谢 芳，韩文瑜，杜崇涛，周 靓，杨舒心，雷连成*

(1.吉林大学畜牧兽医学院，吉林 长春 130062；2.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室，黑龙江 哈尔滨 150001)

猪传染性胸膜肺炎(Porcine contagious pleuropneumonia，PCP)是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae，APP)引起，以胸膜肺炎和出血性坏死性肺炎为特征，一种高度传染性、致死性呼吸系统疾病[1]，呈世界性分布，给养猪业造成重大经济损失。根据荚膜多糖和脂多糖抗原性的不同将APP分为15个血清型[2]，其中血清型1、5、9和11毒力最强，其他血清型如3型和6型的毒力较低[3]。APP各血清型间的致病性和免疫原性有明显差异，没有或仅有较弱的交叉反应，导致不同血清型间缺乏交叉保护力[4]。由于APP致病机理尚不明确，全基因组序列未完全测定，APP各血清型间的差异基因鲜有报道，因此，无法确认导致APP各血清型间感染和致病性差异的原因，使该菌引起的PCP的防制十分困难。

代表性差异分析(Representational difference analysis，RDA)是一种鉴定、分离差异基因的技术。该技术将差减杂交方法与PCR技术相结合，应用识别4个碱基的内切酶充分消化测试组(Tester)和驱动组(Driver)的DNA，PCR富集两组DNA片段，经过3次差减杂交，去除共有基因，利用PCR技术富集测试组中特异基因的DNA片段。该技术与其他消减杂交技术相比，是一种相对高效、敏感和特异的差异基因筛选方法，应用广泛[5]。本研究以APP血清1型和5型为研究对象，利用RDA技术，分别筛选APP血清1型和5型的差减基因，为APP不同血清型间基因差异的研究奠定基础，同时，也为APP感染致病机理的研究及新型疫苗的开发提供依据。……