张鸿雁，王文军，邓丽莉,2，姚世响,2，曾凯芳,2,*

（1.西南大学食品科学学院，重庆 400715；2.西南大学食品贮藏与物流研究中心，重庆 400715）

膜醭毕赤酵母（Pichia membranifaciens）为广谱抗菌性拮抗酵母，可控制不同果实的采后病害[1-2]。而目前膜醭毕赤酵母控制采后病害多采用新鲜的液体制剂，其对控制果蔬采后病害具有显著的效果，为实现其商业化应用，制备成易于应用和储存的干燥制剂是其可行性方法之一[3]。本实验室通过真空干燥的方法，并添加定量保护剂将膜醭毕赤酵母制备成干燥生防制剂，但在酵母经热干燥制备活性干酵母过程中诸多因素如高温、氧化应激等胁迫条件等影响着活性干酵母的最终活性，最终使干酵母制剂的活性大大降低[4]。

在热干燥过程中酵母细胞需承受热应力、脱水应力、渗透应力、机械应力等。不同微生物、不同菌株对热的耐受力不同，酵母细胞细胞壁的主要组分是葡聚糖、甘露聚糖和蛋白质，整体细胞壁结构较厚[5]，所以对高温和外界压力具有较好的耐受性[6]。虽然酵母对外界压力的耐受力较好，但相关研究表明高温仍会使其大分子物质如蛋白质、核酸的高级结构遭到破坏；脱水应力也会通过改变细胞质膜的流动性或物理状态以及引起脂质过氧化而损伤细胞质膜[7]，最终导致细胞内容物外泄[8]。热干燥过程中酵母同时受多种压力的影响，造成酵母细胞损伤。在引起酵母细胞损伤的同时，当温度或渗透压突然变化时，酵母细胞也会通过调节自身代谢和基因表达适应新环境，如酵母细胞应对逆境条件时会产生应激保护性物质，如甘油、热激蛋白、海藻糖等[9]。因此可在干燥前增强酵母对胁迫环境的适应性，从而改善细胞对胁迫压力的耐受性。在干燥前可通过热处理[10-11]的方法改善菌体对逆境的耐受力，使之在随后的干燥及贮藏过程中菌体的存活率更高；或使用过氧化氢增加酵母的抗氧化应激能力[12]。短暂的暴露于一个非致死逆境条件下，可诱导酵母对更极端环境产生耐受力；另外在培养基中加入酵母不可利用的组分如氯化钠[13-14]可诱导细胞的渗透压休克反应；添加外源氯化钙也可以提高酵母细胞对热的耐受力[15]。

虽然压力预处理已被报道可诱导微生物的各种非生物胁迫的交叉保护，但通过压力预处理提高膜醭毕赤酵母对热环境耐受力，并提高真空干燥后活性的相关内容鲜见报道，因此本研究通过在真空干燥前对酵母进行热处理或过氧化氢处理，在酵母培养基中添加氯化钠、氯化钙等方法提高酵母对外界环境的耐受力，对于制备高活性、高效率的生防干酵母制剂是很必要的。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

膜醭毕赤酵母（Pichia membranifaciens CICC 32259）购自中国工业微生物菌种保藏理中心。该菌株在NYDA培养基（酵母膏5 g、牛肉浸膏8 g、葡萄糖10 g、琼脂20 g、水1 000 mL）、4 ℃条件下保藏。每2 个月活化1 次。

1 mg/mL 海藻糖标准溶液：准确称取0.100 g海藻糖，加水溶解，定容至100 mL；蒽酮溶液：准确称取0.080 g蒽酮溶于50 mL体积分数76.4%硫酸溶液；0.5 mol/L三氯乙酸溶液：称取40.847 g三氯乙酸，加水溶解，稀释至500 mL。

葡萄糖、琼脂粉、酵母 浸膏、牛肉膏、谷氨酸钠、聚乙烯吡咯烷酮（polyvinyl pyrrolidone，PVP）、过氧化氢、氯化钠、氯化钙 成都科龙化工试剂厂；海藻糖美国Sigma公司；脱脂奶粉 杜尔伯特伊利乳业有限责任公司。

