于丽丽，任 威，陈 超，伏 瑶，贾文妍

子宫内膜癌是女性生殖系统常见恶性肿瘤之一，约占所有生殖系统恶性肿瘤的30%[1]。近年来，其发病率呈逐渐增长趋势，且发病年龄也逐渐年轻化，严重危害女性的生命健康[2]。相关研究显示，肿瘤的分期、病理类型、淋巴结转移等是导致子宫内膜癌患者病情进展、预后不良的主要因素[3]。目前，对子宫内膜癌患者病情进展及预后的评估主要依据影像学及病理检查，缺乏特异性的标志物。S100钙结合蛋白A4(S100A4)是钙离子结合家族成员之一，参与细胞增殖、分化、凋亡等多种细胞进程。有学者研究发现，S100A4在结直肠癌、乳腺癌、子宫内膜癌等恶性肿瘤的发生、发展中发挥重要作用[4]。Huber等[5]报道显示，Toll样受体7(TLR7)在炎性疾病、组织纤维化疾病发展的过程中占有重要地位，但其与子宫内膜癌的关系尚未明确。细胞核因子-κBp65(NF-κBp65)为肿瘤特异性的凋亡抑制因子，是近年研究的热点[6]。本研究旨在探讨S100A4、TLR7及NF-κBp65在子宫内膜癌中的表达及对病情进展和预后的评估作用，为临床提高子宫内膜癌诊治效果提供新思路，现报告如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集2015年3月—2018年3月中国人民解放军北部战区总医院收治子宫内膜癌患者的临床资料。①纳入标准：均经手术病理检查确诊为子宫内膜癌[7]；均为初次确诊的患者，纳入研究前未接受放化疗治疗；无手术禁忌证。②排除标准：精神疾病或因语言障碍无法配合者；合并其他妇科恶性肿瘤或其他系统恶性肿瘤者；复发或已接受过其他治疗的子宫内膜癌患者。本研究最终选择符合纳入与排除标准的子宫内膜癌78例，均进行根治性手术治疗，设为子宫内膜癌组(共78份标本)。子宫内膜癌组年龄44～69(55.41±5.23)岁；国际妇产科联盟(FIGO)分期[8]：Ⅰ～Ⅱ期36例，Ⅲ～Ⅳ期42例。选取同时期进行手术治疗的子宫内膜不典型增生85例设为对照组(共85份标本)，年龄42～70(55.21±5.11)岁。两组基线资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究经医院医学伦理委员会批准执行。

1.2方法 采用免疫组织化学染色法检测S100A4、TLR7及NF-κBp65表达水平。两组标本均经4%甲醛溶液固定，常规石蜡包埋，每例均切片4张，厚度约4 μm。DAB显色剂显色，苏木精复染，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。操作步骤严格按照试剂说明书进行。S100A4、TLR7及NF-κBp65兔多克隆抗体均购自美国Epitomics公司。DAB显色剂及配套试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。L.3回旋式切片机由北京手术器械厂提供。S100A4、TLR7、NF-κBp65阳性判定标准[9]：结合阳性细胞百分比和染色强度判定结果，以子宫内膜腺上皮细胞质或细胞核出现棕黄色颗粒为阳性判定标准，随机选取5个高倍镜视野计算腺上皮细胞总数及阳性细胞数，阳性细胞百分比为0计0分，≤10%计1分，10%～25%计2分，25%～50%计3分，>50%计4分；细胞质无染色计0分，淡黄色计1分，棕黄色计2分，棕褐色计3分；两项评分之和≤2分为阴性，≥3分为阳性。

1.3随访 对所有子宫内膜癌患者随访3年，方式为门诊复查或电话随访，至患者死亡或随访截止时间(2021年3月)结束随访，记录患者的随访资料。

1.4观察指标 观察两组S100A4、TLR7及NF-κBp65表达情况，分析三者与子宫内膜癌患者病理特征的关系。通过绘制受试者工作特征(ROC)曲线，计算曲线下面积(AUC)评价S100A4、TLR7、NF-κBp65对子宫内膜癌患者预后死亡的预测价值。

2 结果

2.1S100A4、TLR7及NF-κBp65表达情况 子宫内膜癌组S100A4、TLR7、NF-κBp65阳性率均高于对照组(P<0.01)。见表1、图1。

表1 子宫内膜癌和子宫内膜不典型增生组织两组S100A4、TLR7及NF-κBp65表达情况[例(%)]

2.2S100A4、TLR7及NF-κBp65与子宫内膜癌患者病理特征的关系 FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移的子宫内膜癌患者S100A4、TLR7、NF-κBp65阳性率分别高于FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期、无淋巴结转移患者(P<0.05，P<0.01)；不同年龄、组织类型、组织学分级、肌层浸润深度的子宫内膜癌患者S100A4、TLR7、NF-κBp65表达情况比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 S100A4、TLR7及NF-κBp65与子宫内膜癌患者病理特征的关系(例)

