（广州市公安局刑事技术所，广东广州 510440）

在人群拥挤的公交车、地铁等公众场合，有时会遇到一些变态男子用生殖器贴在女性身后摩擦以获得性高潮的猥亵案件，给受害人带来严重的心理伤害。受害人报案后，嫌疑人即使很快被抓获，往往也不承认犯罪事实。如何从受害人身上找到嫌疑人留下的精斑成为定罪的关键。嫌疑人一般射精到受害人的衣物上，传统做法是提取受害人的衣物送检，检验人员直接剪取衣物上可疑精斑进行检验，但有些受害人要求不破坏衣物，且检验后将衣物返还。作者对近年受理的20宗公众场所猥亵案件提取的23份衣物上可疑精斑采用棉签擦拭的方法采集，然后进行精斑预试验、确证试验和STR 检验，结果报道如下：

1 材料与方法

1.1 材料

23 份含有可疑精斑的衣物包括裙子、上衣、裤子，均为2014～2019年广州市公安局刑事技术所受理的20 宗公交车或地铁猥亵案的检材。

其中12宗案件有嫌疑人的口腔拭子作为比对样本。

1.2 方法

1.2.1 精斑检材采集：采用肉眼或激光物证勘查仪（上海恒光警用器材有限公司）查找衣物上可疑精斑部位，然后取1 支生物检材采集与保存套管（广州浩源实验器材科技有限公司），在其尖头棉签上滴1滴自带的LTE液湿润后，反复擦拭衣物上可疑精斑部位10 次以上，放回套管中，3天内进行检验。再用1支新的生物检材采集与保存套管棉签按上述方法擦拭衣物上可疑精斑部位作备份。

1.2.2 精斑预试验和确证试验：剪取擦拭后的棉签头部约芝麻大小置透明塑料膜上，滴1 滴α-磷酸萘酚-固蓝B 试剂［1］进行精斑预试验。

取剩下的棉签头置1.5mL 离心管中，加入200μL TES 缓冲液浸泡约10min，期间振荡数次，10000rpm/min 离心1min，取上清100μL 滴加到人精液PSA 金标试剂条（北京芬格尔安科技有限公司）加样区进行精斑确证试验。

1.2.3 DNA 提取：装检材的离心管中加入制备的裂解液（Lysis：1M DTT 为100∶1）500μL，按文献［2］在Maxwell™16 自动仪（Promega 公司，美国）上进行磁珠提取操作，洗脱体积100μL。人员样本亦按上法提取DNA。

1.2.4 DNA定量：取提取的精斑DNA模板2μL 按文献用Quantifiler 法医人类DNA 定量试剂盒（AB 公司，美国）在7500 型荧光定量PCR 仪（AB 公司，美国）上进行定量PCR反应。

1.2.5 荧光标记STR 复合扩增检测：采用PowerPlex®21 System（Promega 公司，美国）在ProFlex PCR 扩增仪（AB 公司，美国）上进行复合扩增，扩增体系10μL 中加入DNA 模板1μL。取1μL 扩增产物在AB 3130XL 遗传分析仪上进行毛细管电泳检测分型。

2 结果和讨论

23份衣物上可疑精斑擦拭物，采用α-磷酸萘酚-固蓝B 试剂进行精斑预试验，有21 份在1min 内呈紫红色阳性反应，进行人精液PSA 金标试剂条反应亦出现2 条紫红色带的阳性反应。10份精斑预试验和确证试验均为阳性的擦拭物提取的DNA进行定量PCR反应，测得浓度为0.32ng/μL～1.41ng/μL，100μL 洗脱最后得到的体积大约为85μL，因此最后获得的精斑DNA大约27～120ng，平均DNA 量为73.52 ±10.37ng。采用PowerPlex®21 System 试剂盒扩增检测，均成功获得完整的男性STR 分型，13份比中嫌疑人，2 份输入DNA 数据库中比中前科人员。有2 份擦拭物因α-磷酸萘酚-固蓝B试剂精斑预试验阴性，做确证试验时剪了少许带斑迹的衣物和擦拭物一起浸泡30min，结果仍是阴性，按接触DNA 提取检验亦未检出STR分型。根据案情，这是1 宗女事主因在地铁里摸到后背有湿而怀疑被猥亵的案件，因此可以确定其上衣和裙子上没有精斑。

