郑苏,黄琴,胥婧,谢谨,张刚

1.十堰市太和医院,湖北医药学院附属医院,湖北 十堰 442000; 2.黄石市妇幼保健院,湖北 黄石 435000

缺血性脑卒中是临床脑血管疾病中的常见病、多发病,具有“三高一低”(高发病、高致残、高死亡、低治愈)的特点,给患者家庭和社会带来痛苦和沉重的负担。近年来,脑卒中的发病率呈上升的趋势[1-2]。随着现代医学的发展和科技的进步,脑卒中患者死亡率明显降低,但存活的患者多伴有不同程度的运动功能障碍,严重影响患者的生活能力和生存质量[3]。因此,卒中后患者运动功能障碍的恢复是患者迫切的需求和亟待解决的问题,也是康复的重要目标[4]。运动训练是现代康复治疗运动功能障碍的重要手段之一,疗效确切。穴位埋线是针灸学的延伸和发展,其利用羊肠线对腧穴进行持续刺激,可减轻患者针刺的痛苦,同时可对穴位进行缓慢持续长久的刺激。本实验研究采用运动训练配合穴位埋线的方法干预缺血性脑卒中大鼠,探讨两者联合运用对大鼠运动功能障碍的影响,为运动训练配合穴位埋线治疗缺血性脑卒中运动功能障碍提供理论基础。

1 材料

1.1 实验动物选取60只SPF级健康雄性SD大鼠,体质量(250±20) g,由湖北医药学院实验动物中心提供,许可证号:SCXK(鄂)2011- 0008,饲养于温度(23±1) ℃,相对湿度50%的动物实验中心,本研究经湖北医药学院实验动物福利伦理审查委员会审批通过,动物福利审查批号:湖北医药学院动(福)第2022-实15号。

1.2 药物与试剂无水乙醇、二甲苯、中性树胶(国药集团化学试剂有限公司,货号:10009218、10023418、10004160);苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色液、PBS(武汉云克隆科技股份有限公司,货号:B001、B006)。

1.3 仪器线栓(广州佳灵生物科技有限公司,规格:L3400);转轮式跑步机(淮北九百电子科技有限公司,型号:JB-PT);组织石蜡包埋机(寰熙医疗,型号:HBM-200L);倒置光学显微镜(德国徕卡公司,型号:Leica dmi6000B);成像系统(广州市明美科技有限公司,型号:TVO.63XC-MO);平衡木实验装置、小动物气体麻醉机(上海玉研科学仪器有限公司,型号:YAN-PHM-2、ACS-4)。

2 方法

2.1 动物分组及造模将60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、穴位埋线组、运动训练组和联合组,每组各12只。除假手术组外,其余组大鼠参照Zea Longa法[5]制备缺血性脑卒中大鼠模型,具体如下:利用异氟烷吸入性诱导将SD大鼠麻醉后仰卧位于手术操作台上进行固定,剃毛后颈部皮肤消毒,显微镜下小心分离出左侧颈总动脉、颈内/外动脉,然后夹闭颈总动脉近心端颈内动脉远心端,结扎颈外动脉远心端并将颈外动脉离断,从颈外动脉残端将已消毒的线栓置入颈内动脉,直至入颅有阻力后停止,然后结扎、固定、缝合伤口、消毒,待1 h后取出线栓。造模大鼠清醒后,参照Longa五级评分法对造模大鼠进行评定,1～3分为造模成功[6]。假手术组的操作方法如同上,暴露动脉,但颈内动脉不插入线栓。

2.2 干预方法手术1 d后对大鼠进行不同的干预,其中穴位埋线组:将大鼠麻醉、固定,剃去顶部毛发并消毒后,在显微镜下将穴位消毒线(长2 mm)埋置于右侧顶颞前斜线,埋线时间持续14 d[7];运动训练组:大鼠进行跑轮训练,初始转速10 r·min-1,具体跑步机速度根据大鼠耐力进行适当调整,每次 30 min,期间每10 min休息1次,每天1次,连续 14 d[8];联合组:大鼠分别按照穴位埋线组和运动训练组的干预方法对大鼠进行穴位埋线后跑轮训练,连续14 d;假手术组和模型组不进行治疗方法干预。所有大鼠单笼饲养,定期观察大鼠生命体征。

