付 媛，卢福庄，石团员，顾 昀，俞国乔，陆国林，张雪娟*

(1.浙江省农业科学院畜牧兽医研究所，浙江 杭州 310021；2.浙江省畜牧兽医局，浙江 杭州 310020)

日本血吸虫病是一种危害严重的人畜共患病，可引起肝脏、肠道以及其他器官的损伤，严重时导致宿主死亡。血吸虫病的诊断在家畜血吸虫病防治中具有重要的作用，寻找制备和纯化较方便的高敏感性、特异性诊断抗原一直是人们研究的重点。基因重组抗原因其具有这些特点而备受关注。随着分子生物学的发展，通过人工合成或重叠延伸等方法将几个不同来源的基因片段相互连接，构成不同蛋白质之间的融合体，可能体现所有来源蛋白质的活性和功能，甚至可能获得协同效应[9]。目前，日本血吸虫(Schistosoma japonicum)重组蛋白已经用于家畜日本血吸虫病的诊断研究。膜相关蛋白Sj22.6ku和Sj23大亲水区多肽(LHD-Sj23)都具有良好的抗原性，已应用于日本血吸虫的免疫学诊断[1-4]。Sj22.6ku抗原基因是由Stein等从曼氏血吸虫cDNA文库中筛选出来，并证实其编码蛋白分子存在于童虫和成虫表膜[5]。Davern等从菲律宾株日本血吸虫文库中获得Sj23基因，并证实Sj23抗原与人的一些膜蛋白结构相似[6]。Sj23抗原基因全长片段原核表达困难，而LHD-Sj23已在pGEX载体系统中与GST融合表达[3]，并应用于牛羊血吸虫病的诊断[4]。由于LHD-Sj23片段只有62个氨基酸，理论上其大小约为6.7 ku，单独表达的蛋白不利于纯化和后续操作。本研究利用重叠延伸PCR技术对这两个基因片段进行融合，将构建的重组表达质粒转入E.coli RosettaDE3中表……