1.2 仪器与设备

SW-CJ-1F超净工作台 苏净集团安泰有限公司；B203生物显微镜 重庆奥特光学仪器有限公司；BS-4G振荡培养箱 金坛市富华仪器有限公司；DHP-9082电热恒温培养箱、DZF-6000真空干燥箱、HWS-28数显恒温水浴锅 上海齐欣科学仪器有限公司；PSX-280手提式高压杀菌锅 上海申安医疗器械厂；XB.K.25血球计数板型 上海求精生化试剂有限公司；GL-20G-II高速冷冻离心机 上海安亭科学仪器厂；SL602N高精显电子天平 上海民桥精密科学仪器有限公司；DDS-307A电导率仪 上海仪电科学仪器股份有限公司。

1.3 方法

1.3.1 酵母悬浮液的制备

膜醭毕赤酵母接种到NYDA培养基上，28 ℃活化48 h，再将活化好的酵母接种到NYDB培养基中，28 ℃、180 r/min培养24 h，之后1 351×g、4 ℃离心10 min，弃上清液，加入无菌水，再次离心，加入无菌水，血细胞计数板计数，最后制成109CFU/mL的酵母悬浮液。

1.3.2 保护剂悬浮液制备

20%海藻糖、2%谷氨酸钠、5% PVP与20%脱脂奶粉，用无菌水配成保护剂混合液，最后与酵母悬浮液1∶1混合后使混合液中保护剂浓度达到所要求浓度。

1.3.3 不同预处理

1.3.3.1 热处理温度及时间筛选

取10 mL酵母悬浮液于离心管中，将其分别置于37、40、43 ℃水浴加热，并分别在20、30、40 min时取样并测定处理前后活菌数[10]。实验重复3 次。

1.3.3.2 过氧化氢处理浓度及时间筛选

取2 mL酵母悬浮液于10 mL离心管，加入2 mL过氧化氢溶液使混合液中过氧化氢浓度分别为0、1、3、5、10、50、100 mmol/L，置于28 ℃、200 r/min振荡培养，然后分别在20、40、60 min时取样，离心去上清液并洗涤2 次保证脱除过氧化氢，加水至原体积并稀释涂布，测定处理前后酵母活菌数[12]。实验重复3 次。

1.3.3.3 培养基中添加氯化钠、氯化钙对酵母活性的影响

NYDB培养基分别添加0、0.1、0.3、0.5、0.7、0.9 mol/L氯化钠[14]，0、1、5、10 mmol/L氯化钙[15]，培养24 h后，先取各发酵液测定酵母细胞初始活菌数，再将添加不同浓度氯化钠的发酵液离心收集菌体，之后分别用无菌水悬浮到109CFU/mL。

1.3.4 酵母的真空干燥

干燥前预处理：1）对酵母悬浮液进行40 ℃、40 min热处理（HT），5 mmol/L、40 min过氧化氢处理（H2O2T）；2）酵母悬浮液与保护剂悬浮液等体积混合后进行40 ℃、40 min热处理（HT（Y&P）），5 mmol/L、40 min过氧化氢处理（H2O2T（Y&P））；3）NYDB培养基添加0～0.9 mol/L氯化钠、0～10 mmol/L氯化钙培养后离心收集悬浮液。

保护剂添加：1）不添加保护剂：对照组：未经任何处理酵母悬浮液+等体积无菌水，处理组：经HT/H2O2T/NaCl/CaCl2处理后酵母悬浮液+等体积无菌水；2）添加保护剂：对照组：未进行任何处理的酵母悬浮液+等体积保护剂悬浮液；处理组：经HT/H2O2T/NaCl/CaCl2处理后酵母悬浮液+等体积保护剂；3）酵母悬浮液与保护剂悬浮液等体积混合后进行热处理（HT（Y&P））、过氧化氢处理（H2O2T（Y&P））。以上样品在旋涡混合仪中均匀混合1 min，之后在室温下孵化60 min，在此过程中不断摇动以确保酵母与保护剂混合均匀。

真空干燥：为避免其他因素对干燥膜醭毕赤酵母存活率的影响，将膜醭毕赤酵母的初始浓度、生长条件、干燥温度、复水条件等影响因素固定。将混合液样品（2 mL）加入到40 mm×25 mm称量皿中，并将样品置于真空干燥箱中，干燥温度为40 ℃，真空度为0.07 MPa[6]，当混合物的水分质量分数约为5%时结束干燥，测定存活率。实验重复3 次。

1.3.5 酵母活性测定

1.3.5.1 热处理及过氧化氢处理后酵母存活率测定

酵母存活率用处理前酵母的菌落总数（N0）以及处理后酵母的菌落总数（Nf）表示[17]。处理前，将适当稀释倍数的酵母涂布在NYDA平板上。处理结束后，将适当稀释倍数的酵母涂布在NYDA平板上；之后将平板置于28 ℃培养48 h。实验重复3 次，用下式计算存活率：

