段炎珊 杨舒慧 张家润 孔慧 赵琰

摘要：目的 觀察绿茶在川芎茶调散治疗偏头痛的配伍使用中是否具有协同增效作用，及其潜在的作用机制。方法 选用颈背部皮下注射硝酸甘油构建偏头痛大鼠模型，观察各组给药后挠头、爬笼及洗脸次数等行为学评价指标变化，并检测大鼠血清中5-羟色胺（5-HT）和β-内啡肽（β-EP）的含量变化。结果 与正常组相比，模型组大鼠在各时间段行为学评分均显著增加（P<0.01）;且血清中5-HT、β-EP均显著降低（P<0.01），证明模型构建成功。川芎茶调散组、绿茶组、川芎茶调散（去绿茶）组在给药后30～90min内行为学评分与模型组相比均显著下降（P<0.05），三者任2组间无显著性差异。川芎茶调散组、川芎茶调散（去绿茶）组和茶碱组血清中5-HT含量与模型组比均显著升高（P<0.05），三者任2组间无显著性差异，而绿茶组和茶多酚组血清中5-HT含量与模型组相比无显著性差异。川芎茶调散组、川芎茶调散（去绿茶）组血清中β-EP含量与模型组相比均显著升高（P<0.01），两者之间无显著性差异;茶碱组和茶多酚组血清中β-EP含量与模型组相比均显著降低（P<0.01）;绿茶组、茶碱组和茶多酚组与川芎茶调散组比，血清中β-EP含量均显著降低（P<0.01）。结论 绿茶对川芎茶调散治疗偏头痛没有明显的协同增效作用。其机理可能是绿茶和茶碱、茶多酚促进了血清中5-HT的释放，但是茶碱和茶多酚却抑制了β-EP的释放，起到了一定的消减作用，所以茶碱和茶多酚不是绿茶止痛的主要药效物质。本研究为川芎茶调散的临床合理应用及其现代化研究提供了实验依据。

关键词：川芎茶调散;茶碱;茶多酚;偏头痛;5-羟色胺;大鼠

中图分类号：R285.5   文献标志码：A   文章编号：1007-2349（2020）12-0063-05

Compatibility Significance and Action Mechanism of Green Tea in the Treatmentof Migraine Patients with Chuanxiong Chatiao San

DUAN Yan-shan， YANG Shu-hui， ZHANG Jia-run， KONG Hui， ZHAO Yan

（Beijing University of Traditional Chinese Medicine， Beijing 100028， China）

【Abstract】Objective： To observe the synergistic effect of green tea in the compatibility of Chuanxiong Chatiao San in the treatment of migraine patients and its potential action mechanism. Methods： The migraine rat model was made by subcutaneous injection of nitroglycerin on the back of the neck. The changes in behavioral evaluation indexes as head scratching， cage climbing and face washing in each group after administration were observed， and the serotonin（5-HT）and β-endorphin（β-EP）content changes in the rat serum was detected. Results： Compared with the normal group， the behavioral scores of the rats in the model group increased significantly at each time period（P<0.01）and 5-HT and β-EP in the serum significantly decreased（P<0.01）， which proved the model building was successful. The behavioral scores of the Chuanxiong Chatiao San group， the green tea group， and the Chuanxiong Chatiao San（de-green tea）group were significantly lower than that of the model group within 30 to 90 minutes after administration（P<0.05）. There was no significant difference between any two groups of the three. The serum 5-HT content in the Chuanxiong Chatiao San group， Chuanxiong Chatiao San（de-green tea）group and theophylline group were significantly higher than that in the model group（P<0.05）， and there was no significant difference between any two groups of the three. There was no significant difference in serum 5-HT content between the green tea group and the tea polyphenol group when compared with the model group. Compared with the model group， the serum β-EP content in the Chuanxiong Chatiao San group and Chuanxiong Chatiao San（de-green tea）group were significantly increased（P<0.01）， and there was no significant difference between the two. The serum β-EP content of the theophylline group and tea polyphenol group was significantly lower than that of the model group（P<0.01）. The serum β-EP content of the green tea group， the theophylline group and the tea polyphenol group was significantly lower than that of the Chuanxiong Chatiao San group（P<0.01）. Conclusion： The green tea has no obvious synergistic effect on the treatment of migraine with Chuanxiong Chatiao San. The mechanism may be that the green tea and theophylline and tea polyphenols promote the release of 5-HT in the serum， but the theophylline and tea polyphenols inhibit the release of β-EP， playing a certain subtractive effect. Therefore， the theophylline and tea polyphenols are not the main medicinal substance of green tea for pain relief. This study provides experimental evidence for the rational clinical application of Chuanxiong Chatiao San and its modernization research.