2.3 大鼠神经功能损伤评分根据 Garcia评分法[9]分别于第1天、第7天和第14天对大鼠的四肢对称性、自主活动、攀笼功能、前肢对称性、躯体感觉功能及触须感觉等6个部分进行综合评估,得分越低,说明神经功能损伤越严重。

2.4 网屏实验分别于第1天、第7天、第14天根据改良网屏实验对大鼠前肢肌力的损伤程度进行评估。实验操作过程中,将网屏在30°、45°、60°三个角度放置,大鼠右侧肢体用医用胶带轻柔缠缚然后放在网屏上,观察大鼠60 s内在网屏上的保持情况,从而评价大鼠的左侧肢体的前爪抓握能力及肌力变化。

2.5 平衡木实验分别于第1天、第7天、第14天进行平衡木实验[10],对大鼠平衡稳定性进行评估。平衡木长165 cm,宽 1.75 cm,离地 90 cm,在平衡木下放置一个缓冲的安全箱,以减轻老鼠坠落对机体的影响。在平衡木的远端是一个黑暗目标箱,目标箱有一个狭窄的入口,而平衡木前端有一个明亮的光源,激励动物穿过光束进入目标箱。当老鼠的前脚进入目标箱后,立即关灯,实验结束。实验结束后,让大鼠在目标箱中休息5 min,然后再从开始位置重复上述步骤2次。

2.6 HE染色观察各组大鼠脑组织形态学变化于第14天进行神经行为能力评估后,将大鼠麻醉、固定、然后断头,分离出大脑组织,随后将大鼠脑组织置于40 ng·L-1多聚甲醛中固定,固定好后进行石蜡包埋,切片,常规脱蜡、复水,HE染色,封片后显微镜下观察各组大鼠脑组织形态学变化。

3 结果

3.1 各组大鼠神经功能评分比较与假手术组比较,各造模大鼠的神经功能评分降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,第7天和第14天,运动训练组、穴位埋线组和联合组大鼠神经功能评分升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与运动训练组比较,第7天和第14天,穴位埋线组和联合组大鼠神经功能评分升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与穴位埋线组比较,联合组大鼠神经功能评分升高,差异均有统计学意义(P<0.05),见表1。

表1 各组大鼠神经功能评分比较分)

3.2 各组大鼠网屏实验得分比较网屏倾斜30°、45°、60°时,与假手术组比较,模型组大鼠网屏实验得分降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。网屏倾斜30°、45°、60°时,与模型组比较,第7天和第14天,运动训练组、穴位埋线组和联合组大鼠网屏实验得分升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与运动训练组比较,第7天和第14天,穴位埋线组和联合组大鼠网屏实验得分升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与穴位埋线组比较,联合组大鼠网屏实验得分升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。见表2—表4。

表2 各组大鼠网屏倾斜30° 得分比较 分)

表3 各组大鼠网屏倾斜45° 得分比较 分)

表4 各组大鼠网屏倾斜60° 得分比较 分)

3.3 各组大鼠平衡木实验结果比较与假手术组比较,各组大鼠平衡功能评分、平衡木实验到达时间和平衡木实验误足次数均升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,第7天和第14天,穴位埋线组和联合组平衡功能评分、平衡木实验到达时间和平衡木实验误足次数均有所降低,运动训练组平衡功能评分、平衡木实验到达时间降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与运动训练组比较,第7天和第14天,穴位埋线组和联合组平衡功能评分、平衡木实验到达时间和平衡木实验误足次数均有所降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与穴位埋线组比较,联合组平衡功能评分、平衡木实验到达时间和平衡木实验误足次数均有所降低,差异均有统计学意义(P<0.05),见表5—表7。

