猪和肥育猪;……

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