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应用毛发PCR法检测猕猴TRIM5基因序列CypA转座子插入的TRIMCyp嵌合基因型

2010-05-21汤艳东于长青刘晓明崔多英饶军华吕晓玲郑永辉周建华

中国预防兽医学报 2010年11期
关键词:检测

汤艳东,于长青,刘晓明,崔多英,那 雷,饶军华,季 芳,吕晓玲,郑永辉,周建华*

(1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室,黑龙江 哈尔滨 150001;2.广东省昆虫研究所华南灵长类研发中心,广东 广州 510260;3.北京动物园,北京 100044;4.东北农业大学生命科学学院,黑龙江 哈尔滨 150030;5.Microbiology and Molecular Genetics,Michigan State University,MI48824,USA)

Tripartite motif protein 5-α (TRIM5α)为一种组成型表达的胞浆蛋白。TRIM5α结合逆转录病毒的衣壳蛋白(Capsid,CA),主要限制病毒进入胞浆后的脱壳,并将TRIM5α-CA靶向于蛋白酶体而降解[1]。TRIM5α同源基因存在于灵长类动物中[2-3]。在一些猕猴属灵长类动物中,TRIM5基因座发生天然的CypA转座子插入突变,产生TRIM5α-CypA嵌合基因(TRIMCyp)。这种插入突变使TRIM5α结合CA结构域的构象发生变化,失去了限制HIV-1复制的作用[4]。利用TRIMCyp基因型宿主,可使HIV-1较易突破宿主限制性,为研究逆转录病毒跨种间传播和建立新型艾滋病动物模型提供独特平台。

猕猴属的食蟹猴和恒河猴是研究艾滋病的主要非人灵长类模型动物。国外报道在这两种猴中已发现了TRIMCyp基因突变个体,却尚未在中国恒河猴中找到TRIMCyp基因型。国内亦未见食蟹猴携带TRIMCyp基因的研究报道。因此,有必要开展中国猕猴属TRIMCyp基因存在情况调查,为艾滋病疫苗免疫保护性评价和治疗药物筛选提供可靠易感实验动物的战略资源储备。本研究建立了从动物毛发中检测TRIMCyp基因的PCR方法。

1 材料和方法

1.1 实验材料 平顶猴、食蟹猴毛发取自华南灵长类研究开发中心;恒河猴毛发为实验室提供,毛发样品于-20℃保存;毛发基因组提取试剂盒DNA IQTMSystem购自Promega。……

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