1.3.5.2 添加氯化钠、氯化钙培养后酵母活菌数测定

将添加不同物质培养后酵母适当稀释倍数的酵母涂布在NYDA平板上，将平板置于28 ℃培养48 h之后取出计数。

1.3.5.3 经不同预处理酵母真空干燥前后活性测定

稀释涂布法测定存活率见1.3.5.1节。

电导率的测定：1）将真空干燥前经不同预处理的酵母与保护剂的混合液；2）经不同预处理、真空干燥后复水的混合液振荡并充分混合，使用电导率仪测定以上样品的电导率[18-19]。测定结果表示为真空干燥前后电导率之差。实验重复3 次。

1.3.6 不同处理后酵母海藻糖含量测定

经热处理、过氧化氢处理、培养基添加氯化钠处理、培养基添加氯化钙处理后，将酵母悬浮液离心并洗涤后收集菌体待用。

1.3.6.1 酵母细胞中海藻糖的提取

取经不同处理后的酵母菌泥250 mg（湿质量）重悬浮于2 mL无菌水，并加入等质量的酸洗玻璃珠（0.5 mm），0 ℃超声15 min，再煮沸15 min；12 000 r/min离心20 min，取上清液测定海藻糖[20]。

1.3.6.2 蒽酮比色法测定海藻糖

海藻糖标准曲线的绘制参考骆莹等[21]的方法。

不同处理后酵母胞内海藻糖的测定[20]：在1.3.6.1节所提上清液中加入4 mL 0.5mol/L三氯乙酸溶液。准确吸取样液1 mL，分别置于干燥试管中，分别加入5 mL蒽酮溶液，振荡均匀，在沸水浴中煮沸10 min后立即冷却到室温，摇匀后在选定的波长下比色，测定吸光度，以空白作对照。根据海藻糖标准曲线确定胞内海藻糖的含量。

1.4 数据统计与分析

运用Excel 2016统计分析不同处理后膜醭毕赤酵母存活率、活菌数、电导率海藻糖含量等数据，以 ±s表示。运用SPSS 17.0（SPSS Inc., Chicago, IL, USA）对数据进行方差分析，利用Duncan多重比较进行显著性分析，P值小于0.05，表示差异显著。运用Graphpad prism 7.0绘制图表。

2 结果与分析

2.1 热处理对膜醭毕赤酵母真空干燥后活性的影响

2.1.1 热处理温度及时间

图1 膜醭毕赤酵母在不同热处理温度下的存活率Fig. 1 Survival of heat shock (HS)-treated P. membranifaciens cells

如图1所示，37 ℃和40 ℃热处理对酵母存活率基本无影响，43 ℃热处理时，随着时间的延长，酵母存活率下降，40 min后下降明显。因此热处理温度不宜超过43 ℃，本研究选择40 ℃、40 min为酵母热处理温度和时间。

2.1.2 热处理后真空干燥膜醭毕赤酵母活性测定

如图2A、B所示，经40 ℃热处理40 min后的酵母在真空干燥后具有更高的存活率，与未经热处理的对照组有显著性差异；酵母悬浮液与保护剂的混合液热处理后进行真空干燥相对于其他处理组具有更高存活率，且差异显著。如图2C、D所示，经40 ℃热处理40 min后干燥前后电导率之间差值比未经热处理组的差值较小，电导率之间差值越小，说明干燥后酵母细胞死亡越少，存活率相对较高，即经热处理后酵母细胞死亡减少，活菌数相对较高；电导率和存活率结果呈一致性；说明在真空干燥前，对膜醭毕赤酵母进行热处理可以在一定程度上提高热干燥后酵母的活性。

图2 热处理对真空干燥膜醭毕赤酵母存活率（A、B）及电导率（C、D）的影响Fig. 2 Effect of heat shock (HS) on survival (A, B) and extracellular conductivity (C, D) of P. membranifaciens after vacuum drying

2.2 过氧化氢处理对膜醭毕赤酵母真空干燥后存活率的影响

2.2.1 过氧化氢处理浓度及时间

图3 膜醭毕赤酵母在不同浓度过氧化氢处理下的存活率Fig. 3 Survival of P. membranifaciens cells treated with different concentrations of H2O2

