王童瑶，李思源，李军，胡倩，赵会荣，邵晗，侯泽鑫

1.石河子大学医学院第一附属医院内分泌代谢科，新疆石河子 832000；2.石河子大学医学院组织学与组胚学教研室，新疆石河子 832000；3.江苏省南通市第二人民医院老年医学科，江苏南通 226000

2 型糖尿病 （type 2 diabetes mellitus，T2DM）是一种由遗传和环境引起的慢性代谢性疾病， 在我国的发病率逐年增加。 骨质疏松（osteoprosis，OP）是好发于老年人的一种以骨量减少为特征的退行性疾病， 而OP 又是T2DM 的常见并发症之一。 研究表明， 绝经后女性T2DM 合并OP 患者多于非绝经女性，绝经为T2DM 合并OP 的常见危险因素[1-2]。

Wnt 信号通路为一个复杂的蛋白质网络， 参与了多种生物学过程的调控[3]，经典的Wnt/β-catenin信号促进骨髓间充质干细胞 （bone marrow-derived mesenchymal stem cells，BMSCs） 向成骨细胞分化[4]，而DKK 分泌蛋白1（DKK1）为信号通路的拮抗剂，通过与LRP5/6 结合促进OP 的发生[5]。 目前DKK1基因多态性通过Wnt/β-catenin 信号通路在绝经后T2DM 合并OP 中的研究鲜有报道。该研究通过分析2016 年10 月—2017 年10 月收集的136 例绝经后女性DKK1 基因rs1373004、rs1528877 位点单核苷酸多态性与骨代谢指标的相关关系， 为该病的靶向治疗提供理论依据。 现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

于石河子大学医学院第一附属医院内分泌代谢科门诊就诊以及住院的绝经女性中， 一共收集了136 份数据。 将这些数据划分为A、B、C、D，共4 组。纳入标准：符合1999 年WHO 糖尿病诊断标准。 排除标准：有1 型糖尿病、特殊类型糖尿病等影响糖代谢的内分泌疾病患者； 有甲状旁腺功能亢进等影响骨代谢的疾病患者。

1.2 方法

记录身高、体质量、绝经年龄、BMI 以及WHR。禁食、禁水8~10 h，于次日晨抽取静脉血5 mL。全自动生化分析仪测定Ca、P、空腹血糖（FPG）、三酰甘油(TG)、LDL-C、HDL-C，碱性磷酸酶（ALP）等生化指标；高压液相色谱法检测HbA1c；DEXA 骨密度仪测定骨密度；采用DNA 提取试剂盒提取DNA；飞行时间质谱法测定其基因状况以及基因多态性。

1.3 统计方法

采用SPSS 20.0 统计学软件进行数据处理，符合正态分布的计量资料以（±s）表示，采用t检验和方差分析；计数资料以[n(%)]表示，采用χ2检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 4 组一般资料比较

A 组和D 组的女性在绝经年龄以及年限比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。 见表1。

表1 4 组患者一般资料比较（±s）

表1 4 组患者一般资料比较（±s）

注：与A 组相比，**P＜0.01

?

2.2 4 组生化指标和骨密度比较

A 组的FPG 及HbA1c 较低，BMD、TG 偏高，与C、D 组相比差异有统计学意义（P＜0.05）。 见表2。

表2 4 组生化指标和骨密度比较(±s)

表2 4 组生化指标和骨密度比较(±s)

注：与A 组相比，*P＜0.05，**P＜0.01

?

2.3 Hardy-Wernberg 遗传平衡检测

分析不同组的基因型分布状况， 并研究其实验对象的人群代表性，DKK1 基因两位点具有较好的分布频率， 同时其均衡状况较好， 其分布满足Hardy-Weinberg 平衡，差异有统计学意义（P＜0.05），这说明该研究中选择的人群代表性较好。

2.4 DKK1 基因SNP 位点基因型频率

在rs1373004 位点，A 组和B、D 组相比， 差异有统计学意义（P＜0.05）。 在rs1528877 位点，D 组与B组具有不同的分布状况， 差异有统计学意义 （P＜0.05）。 见表3。

表3 DKK1 基因位点基因型及等位基因分布频率比较[n(%)]

2.5 多元线性回归分析

以年龄、 绝经年限、WHR、BMI、HbA1c、FPG、Ca、P、TG、LDL-C、HDL-C、ALP、基因多态性为自变量开展多元回归分析，结果显示，rs1373004 位点基因多态性、TG 与BMD（L1-4）成正相关（P＜0.05）。见表4。

表4 BMD 影响因素的多元线性回归分析

3 讨论

研究发现，绝经后女性雌激素会逐渐降低，接连出现骨质问题，破骨细胞和成骨细胞也会发生变化，其骨吸收作用相对较好，骨含量会逐渐降低，容易出现骨质疏松[6-7]。 Wnt 信号通路在不同位置以及细胞分化中效果和作用不同， 同时其蛋白抑制效果也存在一定差异，在信号通路中，DKK1 蛋白在骨质疏松中能够发挥较好的效果。

该研究中， 两位点的基因型和等位基因的频率分布结果显示，rs1373004 位点，T2DM 合并OP 组与对照组相比，差异有统计学意义（P＜0.05）；考虑rs1373004位点的基因多态性可能分别与骨代谢、 糖代谢异常有关系。 这与一项纳入111 万余例北美、欧洲、东亚及澳大利亚人群， 对17 个GWA 研究进行的荟萃分析， 结果显示DKK1 基因rs1373004 多态性与股骨颈、腰椎BMD 及骨折风险相关一致[8]。这与Wang JY等[9]的研究结果：DKK1rs1528877 多态性分别与腰椎和全髋的基线BMD 相关一致。与Zhang W 等[10]的研究，T2DM 患者女性中rs1373004 的基因多态性与糖代谢有关相一致。该研究多元线性回归分析结果示：在新疆石河子地区绝经后女性患者中，rs1373004 位点，基因多态性、TG 升高的是BMD（L1-4）升高的保护因素。 这与陈文聪等[11]研究的结论存在一致性，即女性体内的脂肪含量和股骨颈BMD 具有高度一致性。 女性在绝经之后，其雌性激素逐渐降低，雌激素分泌的下降也使得其骨保护作用在逐渐削弱， 对破骨细胞以及骨吸收也有一定影响， 骨含量降低逐渐提高其骨质疏松的可能性[12]。 通过分析发现，脂肪组织和雌激素存在一定关联，较高脂肪含量也能对骨骼有一定的保护作用，为绝经后女性提供雌激素来源，延缓骨质疏松的发生。而Simona 等在斯洛文尼亚人群中的研究表明DKK1 基因不具有多态性， 因为所有受试者具有相同的基因型。 因此该研究应扩大样本量加强研究[13-14]。

综上所述，近年来，关于糖尿病合并骨质疏松已有较多研究， 但目前关于DKK1 基因多态性对绝经后女性T2DM 合并OP 的研究鲜少。该文得出DKK1基因rs1373004、rs1528877 位点基因多态性及可能参与了绝经后女性2 型糖尿病人群糖、 骨代谢的过程， 因此为治疗绝经后女性T2DM 合并OP 提供精准靶点提供理论依据。