丁兆凤，汤 炜，佟春玉,，陈龙欣，周 雪，徐菲一，朱战波，崔玉东,*

(1.黑龙江八一农垦大学动物科技学院，黑龙江 大庆 163319；2.黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院，黑龙江 大庆 163319)

奶牛乳房炎是造成养牛业重大的经济损失的一种多发病。研究证实，金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是引起奶牛乳房炎最主要的致病菌[1]。四环素是治疗细菌感染的常用药，但耐药性问题不容忽视[2]。S.aureus对四环素的耐药性一直是人们关注的问题，近几年来有关人医的耐药性研究较为广泛，但牛源S.aureus四环素耐药性研究的报道甚少。本实验对奶牛乳房炎中分离的26株S.aureus四环素耐药性进行研究，为了解对四环素耐药机制和有效防控牛源性S.aureus感染提供参考。

1 材料和方法

1.1 菌株S.aureus分离株：HLJ1、HLJ3、HLJ4、L5-2、HS-2、HS-4、Z1、Z3、Z4、AT、ZJK-1、HLJ23-1、WH-1、SH-1、SH-3、SH-4、SH-5、SH-6、SH-7、SH-8、SH-10、SH-11、SH-12、SH-14、SH-17和SH-18为近年来从湖北、河北、天津、内蒙古、黑龙江等地区牛场乳房炎病牛奶样中分离获得，由本实验室保藏。参考菌株：S.aureusATCC25923和ATCC29213购自杭州天和微生物试剂有限公司。

1.2 主要试剂 TSB培养基购自BD公司；2×EasyTaqPCR SuperMix、DNA Marker购自北京全式金公司；MHA琼脂和MH肉汤培养基购自青岛海博生物公司；利血平购自Sigma公司；四环素药敏纸片(30 μg)购自杭州天和微生物试剂有限公司。

1.3 四环素耐药表型检测 采用NCCLS推荐的K-B纸片扩散法(Kirby-Bauer)和常量肉汤法测定MIC值，以S.aureusATCC25923和ATCC29213为质控菌株。试验操作及结果判定均参照美国临床试验室标准化委员会(NCCLS)2003年版标准[3]。

1.4 抑制剂的逆转试验 制备含有泵抑制剂利血平和四环素的MH肉汤待用(利血平的终浓度为20 μg/mL)，以测定其是否对四环素药物的体外抗菌活性有影响。……