如图3所示，膜醭毕赤酵母的存活率随着过氧化氢浓度的增加和处理时间的延长而降低；1～5 mmol/L过氧化氢对酵母处理20～60 min后对其存活率基本没有影响，10～100 mmol/L过氧化氢对酵母处理20～60 min时，随着时间的延长，酵母存活率下降明显；因此本研究选择5 mmol/L过氧化氢处理40 min酵母提高其干燥后存活率。

2.2.2 过氧化氢处理后真空干燥膜醭毕赤酵母活性测定

图4 过氧化氢处理对真空干燥膜醭毕赤酵母存活率（A、B）及电导率（C、D）的影响Fig. 4 Effect of H2O2 concentration on survival (A, B) and extracellular conductivity (C, D) of P. membranifaciens after vacuum drying

如图4A、B所示，经5 mmol/L过氧化氢处理40 min后的酵母在真空干燥后具有更高的存活率，与对照组有显著性差异；酵母悬浮液与保护剂的混合液经过氧化氢处理后进行真空干燥相对于其他处理组存活率较低，且差异显著；如图4C所示，在不添加保护剂时，过氧化氢处理组酵母真空干燥前后电导率之间差值比未经过氧化氢处理组的差值较高，该结果和存活率结果相反。如图4D所示，在添加保护剂时，未经过氧化氢处理组的酵母真空干燥前后电导率差值最小，其次为过氧化氢处理组，酵母悬浮液与保护剂同时进行过氧化氢处理组差值最大；该结果和存活率结果不相符，一方面可能是过氧化氢处理对电导率有影响，另一方面是酵母和保护剂同时进行过氧化氢处理后洗涤过程中保护剂有部分被洗掉，保护效力降低，酵母死亡数增加。

2.3 添加氯化钠处理对膜醭毕赤酵母真空干燥后存活率的影响

2.3.1 培养基中添加氯化钠对酵母活性的影响

图5 氯化钠浓度对膜醭毕赤酵母活菌数的影响Fig. 5 Effect of different concentrations of sodium chloride on viable count of P. membranifaciens

如图5所示，随着氯化钠浓度的增大，酵母活菌数下降。经显著性分析显示，添加0.3～0.9 mol/L氯化钠后其活菌数均显著低于对照组，说明该浓度氯化钠抑制酵母生长。

2.3.2 培养基中添加氯化钠后真空干燥膜醭毕赤酵母活性测定

图6 氯化钠浓度对真空干燥膜醭毕赤酵母存活率（A、C）及电导率（B、D）的影响Fig. 6 Effect of different concentrations of sodium chloride on survival(A, C) and extracellular conductivity (B, D) of P. membranifaciens after vacuum drying

如图6A所示，不添加保护剂时对酵母经真空干燥，培养基中添加0.7～0.9 mol/L氯化钠处理组的存活率比对照组高，且具有显著性差异；如图6B所示，不添加保护剂时酵母干燥前后电导率差值从小到大依次为：0.9 mol/L氯化钠处理组＜0.7 mol/L氯化钠处理组＜0.5 mol/L氯化钠处理组＜0.3 mol/L氯化钠处理组＜0.1 mol/L氯化钠处理组＜对照组，且各组之间均具有显著性差异；该结果和存活率结果基本一致，说明在不添加保护剂进行真空干燥时，培养基中添加0.7～0.9 mol/L氯化钠可提高热干燥后酵母的活性。

如图6C所示，在添加保护剂时对酵母真空干燥，添加0.1～0.7 mol/L氯化钠处理组的存活率与对照组的存活率无显著性差异；添加0.9 mol/L氯化钠处理组的存活率显著低于对照组。如图6D所示，添加保护剂时，培养基中添加0.7 mol/L氯化钠处理组的酵母其干燥前后电导率之差最小，相对于对照组和添加0.1～0.3 mol/L氯化钠处理组有显著性差异。

2.4 添加氯化钙处理对膜醭毕赤酵母真空干燥后存活率的影响

2.4.1 培养基中添加氯化钙对酵母活性的影响

图7 氯化钙浓度对膜醭毕赤酵母活菌数的影响Fig. 7 Effect of different concentrations of calcium chloride on viable count of P. membranifaciens

