姜会真，金晓飞，闫丽萍，冀雨芳，燕 平，司佳弘，李佳茹，曹韵茗

（山西中医药大学针灸推拿学院，山西晋中030619）

随着现代科学的发展，对针灸的研究不断深入，迫切需要在针灸实验动物过程当中寻求较为恰当的方法进行固定，然后进行针刺干预。以大鼠为例，对大鼠进行穴位定位后，根据不同干预的要求，加上运用不同的针刺方法，在实际操作过程当中，给科研实验及教学实践带来一定困难，迫切需要客观、可靠的固定方法。随着与国际接轨，以人文关怀的实验动物，根据实验动物伦理学要求，以3R原则为指导［1］，减少对动物的不必要的伤害和刺激，达到最佳的治疗目的。笔者通过提供更多固定的方法，为广大科研工作者及教学实践者提供更加符合实际应用、取材简便、制作简单、不易损坏的动物固定方法。

针刺大鼠过程的具体固定方法：以SPF级SD雌性大鼠，9 w左右，约275 g为例，许可证号：SCXK（京）2016-0006，北京维通利华动物技术有限公司。

1 麻醉状态下

1.1 麻醉束缚法

结果见图1。

图1 麻醉束缚法

操作需要物品准备：提前配制好水合氯醛、一次性注射器1 mL、橡皮筋5个、纸板或木板一块，长约29.5 cm、宽约18 cm、厚约0.5 cm，燕尾夹5个。具体操作方法：腹腔注射10%水合氯醛，麻醉生效后，用橡皮筋进行捆绑，俯卧位、仰卧位都需固定四肢及牙齿。根据实验操作目的予以针刺治疗及治疗时间要求进行固定，一般束缚时间不超过1 h，避免远端肢体因束缚导致缺血坏死。

本操作的优点：能够让大鼠的穴位更加暴露，更具有准确性，取穴方便，大鼠不会躁动。非束缚下的大鼠穴位不如束缚下暴露充分，影响取穴的准确性。

缺点：麻醉状态下如果麻醉深度把控不住，可能在麻醉状态下造成死亡；在针刺过程中，因为处于麻醉状态下，可能导致信息传导受阻，最终影响治疗效果。尽管之前中国兴起针刺麻醉和药物麻醉组合进行手术导致实验的结果不理想［2］。现在已经基本淘汰，但对于普通手术可采用此类方法进行手术。

1.2 麻醉自然法

结果见图2。

操作需要物品准备：除橡皮筋及燕尾夹外，余同上。本操作的优点：未行束缚，干扰因素较少，减少应激刺激，穴位选取方便。缺点：不如束缚下穴位暴露充分，麻醉可能导致死亡，影响经气感传，对实验针刺刺激减弱，可能影响较大。现在已经基本淘汰。

2 非麻醉状态下

2.1 高空孤立法

结果见图3。

图3 高空孤立法

操作需要物品准备：矿泉水瓶或饮料瓶，透明胶带，小木板 9 cm×7 cm，1.5～2 L容积的瓶子，瓶高约43 cm，直径约7.5 cm。先将空瓶灌满自来水，再将另外1个空瓶剪掉头部，留下底座，罩在有水的瓶子上方，最后用胶布把空瓶与灌满水的瓶子粘住。为使顶部平稳，放上提前制作好的木板或纸板，然后用胶布粘住固定。

利用大鼠胆小的特性，让大鼠脱离地面，用一个小型平板支撑，使大鼠尽量不动。治疗过程当中，大鼠会有大小便排出，最终会影响其固定。优点：让大鼠背部及头部充分暴露，大鼠的人为刺激较少。缺点：腹部穴位不宜针刺；高台固定通过胶布黏附大鼠［3］，造成大鼠的恐惧心理，可能造成大鼠的条件反射和躯体感觉诱发电位发生改变［4］，对实验结果可能造成影响。

2.2 束缚法

结果见图4。

图4 非麻醉束缚法

操作需要物品准备：利用木板、钉子6枚、绷带，对大鼠进行束缚，最后绑成8字型。进行针刺治疗部分穴位受束缚影响，但大部分背部及头部穴位不受影响。木板长约18 cm、宽约7 cm、高约3.5 cm。中间有直径约为5 cm的空心，与下方距离6 cm，上方距离11 cm，束缚绳长（纱布绷带）约为1～1.5 m。优点：较容易控制大鼠肢体，没有麻醉带来的可能影响，有利于背部穴位及四肢穴位暴露，不容易逃脱，有利于针刺。缺点：捆绑后，由于木板抵挡，不容易取胸腹部的穴位；大鼠束缚后挣扎可能导致胸廓压迫缩小，最终导致窒息后死亡。随着时间的推移，慢性束缚可能通过调节大鼠下丘脑弓状核CART通路，对大鼠的食欲造成影响，体质量下降［5］。束缚应激可以使大鼠免疫功能显著降低［6］。