2.3不同S100A4、TLR7及NF-κBp65表达患者预后情况 整理3年的随访资料，78例子宫内膜癌患者中死亡16例(20.51%)，生存62例(79.49%)。S100A4、TLR7、NF-κBp65阳性表达患者的病死率分别高于S100A4、TLR7、NF-κBp65阴性表达患者(P<0.05，P<0.01)。见表3。

表3 不同S100A4、TLR7及NF-κBp65表达子宫内膜癌患者的预后情况(例)

2.4S100A4、TLR7、NF-κBp65对子宫内膜癌患者预后死亡的预测价值 S100A4、TLR7、NF-κBp65及三者联合检测预测子宫内膜癌患者预后死亡的AUC分别为0.958、0.754、0.832及0.966，以三者联合检测最大。三者联合检测预测子宫内膜癌患者预后死亡的敏感度、特异度高于S100A4、TLR7及NF-κBp65单一检测(P<0.05)。见表4、图2。

表4 S100A4、TLR7、NF-κBp65对子宫内膜癌患者预后死亡的预测价值

3 讨论

子宫内膜癌发病率仅次于宫颈癌，居我国女性生殖道恶性肿瘤的第二位[10]。子宫内膜癌的发病机制仍未完全清楚，提高其诊治水平对保障女性生命健康意义重大。随着分子生物学、遗传学、免疫学的发展，有学者认为子宫内膜癌的发生可能与癌基因、抑癌基因的异常表达有关[11]。因此，进一步分析子宫内膜癌发生、发展的机制，寻找高敏感度的肿瘤标志物可提高子宫内膜癌的早期诊断率，有利于尽早对患者进行针对性治疗措施，降低病死率。S100A4是一种多肽蛋白，分子量为11.5 kD，由101个氨基酸组成[12]。国外学者报道，S100A4可抑制细胞凋亡，促进恶性肿瘤增殖，影响细胞骨架的重新排列，有利于促进肿瘤转移，S100A4在卵巢癌中呈正向调节作用，能够影响患者的预后[13]。可以推测S100A4对子宫内膜癌的发生、发展也可能具相同的作用。但是，国内外关于S100A4蛋白在子宫内膜癌中的表达情况，以及与患者预后关系的研究较少。本研究采用免疫组织化学染色的方法检测子宫内膜癌及子宫内膜不典型增生组织中S100A4、TLR7、NF-κBp65表达情况。研究结果显示，子宫内膜癌组S100A4、TLR7、NF-κBp65阳性率均高于对照组，这一研究结果与Hua等[14]、Li等[15]的报道相一致。

本研究还发现，FIGO分期为Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴结转移的子宫内膜癌患者S100A4、TLR7、NF-κBp65阳性率更高，且S100A4、TLR7、NF-κBp65阳性表达患者病死率也更高。随着FIGO分期的升高及出现淋巴结转移，S100A4、TLR7、NF-κBp65阳性率也会逐渐增高。相关研究发现，S100A4在正常乳腺、结肠等组织中无表达，但在乳腺癌、结直肠癌等恶性肿瘤中均存在高表达状态，认为S100A4与恶性肿瘤的发生密切相关，且可作为评估患者预后的独立危险因素[16]。TLR7作为Toll样受体的重要成员，广泛分布于免疫细胞中，参与免疫及炎症反应。近年来有研究指出，在卵巢癌、宫颈癌等恶性肿瘤中，均存在TLR7的异常表达[17]。Moro等[18]研究发现，与恶性肿瘤组织比较，正常子宫内膜及子宫内膜正常增生组织中TLR7的表达量明显减少；但在子宫内膜不典型增生组织中TLR7阳性率高于子宫内膜正常增生组织。因此推测TLR7在子宫内膜不典型增生转变为子宫内膜癌的过程中发挥重要作用。

NF-κBp65是具有多向调节功能的转录因子，可通过促进细胞外基质降解及肿瘤细胞上皮-间质转化等途径促进肿瘤的进展[19]。周骢等[20]报道显示，NF-κBp65在口腔鳞癌患者中阳性表达率高达75%，显著高于正常口腔黏膜组织。也有研究显示，NF-κBp65在颈部恶性肿瘤、宫颈癌、乳腺癌等组织中的阳性表达率均较高，且在肿瘤细胞生长、分化中起着重要作用[21]，因此NF-κBp65有望成为子宫内膜癌的诊断标志物及治疗靶点。

复习国内外相关文献发现，S100A4、TLR7及NF-κBp65联合检测预测子宫内膜癌患者预后的研究较少。本研究通过绘制ROC曲线，发现S100A4、TLR7及NF-κBp65联合检测的AUC最大。另外，三者联合检测的敏感度、特异度分别为90.63%、92.59%，显著高于S100A4、TLR7及NF-κBp65单一检测。可见三者联合检测可用于早期诊断子宫内膜癌，还能评估患者预后转归。

综上所述，S100A4、TLR7及NF-κBp65参与子宫内膜癌的发生、发展过程，在肿瘤侵袭过程中发挥重要作用。三者联合检测可提高子宫内膜癌的早期诊断率，还能判断患者病情进展情况，并对其预后进行评估。