蒋 惟，陈火英，于弘智，莫丽军，王 迪，韦传东

桂林医学院第二附属医院检验科，广西桂林 541199

人乳头瘤病毒(HPV)是一类双链环状DNA病毒。具有独特的嗜上皮性，感染分层鳞状上皮，包括皮肤和黏膜[1]，引起各种良性和恶性疾病。对女性而言，HPV感染主要导致宫颈癌，对于男性，HPV感染常引起生殖器疣，比如尖锐湿疣。迄今为止，已发现200多种HPV亚型，其中约40种可导致生殖道感染[2]。以尖锐湿疣为主的生殖器疣，其在皮肤科门诊的检出率越来越高，HPV检测也越来越得到医患的重视。本研究回顾性分析本院2019年1月至2021年7月男性HPV感染和型别分布情况，为男性HPV感染引起的相关性传播疾病的早期筛查、预防、诊断提供理论依据，以及为男性HPV疫苗的研发提供流行病学数据。

1 资料与方法

1.1一般资料 301例受检者均来自2019年1月至2021年7月到桂林医学院第二附属医院皮肤科门诊就诊的疑似HPV感染男性患者，为桂林临桂地区及周边县市的常住人口。年龄范围15～85岁，平均年龄32.15岁。标本分别取自患者皮损部位的组织，包括尿道口、冠状沟、肛周、包皮等处。采集的标本立即放入专用标本采集管[亚能(深圳)生物技术有限公司]提供的HPV 23分型细胞保存管中，冷藏保存待测。

1.2试剂与仪器 HPV DNA基因分型检测试剂盒[亚能(深圳)生物技术有限公司]，旋涡振荡器(Thermo Scientific公司，型号：88880018)，高速离心机(湖南湘仪开发有限公司，型号：H1650)，干式恒温仪(上海一恒科技有限公司，型号：TU-100C)，普通PCR扩增仪(BIO-RAD，型号：S1000)，迷你离心机(北京五洲东方有限公司，型号：MiNiQ)，分子杂交仪(兴化市分析仪器厂，型号：FYY-3)。

1.3方法 按照试剂盒说明书提取HPV DNA，将0.5 mL洗脱液转移至1.5 mL离心管中，13 000 r/min离心10 min，弃上清液后加入100 μL裂解液，100 ℃金属浴加热100 min，13 000 r/min离心10 min，保留上清液。使用Bio-rad普通PCR扩增仪进行扩增，50 ℃ 15 min，95 ℃ 10 min，然后94 ℃ 10 s解链，42 ℃ 90 s退火，72 ℃ 30 s延伸重复10个循环；接着94 ℃ 10 s解链，42 ℃ 60 s退火，72 ℃ 20 s延伸重复30个循环。FYY-3型分子杂交仪进行反向杂交，条件为51 ℃ 2 h，然后洗膜、孵育、显色判读。本研究使用的HPV基因分型检测试剂盒能同时检测23种基因型，包括低危亚型(HPV 6、11、42、43、81、83)和高危亚型(HPV 16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73和82)。

1.4统计学处理 采用SPSS24.0统计软件和Excel对数据进行统计学分析，计数资料以例数或百分率表示，组间比较采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1HPV检出率及型别分布情况 301例男性患者共检测出235例HPV阳性，阳性检出率为72.98%。检出率前6位的HPV亚型依次是HPV6(66.38%)、HPV11(50.21%)、HPV52(21.70%)、HPV16(19.15%)、HPV51(16.60%)，HPV43和HPV59(并列第六，均为15.74%)。见表1。

表1 男性HPV阳性患者各型别检出率

2.2HPV型别感染类型分布情况 同时感染两种及以上HPV亚型即为多重感染。235例HPV阳性标本中，单一感染106例，占45.10%；多重感染129例(54.90%)。见表2。

表2 不同感染类型占比情况

2.3不同感染亚型中高、低危亚型分布情况 235例阳性标本中，单一感染中的低危亚型占81.13%(86/106)，与高危亚型比较有统计学意义(χ2=82.189，P<0.05)。多重感染中，以高低危混合感染为主，占80.62%(104/129)(混合亚型与低危亚型比较，χ2=117.802，P<0.05；混合亚型与高危亚型比较，χ2=145.409，P<0.05)。见表3。混合感染中低危亚型频次出现排前2位的分别是HPV 6和HPV 11，高危亚型频次出现排前2位的分别是HPV 16和HPV 18；而组合亚型出现最多的是二重感染HPV 6+HPV 52，为5例(5/34，14.71%)，三重及以上感染中未发现相同组合亚型。见表4。

