张常锁，曹剑，陈君，刘强德，张金凤，王马军，吕鲁杰，贺笋

（1.天康生物制药有限公司 乌鲁木齐 830011；2.北京标驰泽惠生物科技有限公司 北京 102629）

口蹄疫疫苗属于国家强制免疫疫苗，国家和WOAH 均规定了相应的检测方法[1]，有些方法操作程序较为复杂，耗时较长。目前国内牛群免疫范围较广，普免力度大。在牛、羊口蹄疫疫苗的动物评估过程中，主要使用液相阻断ELSIA 方法筛选口蹄疫血清抗体≤23 的实验牛[2-6]。目前国内口蹄疫疫苗生产厂家通常以厂区为中心，购买辐射周边几百公里内的实验牛并运回实验基地，再采集血清用液相阻断ELSIA 方法进行大范围筛选。这种方法筛选实验牛阴性率不足15%，筛选时间长、成本高，浪费人力、物力。

利用综合筛选方法，技术人员可先在田间使用胶体金对牛进行口蹄疫抗体初筛[7-8]，初筛呈阴性的牛转运回实验基地后，再进行ELISA 复核筛选。既可以快速完成动物评估，又降低了筛选成本。

1 材料

1.1 血清

待检田间牛血清500 份。

1.2 检测试剂盒

1）口蹄疫胶体金试剂盒由北京标驰泽惠生物科技有限公司生产，O 型批号为106210415A，A 型批号为107181123。

2）口蹄疫液相阻断ELISA 试剂盒由兰州兽研生物科技有限公司生产，O 型批号为20210107101，A 型批号为20210107103。

2 方法

1）利用口蹄疫胶体金试剂盒检测三组盲采不同来源的田间牛血清共500 份，口蹄疫胶体金检测方法参照说明书。

2）口蹄疫胶体金检测结果为：O 型抗体效价≤22.5，A 型抗体效价≤30.3 的牛血清收集备用。

3）利用口蹄疫抗体液相阻断ELISA 方法对口蹄疫胶体金法筛选出来的阴性血清进行抗体检测。液相阻断ELISA 检测方法参照说明书。

4）实验数据比对：根据三次实验结果分析，用口蹄疫抗体液相阻断ELISA 方法检测口蹄疫胶体金筛选出来的血清合格率。

3 结果与分析

1）判定标准。依据试剂盒说明书将口蹄疫胶体金检测结果为O 型抗体效价≤22.5 和A 型抗体效价≤30.3 的实验牛血清判定为口蹄疫抗体阴性；依据农业农村部公告2601 号将口蹄疫抗体液相阻断ELISA 检测结果为O 型和A 型抗体效价均≤23 的实验牛血清判定为口蹄疫抗体阴性。

2）实验结果。用口蹄疫胶体金试剂盒检测500 份田间牛血清，结果如表1：

3）用口蹄疫抗体液相阻断ELISA 法检测3 组口蹄疫胶体金筛选出来的236 份血清，分组检测结果如表2、表3、表4：

表2 第一组甘肃武威某牛场口蹄疫胶体金筛选合格的74份血清ELISA结果

表3 第二组甘肃武威某牛场口蹄疫胶体金筛选的87份血清ELISA结果

表4 第三组新疆佃坝某牛场口蹄疫胶体金筛选的75份血清ELISA结果

第一组ELISA 法检测的74 份血清中O 型合格56 份，A 型合格58 份，O 型和A 型均合格的有54 份。

第二组ELISA 法检测的87 份血清中O 型合格70 份，A 型合格68 份，O 型和A 型均合格的有61 份。

第三组ELISA 法检测的75 份血清中O 型合格57 份，A 型合格55 份，O 型和A 型均合格的有53 份。

4）用口蹄疫抗体液相阻断ELISA 方法检测口蹄疫胶体金筛选出来的236 份血清合格率见表5：

表5 236份牛血清ELISA法检测结果

5）实验结果分析：利用口蹄疫抗体液相阻断ELISA 法对口蹄疫胶体金检测合格的田间牛血清进行复核，3 次实验结果显示O 型的平均合格率在77%以上，A 型的平均合格率在76%以上，O 型和A 型的平均合格率在71%以上。

4 讨论

通过三次实验发现利用口蹄疫胶体金检测法与口蹄疫抗体液相阻断ELISA 法组合筛选牛血清的平均合格率在71%以上，而直接用口蹄疫抗体液相阻断ELISA 法筛选牛血清的合格率不足15%，根据实验结果，两种检测方法组合筛选实验牛的方式要高于直接采用口蹄疫抗体液相阻断ELISA 法筛选方式。

利用口蹄疫胶体金检测试剂盒对田间牛血清进行检测有以下优点：携带方便，操作简单；不需要固定实验室，可随时开展检测；可减少不合格牛的采购、转运等工作，能有效降低成本；通过本次实验发现用胶体金法对田间牛进行初筛，再用液相阻断ELISA 法进行复核筛选，能够快速筛选出实验阴性牛，此方法具有一定的可行性。

通过本次实验说明利用口蹄疫胶体金检测试剂盒进行实验牛筛选，再利用口蹄疫抗体液相阻断ELISA 试剂盒进行二次复核，既能减少疫苗生产企业筛选实验动物的时间，又能降低实验牛筛选成本及运输成本，利于疫苗生产企业快速开展产品检验。

建议各口蹄疫疫苗生产企业采用口蹄疫胶体金检测法进行远端初次筛选，利用口蹄疫抗体液相阻断ELISA 法进行实验室复核。■