【Key words】Chuanxiong Chatiao San， theophylline， tea polyphenols， migraine， serotonin， rat

偏头痛是一种常见的慢性神经血管性疾患，发病率较高，发作时痛苦难耐，严重影响患者的身心健康，其发病机制是复杂和多方面的。最近的证据表明，偏头痛被认为主要是一种神经血管疾病，其发病机制由脑血流相对减少来维持，随后是反应性高血血症、无菌炎症和疼痛途径的超敏化。早期血管收缩的主要触发因素包括遗传性或获得性脑血管病，即局部内皮或平滑肌功能障碍、动静脉畸形、自身免疫和炎症性疾病，以及脑微栓塞[1]。川芎茶调散在临床上治疗偏头痛疗效确切，对于绿茶在本方中的使用从初次出现便每每提及，有《医学心悟》中“食后，陈松萝细茶调下，日三服”的记载，结合明代闻龙《茶笺》中确定其为产于陈松萝山的绿茶。然而目前对绿茶是否在治疗中有明确作用以及茶调这一送服手段的机制探讨尚属空白。这一空白导致在临床中对是否需要茶服模棱两可。故实验选择硝酸甘油致大鼠偏头痛模型，通过大鼠行为学变化来考察绿茶是否对药效有影响;并通过对大鼠血清中相关神经递质的检测来探索可能的作用机制，為茶调法在川芎茶调散治疗偏头痛的临床使用提供实验依据。

川芎茶调散中君药川芎的有效成分川芎嗪在偏头痛治疗中作用尤为重要，川芎嗪注射剂用于临床治疗偏头痛作用显著[1]，结合方中其他药物判断，川芎茶调散起效机制与舒张平滑肌和扩张血管有关[2]。绿茶中的含量较多的主要活性成分有茶多酚、生物碱、茶皂素等[3]，茶碱具有舒张平滑肌，抗炎和免疫调节作用等[4]，茶多酚具有抗氧化的作用[5]，结合川芎茶调散在偏头痛治疗中可能的作用机制推测绿茶中茶碱和茶多酚可能通过舒张平滑肌和扩张血管来协同治疗偏头痛，但是目前未见相应的实验报道。本实验通过检测与偏头痛密切相关的5-羟色胺（5-HT）、β-内啡肽（β-EP）及行为学变化，来探讨绿茶活性成分茶碱（THP）和绿茶多酚（GTP）在镇痛作用中是否发挥协同配伍作用，从而明确组分绿茶在偏头痛治疗中的物质基础。

本实验初步揭示川芎茶调散中茶汤送服的作用以及作用机理，为临床使用川芎茶调散提供更加坚实可靠的现代药理依据;为川芎茶调散处方精减提供依据;为与川芎茶调散相关的现代中药产业研发奠定一定的研究基础。

1 材料

1.1 仪器 低温高速离心机（安徽中科中佳科学仪器有限公司，型号HC-2518R）;全自动酶标仪（Themo MK3 型酶联检测仪，美国Themo 公司）

1.2 药品与试剂 川芎茶调散（实验用药材购自北京鹤年堂药店）;绿茶（当年新下绿茶，产地位于四川省成都市大邑县花水湾景区附近）;盐酸川芎嗪、茶碱、茶多酚（均购自源叶生物）;大鼠5-羟色胺（5-HT）检测试剂盒（批号：L190408615）、大鼠β-内啡肽（β-EP）检测试剂盒（批号：L190114224）、生理盐水均购自北京拜尔迪生物技术有限公司;硝酸甘油注射液（北京益民药业有限公司，批号：H11020289，规格：1mL：5mg）。

