欧阳清，康海仙，姚运红，何平，陈新，曾尚明，梁艳芳

1.广东东莞市东城医院病理科,广东 东莞 523000；2.广东医科大学基础学院生物技术系,广东 东莞 523808；3.广东医科大学基础学院病理学系，广东 东莞 523808；4.广东东莞市东城医院普外科,广东 东莞 523000；5.广东东莞市滨海湾中心医院病理科，广东 东莞 523905

结直肠癌是人类常见的消化系统恶性肿瘤，在我国恶性肿瘤死因顺位排名中居于第三位[1]，结直肠癌的高危因素包括：吸烟、酒精、红肉及加工肉的摄入、家族史等[2]，但其确切的发病机制尚不明确，目前普遍认为结直肠癌发生过程是一个多基因变异、多阶段、多步骤的过程，是癌基因突变激活或抑癌基因失活，逐渐改变基因的结果[3]，因此研究癌基因的激活及抑癌基因的失活具有重要意义。分化相关基因NDRG1在多种恶性肿瘤中具有促进或抑制的重要作用，目前有关NDRG1 mRNA与结直肠癌的发生及临床病理特征的关系的研究报道不多，且存在分歧[4-5]，该研究选取东莞市东城医院及东莞市滨海湾中心医院进行结直肠腺癌根治术的72例患者为研究对象，探讨NDRG1 mRNA在结直肠癌中的表达及意义。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集东莞市东城医院及东莞市滨海湾中心医院进行结直肠腺癌根治术72例患者，对结直肠癌组织及其配对的癌旁组织进行取样。患者年龄32～76岁，中位年龄60岁；男45例，女27例。所有患者分期按照WHO《消化系统肿瘤病理学和遗传学》进行组织学分型、TNM分期及计算肿瘤浸润深度。组织学分型：高分化16例，中分化41例，低分化15例；TNM分期：Ⅰ期16例，Ⅱ期21例,Ⅲ期24例，Ⅳ期11例；淋巴结转移者30例，无转移为42例。所有患者术前均未进行放、化疗。术后所有的标本离体后即取样，剪成适量大小置于液氮中保存备用。

1.2 试剂与仪器

Trizol试剂、RT-PCR试剂盒、DNA marker均为TaKaRa大连公司产品；人NDRG1和β-actin引物由上海生工公司合成；PCR仪和ChemiDoxXRS凝胶成像系统购于美国Bio-RAD公司。

1.3 方法

RNA提取及cDNA合成按照说明书进行。NDRG1基因上游引物：5＇-CCGGCGCGACCTGGAG ATTGAG-3＇下游引物：5＇-TGTTCCCAGCAGCACCCGAGTTG-3＇、β-actin内参基因上游引物：5-CTTTCAGA ATCAGGGAACAAT-3＇下游引物：5＇-CGTAGAGATGAGAGTTTCAC ACA-3＇,以cDNA为模板，严格按照RT-PCR试剂盒操作说明书进行PCR反应。PCR反应条件：95℃预变性1.5 min；94℃变性10 s，56℃退火40 s，72℃延伸15 s，循环35次，最后72℃延伸10 min。产物经2.5%琼脂糖凝胶电泳后，凝胶成像系统进行拍照，采用Image J软件分析NDRG1基因电泳条带吸光度值，计算NDRG1 mRNA的相对表达量。

1.4 统计方法

采用SPSS 17.0统计学软件处理数据，符合正态分布的计量资料用（±s）表示，采用t和F检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 NDRG1 mRNA在结直肠癌、癌旁结直肠黏膜组织中的表达情况

NDRG1 mRNA在结直肠癌组织中的相对表达量显著低于癌旁结直肠黏膜组织，差异有统计学意义(P＜0.05)，见表1。

表1 NDRG1 mRNA在不同结直肠组织中的相对表达量（±s)Table 1 Relative expression of NDRG1 mRNA in different colorectaltissues（±s)

表1 NDRG1 mRNA在不同结直肠组织中的相对表达量（±s)Table 1 Relative expression of NDRG1 mRNA in different colorectaltissues（±s)

组织类型NDRG1 mRNA相对表达量癌旁结直肠黏膜组织（n=72）结直肠腺癌（n=72）t值P值19.922±15.820 8.683±12.467 24.500<0.001

2.2 NDRG1 mRNA在结直肠癌中表达与临床病理特征的关系

淋巴结转移患者癌组织NDRG1 mRNA相对表达量显著低于未发生淋巴结转移患者的癌组织；与TNM分期相关（P＜0.05），进一步应用LSD法进行两两比较，Ⅰ期的NDRG1 mRNA相对表达量高于Ⅲ期，差异有统计学意义（P＜0.05）；Ⅱ期的NDRG1 mRNA相对表达量高于Ⅲ期，差异有统计学意义（P＜0.05）；其余两两比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。结直肠癌组织中NDRG1 mRNA与患者的年龄、性别、组织学分型、浸润深度及肿瘤大小无相关性（P>0.05），见表2。

