热娜古丽·依明

（新和县畜牧技术推广中心 新疆阿克苏 842100）

近几年，随着我国养牛业的发展，其奶牛和肉牛的养殖数量呈现逐年升高的趋势，河北、陕西、内蒙古、新疆等许多地区奶牛和肉牛的养殖数量较大，已经形成集约化、规模化的养殖模式[1-2]。在牛养殖过程中，牛腹泻病是成为临床中重要的及常见的疾病之一，经过统计在规模化牛场及散养牛场中不同阶段的腹泻性疾病发病率一直有增无减，引起腹泻的因素复杂，各个阶段牛容易感染，尤其是犊牛的死亡率较高，该病严重影响着养牛业的健康发展，对养牛业造成严重的经济损失[3-5]。相关研究表明，引起规模化养殖场及散养户中不同阶段的牛腹泻病的病因有许多，主要包括传染性因素和非传染性因素，其中传染性因素有病毒、细菌、寄生虫等，非传染性因素有养殖环境卫生、饲养管理方式及外界环境应激等，其中细菌是引起牛腹泻为最常见的因素之一[6-8]。引起牛细菌性腹泻的病原主要有大肠杆菌、沙门菌、志贺菌、空肠弯曲杆菌、奇异变形杆菌、产气荚膜梭菌、链球菌等，细菌性腹泻严重影响犊牛的健康生长也是导致犊牛死亡的重要因素之一，且在临床中常常以混合感染为主[9-10]。目前，临床中牛细菌性腹泻主要通过抗生素进行预防与治疗，临床中随着抗生素的不合理的使用，导致其多种病原产生严重的耐药性，同时降低多种抗菌药物的治疗效果，同时严重危害着人们的健康[11-12]。

本试验于2022—2023 年采集新疆维吾尔自治区阿克苏地区新和县规模化养殖场及散养户中不同阶段的患腹泻牛粪便、肛拭子及内脏病料358 份进行大肠杆菌、沙门菌、志贺菌、空肠弯曲杆菌等细菌性病原菌的分离鉴定，并对其耐药性进行检测，为该牛细菌性腹泻病防治及合理指导临床用药提供参考。

1 材料与方法

1.1 病理来源

2022—2023 年采集新疆维吾尔自治区阿克苏地区新和县规模化养殖场及散养户中不同阶段的患腹泻牛粪便、肛拭子及内脏病料358 份。

1.2 细菌分离与培养

对采集的358 份病料进行处理后，无菌接种于7%绵羊脱纤血培养基上，在37 ℃恒温条件培养18～24 h 后，挑取菌落分别接种于大肠杆菌显色培养基（大肠杆菌）、沙门菌显色培养基（沙门菌）、XLD 培养基（奇异变形杆菌）及空肠弯曲菌显色培养基（空肠弯曲菌显色）上，在37 ℃培养条件下鉴别培养12～18 h 后，挑取不同的培养基单个菌落接种营养肉汤纯化培养后进行镜检观察形态学和生化鉴定。

1.3 生化试验鉴定

参照革兰氏阴性菌生化鉴定试剂盒，将分离菌株培养至对数期，调整菌液浓度为0.5 个麦氏浊度，按照要求在无菌的条件接种于革兰氏阴性菌试剂，37 ℃培养12～18 h 后，参照说明书对分离菌株的生化特性进行比对结果判定，确定其生化特性。

1.4 药敏试验

分离菌株的药敏试验参照美国临床实验室标准化协会（CLSI）2013 年推荐的药敏试验法标准进行试验和药敏试验结果判定。

2 结果

2.1 细菌分离培养

疑似大肠杆菌、沙门菌、空肠弯曲杆菌及奇异变形杆的分离菌株分别在大肠杆菌显色培养基、沙门菌显色培养基、空肠弯曲菌显色培养基、XLD 培养基长出典型的菌落形态，通过染色镜检观察其形态学。与《伯杰细菌鉴定手册》报道的培养特性和形态学基本上一致。

2.2 细菌生化试验

参照革兰氏阴性菌试剂盒说明书，对分离菌株进行生化试验，结果显示，分离菌株分别被鉴定为大肠杆菌、沙门菌、空肠弯曲杆菌及奇异变形杆菌。 结果如表1 可知，分离到大肠杆菌62 株、沙门菌52 株、空肠弯曲杆菌29 株、奇异变形杆菌28 株，检出率分别为17.3%、14.5%、8.1%、7.8%，其中大肠杆菌和沙门菌检出率较高。

表1 分离菌株统计结果

2.3 药敏试验

对临床中分离的大肠杆菌、沙门菌、空肠弯曲杆菌及奇异变形杆进行药敏试验并分析其耐药性，结果由表2 可知：分离的大肠杆菌、沙门菌、空肠弯曲杆菌及奇异变形杆对临床中常用的药物产生不同的耐药性，其中大肠杆菌、沙门菌、空肠弯曲杆菌及奇异变形杆菌均对头孢噻呋、头孢喹肟、氟苯尼考、恩诺沙星、环丙沙星、林可霉素、硫酸黏菌素等药物敏感，对其他药物耐药。通过药敏试验结果可知，临床分离的大肠杆菌和沙门菌耐药率均高于空肠弯曲杆菌和奇异变形杆菌耐药率。

表2 药敏试验结果

3 讨论

国内外研究表明，牛的细菌性腹泻是养牛中常见的疾病之一，经过统计在犊牛阶段中其发病率在40%～80%之间，犊牛腹泻性疾病的感染率和死亡率均较高，给养牛生产造成了较大的经济损失，严重影响我国养牛业的发展[5-9]。当犊牛刚出生时免疫力较弱，肠道的消化机能不健全，外界环境中细菌容易进犊牛的体内，并在肠道中定植，尤其是当外界环境改变时导致其免疫力下降，引起犊牛发病[10-12]。本试验研究表明，从358 份病料样品中分离到大肠杆菌62株、沙门菌52 株、空肠弯曲杆菌29 株、奇异变形杆菌28 株，检出率分别为17.3%、14.5%、8.1%、7.8%。说明大肠杆菌、沙门菌、空肠弯曲杆菌及奇异变形杆菌是引起犊牛腹泻的主要的病原菌。因此，应该注意规模化养殖场及散养户中牛的饲养管理，消除诱因，减少腹泻性疾病的发生。

本试验耐药性结果表明，分离的菌株对临床中常用的药物产生不同的耐药性，其中大肠杆菌、沙门菌、空肠弯曲杆菌及奇异变形杆菌均对头孢噻呋、头孢噻肟、氟苯尼考、恩诺沙星、环丙沙星、林可霉素、多黏菌等药物敏感，对其他药物耐药，临床分离的大肠杆菌和沙门菌耐药率均高于空肠弯曲杆菌和奇异变形杆菌耐药率。因此，规模化养殖场及散养户应该对牛细菌性腹泻的综合防控。 在临床治疗牛细菌性腹泻时应该根据药敏试验结果选择敏感的药物交替使用，同时加强饲养管理，注意环境的消毒，才能提高治疗效果。■