1.3 动物 SD雄性大鼠72只，个体质量（200±20）g，购于斯贝福北京生物技术有限公司。

2 方法

2.1 样品的制备 生药剂量与比例参考《太平惠民和剂局方》中川芎茶调散的原著，换算现代单位：薄荷12 g，川芎12 g，荆芥12 g，细辛3 g，防风5 g，白芷6 g，羌活6 g，甘草6 g。生药一付共计62 g，加水8倍量煎煮30 min，滤过，药渣加水5倍生药量煎煮30 min，滤过，合并两次滤液，浓缩成生药浓度1 g/mL。

考虑绿茶在煎煮过程中容易氧化，参考实际生活中伍用绿茶的饮用方法，按照2 g绿茶泡于10 mL 90℃纯净水中的比例，每次浸泡10 min得到绿茶药液。绿茶每次冲泡方法一致，按照0.91 mg/kg（按茶叶量计）。

茶碱组（30 mg/kg·d）、茶多酚组（400 mg/kg·d）以上各组物质均溶于生理盐水中，灌胃给药体积为0.6 mL。

2.2 分组与造模

2.2.1 分组 适应性喂养结束后，将大鼠随机分7组，每组8只，并对各组大鼠进行序号标记。各组分别为：A：川芎茶调散组（川芎茶调散7.55 mg/kg，绿茶0.91 mg/kg）、B：川芎茶调散（去绿茶）组（川芎茶调散7.55 mg/kg）、C：绿茶组（绿茶0.91 mg/kg）、D：茶碱组、E：茶多酚组。另设X：正常对照组与Y：模型对照组，共计7个组别。

2.2.2 造模与给药方法 大鼠适应性喂养结束后，各给药组开始每日一次，连续7 d给予相应药液灌胃，Y组予以蒸馏水灌胃，X组正常饲养不做灌胃处理。选用硝酸甘油注射致大鼠偏头痛模型[2]。第7 d相应药液灌胃结束1h后，对X组以外各组大鼠进行颈背部皮下硝酸甘油注射液注射（10 mg/kg），对X组大鼠进行模拟抓取注射等量生理盐水。注射结束后将大鼠归放入笼。如大鼠出现竖毛、耳朵变红、修面（挠头）动作、往返动作增多则视为造模成功[3]。

2.3 行为学观察 造模结束10min后，采用行为学评分的方式描述大鼠偏头痛症状[4]：前爪挠头、爬笼、修面，以上各种表现出现一次记1分，记录90 min内（以30 min为一个时间段）各时间段大鼠前爪挠头、爬笼、修面的次数。

2.4 血清中血管活性物质水平检测 参照文献方法[5-6]，大鼠行为学评价结束后，以水合氯醛腹腔注射麻醉动物，腹主动脉采血（分离血清备用），采用ELISA法检测各组动物血清5-HT、β-EP含量，详细步骤按照试剂盒说明书操作。

2.5 统计学方法 各组数据用均数±标准差（x±s）表示;组间差异，用t检验。采用SPSS 22.0软件对实验数据进行统计学处理，以 P<0.05 或 P<0.01 确定差异是否具有统计学意义。

3 结果

3.1 行为学层面 与正常组相比，模型组大鼠在各时间段行为学评分显著增加（P<0.01）。与模型组比较，川芎茶调散（去绿茶）组（30～90 min）、绿茶组（30～90 min）、川芎茶调散组（30～90 min）、茶多酚组（0～60 min）、茶碱组（30～60 min）行为学评分显著下降（P<0.05或P<0.01）。各组行为学评分统计见表1。