如图7所示，随着氯化钙添加浓度的增加，酵母活菌数升高，且添加10 mmol/L氯化钙后酵母活菌数和对照组活菌数有显著性差异。

2.4.2 培养基中添加氯化钙后真空干燥膜醭毕赤酵母活性测定

图8 氯化钙浓度对真空干燥膜醭毕赤酵母存活率（A、C）及电导率（B、D）的影响Fig. 8 Effect of different concentrations of calcium chloride on survival(A, C) and extracellular conductivity (B, D) of P. membranifaciens after vacuum drying

如图8A所示，在不添加保护剂时添加5 mmol/L氯化钙处理组真空干燥后酵母存活率显著高于对照组；如图8B所示，在不添加保护剂时酵母干燥前后电导率从小到大依次为：10 mmol/L氯化钙处理组＜5 mmol/L氯化钙处理组＜1 mmol/L氯化钙处理组＜对照组，各组之间均具有显著性差异；该结果和存活率结果有差异，综合干燥后存活率及干燥前后电导率之差，在不添加保护剂对酵母进行真空干燥时添加5 mmol/L氯化钙可有效提高酵母活性。

如图8C所示，在添加保护剂时添加1～10 mmol/L氯化钙处理组的酵母真空干燥后存活率与未添加氯化钙的对照组存活率无显著性差异；如图8D所示，在添加保护剂时，培养基中添加10 mmol/L氯化钙处理组的酵母真空干燥前后电导率之差最小，相对于对照组和添加1 mmol/L和5 mmol/L氯化钙处理组有显著性差异，除添加10 mmol/L氯化钙处理组外，该结果和存活率结果基本一致。

2.5 不同预处理后酵母细胞内海藻糖含量变化

图9 不同处理后膜醭毕赤酵母细胞内海藻糖含量Fig. 9 Trehalose contents of P. membranifaciens cells under different treatments

如图9A所示，对酵母悬浮液进行热水浴处理后酵母细胞海藻糖含量升高，与未经热处理的对照组有显著性差异。如图9B所示，经过氧化氢处理后酵母细胞海藻糖含量升高，与未经过氧化氢处理的对照组有显著性差异。如图9C所示，添加0.7 mol/L氯化钠时酵母培养后产生的海藻糖含量最高，之后依次为0.9 mol/L＞0.5 mol/L＞0.3 mol/L＞0.1 mol/L＞对照组，且各组间差异显著。如图9D所示，添加5 mmol/L氯化钙时酵母培养后产生的海藻糖含量最高，之后依次为10 mmol/L＞1 mmol/L＞对照组，且各组间差异显著。

3 结论与讨论

了解酵母自身耐受力对于干燥后活性有重要影响，因而通过不同预处理提高酵母对逆境压力的耐受性，最终提高干燥后酵母活性是一种较为可行的方法，先前已有研究表明生防酵母预先适应一个较为温和的压力环境后，对后续致死性胁迫压力的耐受性会增强[22]。如Cheng Zhe等[11]研究发现高温（48 ℃）、氧化应激（70 mmol/L H2O2）和盐胁迫（3 mol/L NaCl溶液）等会对Rhodotorula mucilaginosa造成氧化损伤，而40 ℃、30 min的热处理可提高粘红酵母的胁迫耐受性和生物防治效果；热处理激活酵母抗氧化系统，从而降低其氧化损伤，因此热处理是改善生防酵母功效的可行方法；刘嘉等[10]先将拮抗酵母置于40 ℃热水浴30 min，随后将其置于高温或氧化压力下，结果表明经热处理后酵母中TPS1（海藻糖-6-磷酸合酶基因）上调，海藻糖积累较多，活性氧积累量减少；Desmond等[23]通过热处理（52 ℃、15 min）方式提高Lactobacilli耐受力，喷雾干燥时，热适应处理的乳杆菌活性增加18 倍。本研究结果也表明40 ℃热处理40 min后膜醭毕赤酵母细胞内海藻糖含量升高（图9A），有效提高真空干燥后膜醭毕赤酵母的活性（图2）；唐飞等[24]在培养基中添加0.5%氯化钠，干燥前对Rhodosporidium paludigenum 39 ℃热激5 min，以20%脱脂乳为保护剂进行喷雾干燥时，干燥活菌数显著提高；因此将酵母细胞短暂的暴露于一个非致死温度下，可诱导酵母对更高温度或其他极端环境的耐受力。