对于衣物精斑检材，常规做法是直接剪取衣物上的可疑精斑部位进行精斑预试验、确证试验及DNA 提取、STR 检验。但公交车、地铁等公众场合的猥亵案中，犯罪分子侵害的对象往往是年青女子，留有精斑的衣物比较时尚昂贵，受害者即使同意将衣物脱下检验，也常要求检验时不破坏衣物并检验后返还。同时这类案件事主报案时精斑往往未干燥，直接采用棉签转移的方法操作简便快捷，不仅方便受害人也方便检验人员检验。尤其生物检材采集与保存套管内置干燥剂，棉签悬空放置，可杜绝检材粘附于包装物造成的损耗和未及时检验造成的腐败降解［3］。DNA 定量结果表明，衣物上干燥精斑的1 根擦拭物用磁珠法提取的平均DNA量为73.52±10.37ng，足以进行多次STR 检验。为保证将精斑尽可能多转移，可提取2 支擦拭物，1支检验，1支以备复核。为证实这种可能性，笔者检验了其中5支第2次擦拭的精斑，精斑预试验和确证试验同样均为阳性，并检出与第1次擦拭物相同的男性STR分型。

笔者曾遇到1 宗猥亵案件，怀疑嫌疑人直接把精液射到受害人的裸露大腿上，受害人自行用纸巾擦拭后报案，并将擦拭的纸巾提交给警方。考虑到纸巾污染受害人皮肤脱落细胞的可能，故采用了差异裂解法对纸巾上精斑进行DNA提取，但最后上清液和沉淀物提取的DNA均检出单一的男性STR分型。分析精斑DNA含量远超过女性皮肤脱落细胞DNA的含量，优势扩增使女性DNA未能检出。这意味着混有女性皮肤脱落细胞的精斑检材也可作为纯精斑检材一步提取DNA。

这类公共场所猥亵案定案的关键是精斑的确定。目前精斑的预试验方法是针对精液中的前列腺液的酸性磷酸酶反应。除精液外，部分蔬菜、水果也含有少量酸性磷酸酶，此外，某些避孕药酸性磷酸酶也呈弱阳性反应。因此现在行业标准“法庭科学DNA 实验室检验规范（GA/T 383-2014）”中对可疑精斑不再要求预试验，只要求确证试验。精斑的确证试验有精子检出法和人精液PSA 金标试剂条法。前者最可靠，但对于无精症或输精管结扎术者的精斑无法检测，且操作比较繁琐。后者采用免疫学的方法针对精液中的前列腺特异性抗原进行检测，灵敏度高，精液稀释60000 倍仍呈阳性反应，且不受精液中有无精子的影响，但一些特殊情况下会出现假阴性或假阳性的情况［4～5］。笔者一直坚持用α-磷酸萘酚-固蓝B 试剂进行精斑预试验，根据阳性反应的强弱决定下一步确证试验的检材量，并用TES 充分浸泡震荡检材10min 以上进行确证试验，检验近千份可疑精斑检材从未遇到精斑预试验与确证试验均为阴性却检出男性STR分型的情况。检验的20宗猥亵案23份可疑精斑检材中，21份精斑预试验与确证试验均为阳性的检材均成功检出男性STR分型，2份精斑预试验和确证试验均为阴性的衣物上可疑斑迹，后来按接触DNA提取检验亦未检出STR 分型。这说明公众场合猥亵案中衣物可疑精斑采用棉签擦拭采集结合磁珠法提取DNA检验是一种简便快捷的方法。