3.2 血清中5-HT和β-EP层面 川芎茶调散（去绿茶）组、川芎茶调散组血清中5-HT含量均显著升高（P<0.05）;川芎茶调散组血清中β-EP含量显著升高（P<0.01），川芎茶调散（去绿茶）组血清中β-EP含量显著升高（P<0.01）。川芎茶调散组与绿茶组比，血清中β-EP含量显著升高（P<0.01）。茶碱组血清中5-HT含量与模型组比较均明显升高（P<0.05）。茶多酚虽无明显治疗作用但可使得血清中5-HT含量升高至模型组之上。具体数据详见表2。

4 讨论

川芎茶调散及川芎嗪治疗偏头痛卓有成效，国内外均有许多学者进行过相关临床实验，但作为川芎茶调散的特色——煎服法中茶叶的加减、用量及其对全方疗效影响却鲜有研究。基于此，本实验选取目前较为成熟的硝酸甘油皮下注射致大鼠偏头痛模型，分析川芎茶调散中绿茶在大鼠偏头痛治疗中的配伍意义及可能的作用机制。

4.1 绿茶在川芎茶调散中的配伍意义 注射硝酸甘油致大鼠偏头疼的造模方法为偏头痛大鼠造模最常用的方法，在试验进行中各组均出现了明显的前爪挠头、修面、爬笼这些偏头痛表现，前0～30 min，从行为学观察上看绿茶组治疗效果体现不明显，但川芎茶调散（去绿茶）组却有明显的行为学评分的降低，提示在初期川芎茶调散除去绿茶外其他组分发挥着明显的治疗作用，但随着时间的增加，绿茶的治疗作用逐渐显现出来，在60～90 min时，绿茶在偏头痛的治疗效果上优于川芎茶调散（去绿茶）组，而在整个过程中川芎茶调散伍组的治疗效果均明显而稳定。故从行为学角度看，在偏头痛治疗过程中，川芎茶调散（去绿茶）起效快但随着病程的推移治疗作用逐渐减弱，存在作用时间短的问题，而绿茶组起效较慢。川芎茶调散组与川芎茶调散（去绿茶）组和绿茶组相比，在90 min观察时间内各个观察时段行为学评分更为稳定，并且与川芎茶调散（去绿茶）的治疗作用相比没有显著差异。由此推断，川芎茶调散相对川芎茶调散（去绿茶）来说，可以得到更加持久地高效治疗，提高了药物在偏头痛治疗中的稳定性。

4.2 绿茶在配伍治疗偏头痛中的作用机制 最近的证据表明，偏头痛被认为主要是一种神经血管疾病。其发病机制由脑血流相对减少来维持，随后是反应性高血压症、无菌炎症和疼痛途径的超敏化。早期血管收缩的主要触发因素包括遗传性或获得性脑血管病，即局部内皮或平滑肌功能障碍、动静脉畸形、自身免疫和炎症性疾病，以及脑微栓塞。血管活性物水平变化也在偏头痛发生中起着重要作用。有研究认为，主要储存于血小板致密颗粒内 5-HT为偏头痛发生的重要物质基础之一，血小板激活可引起血浆5-HT水平增加，引起血管收缩，偏头痛发作，在发作期内血管扩张、颅内血流速度减慢而导致疼痛产生，血清中5-HT含量增高可能导致颅内血管收缩，血流速度增快而缓解疼痛[7-10]。而β-EP水平变化可反映中枢疼痛调节通路中的神经介质变化，其水平减少可致機体对蓝斑抑制减弱，导致血管活性物质释放，进而引起血管血流变化，导致偏头痛发作;神经降压素水平升高则可引起疼痛阈值降低，机体受刺激时头痛发作[7-9]。本试验结果显示，川芎茶调散与模型组相比，血清中5-HT含量和β-EP含量均明显升高。从5-HT层面，川芎茶调散组与川芎茶调散（去绿茶）组均在偏头痛治疗中有明显作用，二者疗效无显著差异，而绿茶组虽然没有明显的治疗作用，但也可升高血清中5-HT含量，且与川芎茶调散（去绿茶）组和川芎茶调散组无明显差异，提示绿茶可以使5-HT含量升高，但在川芎茶调散组起效过程中，去除绿茶以外其他组分应起主导作用。从β-EP层面，川芎茶调散（去绿茶）组与川芎茶调散组均与模型组存在显著差异，即可使β-EP含量显著上升，而绿茶组与模型组无显著差异，提示在提高β-EP含量而使偏头痛症状减轻方面，绿茶无明显效果，川芎茶调散（去绿茶）与川芎茶调散无明显差异。

