李幸旻

广州市中新广州知识城医院检验科，广东广州 510363

肺结核是由感染结核分枝杆菌引起的一种慢性、传染性疾病，结核杆菌会入侵机体肺部、肝部、胃部、肠部等各个器官组织，其中最为常见的为肺结核。临床数据显示，近年来临床肺结核发病率表现出明显升高趋势，青年人为高发群体，有4～8 周的潜伏期，随着病程进展，还会累及肠、脑膜、皮肤等。肺结核表现为慢性过程，多数存在咳嗽、低热、乏力、呼吸系统等症状，但不同肺结核其临床症状存在一定差异[1]。肺结核患者一旦治疗不及时，将对机体各个器官组织造成严重损伤，进而危及生命。因此，临床需及早发现、诊断疾病，及时开展治疗，对提高疾病预后具有积极的作用。以往临床诊断肺结核多采取抗酸染色、结核分枝杆菌培养等手段，但抗酸染色检出率相对低，结核分枝杆菌培养用时长，检测样本容易被污染，导致部分肺结核患者未被及时检出，影响疾病治愈率，并增加了传染的风险。因此，临床需寻求一种快速、准确的诊断方法。结核分枝杆菌/利福平耐药性实时荧光PCR检测 （GeneXpertMycobacterium tuberculosis/Rifampin，GeneXpert MTB/RIF）技术是一种新型的结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis，MTB）检测技术，可对MTB 的rpoB 基因突变性进行检测，且操作简单，用时少，现在临床得到广泛应用[2]。本研究选取疑似肺结核患者研究对象，着重评估GeneXpert MTB/RIF技术、抗酸染色检测的临床诊断价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019年10月至2021年10月中新广州知识城医院收治的80 例疑似肺结核患者作为研究对象。男48 例，女32 例；年龄25～59 岁，平均（44.56±3.33）岁。纳入标准：①有发热、咳嗽、咳痰、胸痛、盗汗等伴随症状；②患者语言功能障碍，对研究可配合；③临床资料可靠、真实。排除标准：①合并其他呼吸系统疾病；②妊娠和哺乳特殊阶段女性；③并发肝肾功能不健全或严重损伤；④患者意识缺失、精神严重障碍，对检查及研究无法配合；⑤并发血液系统疾病。本研究患者及家属均充分知情，高度配合，且研究已征得医院理论委员会核准。

1.2 方法

患者均接受Gene Xpert MTB/RIF 诊断、抗酸染色诊断。

Gene Xpert MTB/RIF 技术：应用结核分枝杆菌核酸检测试剂[上海仁度生物科技有限公司，国食药监械（准）字2011 第3401033 号]，美国ABI 实时荧光定量PCR 仪stepone（上海艾研生物科技有限公司）、结核杆菌荧光定量PCR 诊断试剂盒[成都永安制药有限公司，国食药监械（准）字2009 第3400558 号]，应用Gene Xpert 全自动荧光定量PCR 工作站，最少对1 ml 1 个菌进行检测。采集患者痰液样本1 ml，加入处理液2 ml，漩涡震荡10 s，孵育时间10 s，再次进行震荡，孵育5 min，应用新的移管液，取处理后样本2 ml置入试剂匣中，置入样本位置，实施Gene Xpert MTB/RIF 检测。控制PCR检测环境：95℃15 min；35 循环（95℃20 s，60℃40 s，72℃40 s），72℃30 min。反应体系：Taq 酶2 μl PCR 缓冲液；PCR 引物20 pmol；dNIPs 2.5 pmol/L；氯化镁溶液25 mmol/L。阳性结果分为高（Ct<16）、中（16≤Ct<22）、低（Ct：22≤Ct≤28）、极低（Ct>28）。

抗酸染色：以《全国临床检验操作规程》[3]为参考，实施检验，患者痰液样本3～5 ml，取痰标本于干燥玻片上，干燥后进行加热固定，应用石碳酸复红染液染色处理，脱色后加入亚甲蓝复染，镜片干燥。

1.3 观察指标

①分析两种检测方式的检测结果。抗酸染色：抗酸细菌在染色后，对3%盐酸乙醇的脱色作用抵抗而继续维持红色则判定阳性；非抗酸细菌染色后，经3%盐酸乙醇的脱色而复染为蓝色判定为阴性。Gene Xpert MTB/RIF 诊断：根据仪器检测结果判定[4]。②比较两种检测方式的阳性率。阳性率=阳性检出数/总例数×100%。③比较不同检测方法的诊断准确度、灵敏度、特异度。灵敏度：真阳性/（真阳性+假阴性）×100%；特异度：真阴性/（假阳性+真阴性）×100%；准确度：（真阳性+真阴性）/总例数×100%。

1.4 统计学方法

采用SPSS 22.0 统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（±s）表示，两组间比较采用t检验；计数资料采用率表示，组间比较采用χ2检验，以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两种检测方式的诊断结果