温和氧化压力可以提高酵母菌对后续不利环境的抵御能力，刘嘉等[12]用5 mmol/L过氧化氢对Candida oleophila处理30 min，增强酵母对随后致死性氧化压力（50 mmol/L H2O2），高温（40 ℃）和低pH值（pH 4）的耐受性，氧化压力为非生物胁迫，通过上调参与氧化应激的相关基因诱导提高酵母的耐受性，从而提高酵母生物防治效力；本研究选定5 mmol/L过氧化氢对膜醭毕赤酵母进行预适应处理（图3），结果表明真空干燥后经过氧化氢预适应处理的酵母比对照组存活率高（图4），且经过氧化氢预适应处理的酵母细胞中海藻糖积累较多（图9B），说明经过氧化氢预适应处理后酵母细胞中应激保护性物质海藻糖含量升高提高了酵母的耐受性，从而使随后在真空干燥后酵母存活率升高。

在培养基中加入酵母不可利用的组分可以诱导酵母细胞的渗透压休克反应，如氯化钠[13]，盐胁迫诱导荧光假单胞菌EPS62e中海藻糖，N-乙酰谷氨酰胺和甘油葡糖苷的合成，但延缓菌体的生长速率[14]，渗透压处理的方式提高生物防治剂Pseudomonas fluorescens在果实上的适应性，提高其对病原菌的防治功效；Wang Yifei等[25]在Rhodosporidium paludigenum培养基中添加6.6%氯化钠调节水分活度为0.95，速冻后，处理组的酵母活性较对照组高；本研究也在培养基中添加不同浓度氯化钠来提高酵母细胞的耐受力，结果显示添加0.7 mol/L氯化钠后诱导的酵母细胞内海藻糖产生量最高（图9C），将添加不同浓度氯化钠培养后的酵母在真空干燥条件下干燥后测定其活性，结果显示在不添加任何保护剂时，添加0.7 mol/L和0.9 mol/L氯化钠处理组的酵母活性较高（图6A、B），而在添加保护剂的情况下，添加不同浓度氯化钠处理的酵母干燥后活性基本无显著性差异（图6C、D），说明在该真空干燥过程中，保护剂对酵母活性的影响较大。

添加外源氯化钙也可提高酵母细胞对热的耐受力，如添加1 mmol/L或5 mmol/L氯化钙增强酵母细胞抗氧化酶的活性、减少活性氧的积累、降低热对酵母细胞内蛋白的氧化性损伤[15]；本研究也通过在培养基中添加不同浓度氯化钙提高酵母细胞的耐受力，结果显示添加5 mmol/L氯化钙后诱导的酵母细胞内海藻糖产生量最高（图9D），将添加不同浓度氯化钙培养后的酵母经真空干燥后测定其活性，结果显示在不添加任何保护剂时，添加5 mmol/L氯化钙培养后的酵母活性较高（图8A、B），而在添加保护剂的情况下，添加不同浓度氯化钙处理的酵母干燥后活性基本没有显著性差异（图8C、D），同样说明在真空干燥过程中，保护剂对酵母活性的作用较大。

除以上预处理方式外，还可使用抗坏血酸来增强酵母对氧化胁迫的耐受力。Li Chaolan等[26]通过250 μg/mL抗坏血酸处理提高Pichia caribbica氧化应激耐受性，经抗坏血酸处理的酵母表现出较高的生存力，细胞内活性氧水平也较低。还可在培养基中添加甘油、葡萄糖（水分活度=0.96）、海藻糖（水分活度=0.97）[27]、山梨醇（水分活度=0.98）[28]或柠檬酸[29]来调节培养基水分活度，使酵母细胞积累海藻糖，提高其耐受力。因此短暂的暴露于一个非致死逆境条件下，可诱导微生物对更极端环境的耐受力，并为其他逆境提供交叉保护。

综上所述，热处理、过氧化氢处理提高膜醭毕赤酵母对逆境的耐受力，即提高真空干燥后膜醭毕赤酵母的活性，如此以更经济高效的方法制备酵母生防制剂，拓展生防保鲜剂的应用市场，从而使生防酵母的应用更为广泛，真正实现其应用价值，有益于环境和人体健康。而在酵母培养基中添加氯化钠、氯化钙等预处理方式在不添加任何保护剂时，处理后的膜醭毕赤酵母经真空干燥后活性较未处理的高，在添加保护剂时，添加不同浓度氯化钠处理和添加不同浓度氯化钙处理后的膜醭毕赤酵母干燥后活性与未添加氯化钠、氯化钙的活性基本没有显著性差异，说明添加氯化钠或氯化钙培养后的膜醭毕赤酵母在真空干燥过程中，保护剂对其活性的影响更大。