值得思考的是，在本实验中，考虑到绿茶的强氧化性，在灌胃时选用的方法是：参考实际生活中伍用绿茶的饮用方法，按照2 g绿茶泡于10mL 90°纯净水中的比例，每次浸泡10 min得到绿茶药液。与浓缩后的川芎茶调散药液不同的是，灌胃绿茶茶汤未经浓缩而浓度较低。参照在《汤头歌诀》中本方使用方式记载为：“为末，每服三钱，茶调下。”考虑古代医家在施用本方时应为茶汤送服，这种送服方法大大提高了摄入绿茶的量，故在送服过程中，提示绿茶的量应较大。本实验绿茶组5-HT含量升高，虽无明显治疗作用，但与另外2组治疗组间无显著差异，猜想治疗作用不明显或可因为本次实验灌胃茶汤浓度过低。而绿茶组β-EP虽有含量升高但同另外两实验组存在明显差异，不可认为差距仅由于浓度不足造成，还应提高绿茶茶汤浓度后再进一步确定绿茶在此通道上对于偏头痛是否存在治疗作用。

血清中5-HT的含量变化是影响偏头痛发生的主要生化因素，其与偏头痛的发作期和间歇期均有关，发作时血浆中的5-HT水平降低，采取治疗后恢复期5-HT含量逐渐升高[11]。本实验结果证明，茶碱可使偏头痛大鼠血清中5-HT含量明显升高（P>0.05）证明绿茶中重要组分茶碱对于偏头痛有明显治疗作用。已知茶碱具有舒张平滑肌，抗炎、镇痛与免疫调节作用等[4，12]，在对抗平滑肌痉挛和消除缓解无菌性炎症上亦有作用，应为绿茶在川芎茶调散治疗偏头痛过程中起效的主要物质。从行为学观察结果看，茶多酚对于偏头痛亦有明显治疗作用，甚至比其他组的行为学表现更为稳定，但是茶多酚对于血清中的5-HT含量升高并不明显，而且茶碱和茶多酚抑制β-EP的释放，起到了一定的消减作用，所以茶碱和茶多酚不是绿茶止痛的主要药效物质。

综上所述，川芎茶调散对大鼠偏头痛有明显的治疗作用，绿茶对川芎茶调散治疗偏头痛没有明显的协同增效作用。虽然绿茶和绿茶中的主要成分茶碱、茶多酚单独给药后，在行为学上对于大鼠偏头痛治疗有效，但是绿茶在川芎茶调散复方配伍中的剂量与单独给药相比偏低，所以未表现出明显的药效增强作用。提示在临床使用本方时若要达到绿茶对于偏头痛治疗预期的增强效果或参照古方中记载的川芎茶调散为末而用茶汤送服的方式或提高绿茶的服用量。已知偏头痛发病原因众多，诊断复杂，对于明显辨证出是由于血管收缩引起的偏头痛的患者除使用川芎茶调散治疗外还应重视绿茶的伍用。二者可能不是绿茶在偏头痛治疗中的主要有效物质，机制需进一步探究。

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（收稿日期：2020-08-11）

基金项目：第四批全国中医（临床、基础）优秀人才研修项目（国中医药人教发〔2017〕24号）;国家级大学生创新创业训练项目（201910026022）

作者简介：段炎珊（1998-），女，本科在读，研究方向：中药物质基础研究。

通信作者：孔慧，E-mail：291429620@qq.com