80 例疑似结核病患者经临床病理诊断确诊42例，Gene Xpert MTB/RIF 检测的阳性率为47.50%，高于抗酸染色的阳性率17.50%（表1）。

表1 两种检测方式的诊断结果（例）

2.2 两种检测方式的诊断效能

Gene Xpert MTB/RIF 检测的诊断灵敏度、特异度、准确度分别为90.48%、100.00%、95.00%，抗酸染色的诊断灵敏度、特异度、准确度分别为33.33%、100.00%、65.00%，Gene Xpert MTB/RIF 检测的诊断灵敏度、准确度高于抗酸染色，差异有统计学意义（P＜0.05）（表2）。

表2 两种检测方式的诊断效能[%（n/N）]

3 讨论

肺结核指结核杆菌感染所致的疾病，是临床常见且可致命的传染病，其病原菌为结核分枝杆菌，主要是人型、牛型，其中，人型结核杆菌感染发病率相对更高[5]。结核杆菌通常感染并破坏肺、淋巴结系统等，但是，其他器官组织亦可受感染，如脑、中枢神经系统以及骨骼和循环系统。该病多数为慢性过程，极少数为急性发病，往往伴有咳嗽、低热、乏力以及体力下降等多种症状。通常情况下，肺结核主要是经呼吸道进行传染，同时也可经消化道感染，仅有少数患者经皮肤伤口感染，肺结核患者从呼吸道排出大量带菌微滴，若吸入带菌微滴即可造成感染[6]。到达肺泡的结核杆菌会趋化和吸引巨噬细胞，且被巨噬细胞吞噬，在有效细胞免疫建立之前，因巨噬细胞对结核杆菌杀灭能力存在限制，就会导致结核杆菌在细胞内大量繁殖，从而引起局部炎症，或者发生全身性血源性播散，成为肺结核发生的根源与基础。肺结核患者如未及时开展治疗，可对患者及家庭带来严重影响，甚至还可发生大范围传播，造成严峻的社会负担[7]。近年来，伴随抗结核药物的广泛应用，导致耐药性肺结核患病人数随之增加，临床治疗难度增加[8]。因此，肺结核患者早期诊断、及时治疗，对增强临床疗效、提高患者预后具有积极的意义。

在临床诊断中，抗酸染色、分离培养法是常用的结核分枝杆菌检测技术，但诊断准确性不高，快速核酸检测技术的应用，极大程度上提高临床结核分枝杆菌诊断效率。抗酸染色法在结核分枝杆菌数目较低时可能在镜检时无法找到，对中量级结核分枝杆菌标本，一旦样本处理不慎或采集样本质量不佳，实施抗酸染色法发生漏诊概率较高[9-10]。Gene Xpert MTB/RIF检测技术是一种高度自动化检测方法，在检测时可自动检测所采集到的样本，用时较短，通常仅需2 h 即可得到检测结果，从而大大提高临床结核分支杆菌诊断效率[11]。同时Gene Xpert MTB/RIF 检测技术诊断价值较高，在诊断过程中可对单个拷贝的核酸进行检测，故敏感度较高，而在检测中不会出现气溶胶问题，检测环境要求维持在15～30℃，在高湿度环境中也开展检测，具有操作简单、用时较短、准确率高等突出优势，相较抗酸染色检测法，可有效节省诊断时间，从而为临床医生病原学诊断及治疗方案制定提供可靠参考，以便疾病及早得到控制，避免大范围传播[12-13]。本研究结果显示，80 例疑似肺结核患者经临床病理诊断确诊42 例，GeneXpert MTB/RIFF 检测阳性率47.50%高于抗酸染色阳性率17.50%，差异有统计学意义（P＜0.05）；GeneXpert MTB/RIF 检测诊断灵敏度、特异度、准确度分别为90.48%、100.00%、95.00%，抗酸染色的诊断灵敏度、特异度、准确度分别为33.33%、100.00%、65.00%，GeneXpert MTB/RIF 技术诊断灵敏度、准确度高于抗酸染色结果。相较于抗酸染色检测法，应用GeneXpert MTB/RIF 技术对肺结核阳性检出率、灵敏度、准确度均更高，诊断价值显著。分析如下，在MTB/RIF 核酸检测过程，主要利用Gene Xpert 检测系统实施半巢式实时荧光定量PCR 体外诊断，靶基因是rpoB 基因，可将DNA 自动提取并完成rpoB基因192 bp 片段的扩增后检测，在检测中应用3 种特异引物和6 种分子信标，6 种探针同时检测，还可对利福平耐药性自动检测[14-16]。但需注意，Gene Xpert MTB/RIF 技术检测价格相对较高，故在临床广泛应用及普及方面存在一定局限性，且无法对非结核分枝杆菌进行检测，无法对死菌与活菌有效区分，在检测中仅可对一种药物耐药基因进行检测，而在检测时部分特殊的利福平耐药相关基因突变会对检测结果造成影响[17-18]。

综上所述，在肺结核诊断中应用Gene Xpert MTB/RIF 技术，相较于抗酸染色检测，具有较高的诊断准确率及灵敏度，且操作方便，可对肺结核诊断方案予以优化，为后期治疗工作开展提供可靠的依据，实现显著的诊断价值。