表5 各组大鼠平衡功能评分比较分)

表6 各组大鼠平衡木实验 到达时间比较

表7 各组大鼠平衡木实验 误足次数比较 次)

3.4 各组大鼠海马组织病理形态学改变情况HE染色显示,假手术组大鼠脑组织海马细胞排列整齐有序,结构大致正常。模型组、运动训练组、穴位埋线组、联合组大鼠脑组织海马神经细胞排列紊乱,细胞结构大部分不完整、有空泡状、神经元数量减少,联合组病理损害最轻,见图1。

A:假手术组;B:模型组;C:运动训练组;D:穴位埋线组;E:联合组。图1 各组大鼠海马组织病理形态学改变(HE染色,×200)

4 讨论

缺血性脑卒中是临床常见的脑血管疾病,且存活者存在不同程度的功能障碍,运功功能障碍尤为凸显[11]。现今,卒中后功能障碍的治疗方法较多,中医治疗方法有针灸、功法、推拿、中药等,现代康复治疗方法有肌电生物反馈疗法、经颅磁刺激、PT、OT等[12-14]。总体来说,目前缺血性脑卒中治疗方法较多,且治疗疗效尚可[15-17],但多以治疗师治疗为主,在治疗期间有治疗及刺激,治疗后持续性刺激一般都因治疗师结束而终止,故不因治疗师停止而终止的持续性刺激治疗项目有待进一步研究。

穴位埋线是在中医针灸学的基础上延伸的一种疗法。与普通针刺比较,其可在安全的情况下进行留针,保持对埋线部位的穴位进行持续刺激,从而达到足够的刺激量,并且减少了反复针刺治疗进针的痛苦;同时其埋置于皮下,后期人体可吸收,不影响患者的正常生活和工作,患者可根据自身情况进行自行按压,增强刺激,保证刺激强度[18]。近年来,埋线疗法已经逐渐广泛应用于脑卒中的治疗,且研究证明埋线疗法可以提高脑卒中患者临床疗效,改善运动功能障碍、提高生活质量[19-20]。现代研究证实,穴位埋线可增强激活脑卒中后大脑皮质运动区[21]。脑卒中属于中医学“中风”范畴,病位在脑,病机为气血逆乱,经脉失养。头为诸阳之会,顶颞前斜线是临床治疗卒中后运动障碍常用的头针之一,其位于前神聪(百会前1寸)与颞部悬厘之间的连线,刺之增强脑区活动功能,提高中枢兴奋性,利于神经功能的恢复[22]。

运动训练是治疗脑卒中后功能障碍的重要治疗方法之一,可有效改善患者ADL评分和Brunnstrom分期,提高临床疗效[23]。研究显示,运动训练可以抑制神经细胞凋亡、促进神经血管再生、抑制神经炎症发生,从而缓解神经损伤,实现神经功能重塑[24-25]。跑台训练可使大鼠进行自由蹬、爬等主动运动,其跑台的运动强度可以进行调整,跑速和时间可以进行准确的调节,跑轮训练与和游泳设备相比,在运动生理学、神经生理学和行为学等方面有着较为突出的优势[26]。故本实验采用跑轮训练作为脑卒中大鼠的运动训练。

本研究采用的局灶性脑缺血再灌注模型可以最大程度上模拟脑卒中患者缺血再灌注损伤后的一系列生理病理性变化,为深入研究缺血性脑卒中后遗症的康复方法及具体作用机制提供了强有力支持。通过运动训练和穴位埋线对脑缺血模型大鼠进行治疗表明,联合组大鼠第7天和第14天神经功能评分、网屏实验得分、平衡木实验得分等显著改善,缺血区脑组织病理损伤减轻。以上研究结果表明,运动训练联合穴位埋线可以减轻缺血脑组织的损伤,改善神经功能,提高神经行为功能,有效改善脑卒中后运动功能障碍,为临床运动训练联合穴位埋线治疗脑卒中提供理论基础。