表3 不同感染类型高低危亚型分布情况(n)

表4 高低危混合感染中亚型出现频次情况

续表4 高低危混合感染中亚型出现频次情况

2.4HPV感染年龄分布情况 HPV阳性高峰年龄段为20～29岁和30～39岁，阳性率分别为34.04%(80/235)、26.81%(63/235)。各年龄段阳性率以<20岁(93.10%)和≥60岁(90.48%)最高。见表5。

表5 HPV感染年龄分布情况

3 讨 论

HPV感染在人群中具有普遍性，目前主要偏向于女性HPV感染的研究和疫苗的研发，而男性HPV的研究较少。随着近几年男性患者HPV感染率的增多，尤其男-男性行为的增加，使得高危型HPV在男性中的感染率进一步提高[3]，故对男性HPV感染进行研究，能够为男性患者的HPV检测、治疗、生殖器官肿瘤预防和疫苗的研发提供流行病学数据。

本研究结果显示，本院HPV感染率为72.98%，与重庆地区(70.52%)和杭州地区(68.02%)相近[4-5]，低于鄂州地区(84.93%)[6]，高于温州(40.59%)[7]、长春(59.95%)[8]、山东(57.80%)[9]。23种HPV亚型在235例阳性患者中全部检出，最常见的HPV亚型依次为6、11、52、16、51、43、59，与以往文献报道不一致。宛传丹等[10]在常熟地区的研究结果显示，最常见的HPV亚型为6、11、39、52、66；冯莉亚等[11]在浙江地区的研究结果显示，最常见的HPV亚型为6、11、52、51、16、81；方炳雄等[12]在潮汕地区的研究结果显示，最常见的HPV亚型为6、11、16、51、52。上述研究说明HPV的感染率、感染型别分布在不同地区人群中存在一定的差异性，原因可能与生活习性和外来人员占比有关。有研究证明女性HPV感染具有民族差异性[13-14]。HPV E6、E7蛋白是其致癌蛋白，在不同种族中的表达有差异[15]。男性HPV感染是否具有民族差异缺乏数据支持，还需要大数据收集，从宿主和病毒两方面进行流行病学和病因机制的研究。HPV 6、11、52这3种亚型几乎存在于所有地区的男性感染，这也为男性HPV疫苗的研发提供了数据支持。研究发现本院男性HPV阳性患者中，单一感染到十重感染都存在。而单一亚型感染占45.11%(106/235)，其中感染低危亚型的以HPV 6和HPV 11感染为主。双重及以上多重感染以高低危混合感染为主，且以低危亚型为主，其中HPV 6和HPV 11出现频次最多(110/364，30.22%)；另外，高危亚型在混合感染中以HPV 16、HPV 18出现频次最多(46/364，12.64%)。统计显示二重混合感染中以HPV 6+HPV 52为主，说明HPV 52在组合亚型中为优势亚型，值得关注。同时，四重感染及以上均为高低危混合感染，且三重感染以上均无相同组合亚型，故感染的重数越多，不同亚型均有机会出现，这进一步体现了HPV感染在男性患者中的复杂性。

本研究还显示，男性检测人数及阳性主要感染人群都集中在20～29岁年龄段(34.04%)和30～39岁年龄段(26.81%)，与以往研究基本一致[7-8,11-12]。可能与该年龄段男性处于婚育最佳年龄及社会活动频繁有关。值得关注的是，<20岁年龄段人群的阳性率超过90%，八重感染中，<20岁年龄段人群感染率也达到50%(2/4)，分析认为这与青少年性知识及防护意识缺失有关；同时，>60岁年龄段人群的阳性率也在90%以上，九重和十重感染虽各只有1例，但都出现在>60岁年龄段人群，分析认为这与老年人基础疾病高发，免疫力下降，卫生习惯不良，以及思想守旧、耽误就医有很大的关系[16]。而HPV多重感染是尖锐湿疣复发的高危因素[17]，故在做好20～29岁和30～39岁这两个年龄段的HPV防治工作外，青少年及老年人群的HPV防治也是不能轻视的。

综上所述，本院男性HPV感染人群中以HPV 6、11亚型感染为主，好发于20～39岁年龄段。单一感染以低危型为主，多重感染中，以高低危混合为主。本研究结果可为男性HPV疫苗及HPV感染的治疗提供流行病学数据。本研究是回顾性研究，男性配偶感染情况和免疫细胞功能等资料未纳入研究范围，存在一定局限性。