2.3 鼠筒法

操作需要物品准备：圆柱筒长18.5 cm，直径5.5 cm，前后有阀门，可根据大鼠的体型大小进行调整。对大鼠进行针刺固定治疗，较为方便快捷。优点：利用大鼠钻洞习性，可迅速使大鼠入内，单独一人即可完成。缺点：主要是穴位选取较为局限。牢笼稍微欠缺，因为型号固定，部分体型较小的大鼠可在内部翻转运动，而体型过大则不能塞入筒内，李洋洋等［7］设计的大鼠头部可能被卡住导致窒息死亡，落地后网筒易变形等缺点。结果见图5。

图5 鼠筒法

2.4 悬挂法

结果见图6。

图6 悬挂法

操作需要物品准备：布或纱网状织物、燕尾夹若干、挂绳，剪刀，布长约19 cm、宽约17 cm、离上方2 cm，用剪刀剪出前肢洞口长约2 cm，后肢长约3 cm，前肢和前肢两者之间约4 cm，前后肢相距约12 cm。穿前肢后夹住上方，再穿后肢，用夹子夹住，最后夹在电线上。这是利用大鼠不能着力，并且挣脱困难的特点而制作的。优点：减少对大鼠的人为刺激，穴位选取不受影响，必要时可以提前按穴位定位后剪一约0.5 cm大小的洞。缺点：穴位暴露稍受限制，部分大鼠束缚过松可造成大鼠挣脱，存在大鼠掉入地面受伤的风险；针刺针在大鼠治疗过程可能出现脱落状况；在抓握过程中存在被大鼠咬伤的风险。

3 结论

让大鼠处于完全放松状态下进行针刺治疗，就目前水平而言基本上很难做到。初次接受针刺大鼠躁动不安较为明显，一般随着固定次数越多，后期大鼠较为适应这种刺激，固定时相对较为安静，较为配合固定。根据针刺的部位来选择适合的固定方法，以腰背部腧穴为主，选择顺序为孤立高台法>牢笼法>悬挂法>木板捆绑法>麻醉非束缚法>麻醉束缚法；以胸腹部选穴为主，选择顺序为优化牢笼法>悬挂法>麻醉束缚法>麻醉非束缚法>木板束缚法。牢笼法及悬挂法较为实用，操作简便，其他固定方法使选穴局限。高台法除了胸腹取穴不方便外，在固定方法中大鼠相对处于较为放松的状态；捆绑法大鼠死亡率最高，逃脱也较高；麻醉法因麻醉状态而导致死亡率最高，其他方法逃脱率较大。固定方法可根据大鼠的大小灵活设计。

4 讨论

根据大鼠的生理学特性，大鼠天性胆小，容易受外界刺激的干扰和影响；针刺对大鼠来说是一种相对较为强烈的伤害性刺激，加之市面上的一些大鼠使用的针具及艾灸材料不够完善，匹配程度较差，就体格来讲，对大鼠来说相对较大；由于大鼠的伸缩性较好，皮肤及肌肉之间错开的范围相对较大，束缚后造成穴位定位稍有偏差，可能影响到治疗效果，最终可能会对实验数据造成影响。

固定器械的设计目的应主要满足以下几点要求：第一、治疗时穴位要充分暴露；第二、尽量让大鼠处于放松状态，减少应激刺激，避免干扰和影响；第三、总体时间需要维持到治疗结束；第四、避免在抓握过程当中被大鼠咬伤，实验过程安全性第一；第五、治疗过程中尽量降低大鼠死亡率，以便实验最终顺利进行，以不影响实验为目的等。部分实验需进一步研究，以高度为例，在多少范围内才为最佳高度，未能做出较为客观依据，对大鼠应激最小，在实验过程当中对大鼠外界干扰因素较少；为此，通过多方面的评估，以及所在实验室所能够就地取材，为广大科研工作者及教学实践者提供更具有科学及实用性的方法，为针刺实际操作过程中提供较为客观的指导方针。

固定方法同时可以为尾部采血［8］、尾部注射、红外照射［9］等提供合理的要求，因此可以拓展其应用范围，不仅局限于针刺干预。固定器本身的材质要求，主要以牢固、原材料容易获取、价格较为低廉、制作简便、实用等，上方描述的六大类方法，基本能够满足目前实际运用操作。

固定方法的具体设计还需要科学的进一步制定，就布料而言就是一个比较大的问题，及其四肢洞的距离，离地面悬空高度等，以哪种最为合适，通过大量的动物实验，检测对其体内物质水平改变，从多方面考虑选取影响最小的固定方法，来得出较为科学严紧的结论，为最佳大鼠固定方法提供依据。