鄢 进

(长江大学医学院，湖北 荆州 434023)

淫羊霍苷抗胃癌转移机制的研究

鄢 进

(长江大学医学院，湖北 荆州 434023)

目的：探讨淫羊霍苷抑制胃癌细胞系AGS粘附和移动的作用及机制。方法：不同浓度淫羊霍苷作用AGS细胞24h后，粘附实验检测细胞粘附率，划痕损伤实验检测迁移速度。结果：2、4、8、12、16μg/ml淫羊霍苷处理24h后，AGS细胞粘附率分别为73.65%、46.24%、43.28%、41.59%和20.36%，总体呈下降趋势，4μg/ml组与2μg/ml和16μg/ml组比较差异有显著统计学意义(Plt;0.01)，与8μg/ml和12μg/ml组比较差异无统计学意义(Pgt;0.05)。4μg/ml淫羊霍苷处理24 h后AGS细胞迁移速度明显降低(Plt;0.01)。结论：淫羊霍苷通过抑制AGS细胞粘附和运动来发挥对肿瘤转移的抑制作用。

淫羊霍苷；AGS细胞；转移

肿瘤细胞的粘附性和运动性是肿瘤转移的重要因素。笔者通过观察淫羊霍苷对胃癌细胞系AGS粘附和移动能力的影响，探讨淫羊霍苷抗肿瘤的作用及可能机制。

1 材料与方法

1.1材料淫羊霍苷购自中国药品生物制品检定所，RPMI-1640培养基购自Hyclone公司，小牛血清购自Gibco公司，AGS细胞株由三峡大学提供。

1.2方法

1.2.1细胞培养 AGS细胞株用含10%小牛血清RPMI 1640培养液(含100mg/L青霉素和链霉素)培养并置于37℃，5 %CO2饱和湿度的培养箱内备用。

1.2.2粘附率测定 粘附实验采用MTT微量酶反应比色法定量粘附细胞数，取96孔培养板，每孔加入Ⅰ型胶原溶液50μl，置37℃、5%CO2孵箱孵育1h，PBS洗2次，加入3%牛血清白蛋白0.2ml，孵育2h，PBS再洗2次，包被备用。取不同浓度(0、2、4、8、12、16μg/ml)淫羊霍苷处理24h的AGS细胞，经洗涤、消化后用含1%小牛血清PRMI 1640液稀释，调细胞浓度为8×105个/ml，分别加入到处理后的96孔板，100μl/孔，每组平行设5个复孔, 37℃、5%CO2条件下温育60min，温育结束后弃去各孔培养液，PBS冲洗除去未粘附细胞，弃PBS后加MTT使用液(无血清RPMI 1640溶解，1mg/ml)，50μl/孔，CO2箱温育3h，吸弃MTT使用液，每孔加DMSO 150μl，静置10min 后，酶标仪测各孔570nm光密度(D)值。以0μg/ml淫羊霍苷组为对照组，粘附率按以下公式计算：

粘附率=实验组D值/对照组D值×100%

1.2.3迁移速度测定 划痕损伤实验，用含10%小牛血清RPMI 1640培养液调AGS细胞浓度为2×105个/ml，于96孔板中每孔加细胞悬液200μl(重复5 孔)，待细胞长成单层换含1%小牛血清的RPMI 1640培养液同步化12h，划“︱”字形划痕，PBS冲洗，对照组加培养液，实验组加含4μg/ml苦参碱培养液，拍照，37℃，5%的CO2培养箱培养24 h后再拍照，测迁移距离[1]，按以下公式计算迁移速度：

迁移速度=迁移距离/迁移时间

2 结果

注：与2μg/ml组比较，#P lt; 0.01；与 4μg/ml组比较，◆Plt;0.01。图1 淫羊霍苷对AGS细胞粘附性的影响

2.1淫羊霍苷对AGS细胞粘附性的影响经不同浓度(0、2、4、8、12、16μg/ml)淫羊霍处理24h后，AGS细胞在Ⅰ型胶原上粘附60min时，其粘附率随浓度的增加呈降低趋势(见图1)。其中4μg/ml淫羊霍苷组的粘附率为46.24%，2μg/ml组为73.65%，两组比较差异有显著统计学意义(Plt;0.01)；8μg/ml组和12μg/ml组分别为43.28%和41.59%，与4μg/ml淫羊霍苷组比较差异无统计学意义(Pgt;0.05)，16μg/ml组为20.36%，与4μg/ml淫羊霍苷组比较，差异有显著统计学意义(Plt;0.01)，因此4μg/ml为淫羊霍苷最佳浓度组。

2.2淫羊霍苷对AGS细胞迁移的影响按文献[1]方法，测定24h内AGS细胞迁移距离，并计算其迁移速度。对照组的迁移速度为(2.62±0.06)μm/h，实验组(淫羊霍4μg/ml)为(0.84±0.03)μm/h，两者差异有显著统计学意义(Plt;0.01)(见图2)。

A1、A2为对照组处理0h和24h；B1、B2为淫羊霍苷(4μg/ml)处理0h和24h图2 淫羊霍苷对AGS细胞迁移的影响(×100)

3 讨论

已有研究报道淫羊霍苷类药有抑制肿瘤增殖、诱导分化和凋亡、抗肿瘤浸润和远处转移、抑制肿瘤新生血管形成、减轻致肿瘤炎症和抑制肿瘤耐药性、减低化疗不良作用、增强肿瘤宿主免疫等功能[2-4]。

本实验观察不同浓度淫羊霍苷处理24h后，AGS细胞在Ⅰ型胶原上粘附率变化的规律。结果显示，随着淫羊霍苷浓度的增加，AGS细胞粘附率呈降低趋势，且出现细胞死亡的现象，表明淫羊霍苷能够有效地抑制AGS细胞粘附，可能触发细胞的凋亡，其中4μg/ml淫羊霍苷是最佳浓度，和国内的一些研究结果相吻合[4]。随后，在划痕损伤实验中，我们进一步观测到4μg/ml淫羊霍苷对AGS细胞的运动有显著抑制效应。

综上所述，实验结果表明淫羊霍苷能抑制AGS细胞的粘附和移动，对于临床上治疗胃癌的转移具有一定的研究前景。

[1]梁光波，张国平，金惠铭，等. 体外定量测定细胞迁移方法的建立及应用[J]. 中国病理生理学杂志，2004，20(2) ：175-179.

[2]崔新颖，崔新羽，张成义，等. 淫羊霍苷对免疫增强作用的实验研究[J]. 北华大学学报(自然科学版)，2008，9(3) ：422-424.

[3]王大光，朱文元，马慧军，等. 淫羊藿苷等6种中药单体抑制Cloudman S91黑素瘤细胞株黑素合成的研究[J]. 临床皮肤科杂志，2004，33(4)：202-205.

[4]章志红，舒虹，林明宝，等. 淫羊霍苷诱导肝癌SMMC-7721细胞调亡的实验研究[J]. 实用临床医学，2006，7(11) ：1-5.

[编辑] 一 凡

2009-05-26

鄢进(1981-)，男，湖北石首人，助教，从事生理学教学与研究工作。

10.3969/j.issn.1673-1409(R).2009.03.006

R735.2

A

1673-1409(2009)03-R014-02