表2 NDRG1 mRNA在结直肠癌中表达与临床病理特征的关系[（±s)，×10-2]Table 2 Relationship between NDRG1 mRNAexpression in colorectalcancer and clinicopathologicalcharacteristics[（±s)，×10-2]

表2 NDRG1 mRNA在结直肠癌中表达与临床病理特征的关系[（±s)，×10-2]Table 2 Relationship between NDRG1 mRNAexpression in colorectalcancer and clinicopathologicalcharacteristics[（±s)，×10-2]

注：△进一步应用LSD法进行两两比较，Ⅰ期和Ⅲ期比较，P＜0.05；Ⅱ期Ⅲ期比较，P＜0.05;其余两两比较均，P＞0.05

指标 NDRG1mRNA相对表达量 t/F值 P值年龄（岁）≤60（n=37）>60（n=35）性别男（n=45）女（n=27）肿瘤大小（cm）≤4.5（n=41）>4.5（n=31）组织学分型高分化（n=16）中分化（n=41）低分化（n=15）TNM分期Ⅰ期△（n=16）Ⅱ期△（n=21）Ⅲ期△（n=24）Ⅳ期△（n=11）浸润深度（pT）T1、T2（n=23）T3、T4（n=49）淋巴结转移无（n=42）有（n=30）7.878±11.619 9.534±13.424 0.314 0.577 8.578±12.733 8.747±12.450 0.003 0.956 9.422±12.961 7.706±11.923 0.331 0.567 8.931±12.731 7.946±12.053 10.433±13.951 0.218 0.805 12.644±13.931 12.681±14.863 3.158±3.490 7.345±14.45 3.130 0.031 10.248±12.317 7.949±12.596 0.529 0.470 11.648±13.755 4.533±9.083 6.108 0.016

3 讨论

分化相关基因NDRG1是NDRG家族的第一个成员，1992年在N-myc全身性敲除的小鼠胚胎组织中发现的一个高表达的基因，因而得其名为NDRG1[6]，NDRG1蛋白主要在人的上皮细胞中表达，参与细胞生长、分化、胚胎发生、发育、应激、免疫反应等多种生物学功能[7]。NDRG1在恶性肿瘤中起抑癌或促癌作用，NDRG1抑制多种恶性肿瘤如前列腺癌、鼻咽癌、神经胶质瘤、胰腺癌增殖、侵袭及转移[8-12]，NDRG1的表达与胃癌细胞分化程度、浸润深度、淋巴结转移和TNM分期呈负相关[13]。相反的研究结果是NDRG1促进膀胱癌增殖、侵袭，促进膀胱癌、食管鳞状细胞癌的上皮-间质转化[14-15]。NDRG1促进非小细胞肺癌中肿瘤干细胞样特性[16]。

有的研究者通过免疫组化方法对非肿瘤结肠组织、结直肠癌根治标本的癌组织、结直肠癌转移组织（包括淋巴结、肝和膀胱转移）进行研究，发现NDRG1在结直肠癌样本中表达较低，相对表达量为（8.984±10.873），NDRG1表达降低与淋巴结、肝、膀胱等转移显著相关[4,17]。NDRG1的过表达抑制结直肠癌细胞细胞活力，迁移，侵袭和诱导结肠癌细胞凋亡[6]，抑制结直肠癌上皮-间质转化，其机制为激活Wnt/βcatenin信号通路、促进caveolin-1泛素化、减弱NF-κB信号[17-18]。由该文研究结果可知，NDRG1 mRNA在结直肠癌组织中的相对表达量（8.683±12.467）显著低于癌旁直肠黏膜组织（19.922±15.820）(P＜0.05)。与以上研究结果相近。表明NDRG1mRNA在结直肠癌中起抑癌的作用。

该研究采取RT-PCR技术检测患者癌组织和癌旁组织NDRG1 mRNA的表达情况，结果显示结直肠癌组织中NDRG1 mRNA相对表达量与TNM分期、和淋巴结转移相关，淋巴结转移患者癌组织NDRG1 mRNA相对表达量显著低于未发生淋巴结转移患者的癌组织，Ⅰ期的NDRG1 mRNA相对表达量高于Ⅲ期，Ⅱ期的NDRG1 mRNA相对表达量高于Ⅲ期。结直肠癌组织NDRG1 mRNA表达与患者的年龄、性别、癌组织分化程度、浸润深度及肿瘤大小无关。

综上所述，对于NDRG1在结直肠癌中的作用目前存在两种截然相反的观点，究其原因可能与研究过程中临床标本选择、患者因素及检测手段等密切相关。尚需要更多的研究去论证。