王世贵，谈国仓，许生琪

（1.青海省互助县农业综合执法大队，青海互助810500；2.青海省湟源县和平乡兽医站，青海 湟源812199；3.青海省互助县西山乡畜牧兽医站，青海互助810500）

0 引言

酯酶同工酶是一类具有催化体内酯键水解化学结构不同的酶类，往往受一个或几个等位基因控制，常做为较为稳定的遗传标记［1］。王民［2］蓝马鸡和藏马鸡血清淀粉酶和酯酶同工酶酶谱进行了分析，马建岗等［3］对家鸡血清酯酶同工酶进行了研究。王克华等［4］对部分乌骨鸡血浆酯酶（ES-1）多态性研究，以确定鸡的品种来源和亲缘关系。七彩山鸡、黑凤鸡和珍珠鸡是国家于2003年首批批准的54种可进行商业性经营利用和驯养繁殖的陆生野生动物。了解3种禽类生化遗传结构，有利于保护和利用其种质资源，并为人工饲养繁殖提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物

七彩山鸡和珍珠鸡来源于青海省湟源县和平乡诚信特种珍禽养殖场，黑凤鸡来源于康达养殖有限公司。

1.2 血液采集和制备

被检动物经保定后，以肝素钠抗凝真空管采集翅下静脉血样3～5 mL，立即送实验室，离心（2 500 r／min，分离10 min）后，分离血浆，备用。

1.3 样本制备

在反应板滴加0.1%溴酚蓝20 uL、40%蔗糖20 uL和0.1 mL血浆，充分混匀，其保存方法参照张淑君［5］。

1.4 方法

（1）同工酶酶谱：酯酶同工酶酶谱采用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳法，电泳操作参考文献［6］略作修改。

（2）酯酶显色方法：将α-醋酸萘脂先用少量丙酮溶解，在加入无水乙醇，之

后混入pH 6.4磷酸缓冲液与混合好的坚固兰B盐的混合溶液。将电泳完成的胶片置于染色盘中倒入染液置于37℃水浴箱中孵育至出现条带为止。

（3）判型方法：酯酶的判型方法参照卢黎［7］的方法进行。

2 结果

2.1 3种禽类酯酶同工酶酶谱

由电泳图谱（见图4）可见，在3种鸡的血浆酯酶同工酶中发现，ES-1和ES-3均发现有多态性。其中黑凤鸡的ES-1有3种类型即AB、BB和AC，而野鸡的ES-1却由3个变异体A、B、C构成4种表现型，即AB、BB、BC和 AC，最后珍珠鸡的ES-1只出现了AB、BB和 BC这3种表型；在3种鸡的ES-3中，黑凤鸡和珍珠鸡只出现了BB和AB 2种表型，而野鸡的ES-3却出现了3种类型即AB、BC和BB。ES-2在本次试验中始终呈单态。

图1 黑凤鸡酯酶同工酶酶谱

图2 七彩山鸡酯酶同工酶酶谱

图3 珍珠鸡酯酶同工酶酶谱

图4 3种鸡血浆酯酶电泳模式图

2.2 3种鸡的基因型和基因频率

表1 3种鸡的基因型和基因频率

2.3 3种鸡的基因杂合度、平均基因杂合度以及多态位点百分数

表2 3种鸡的基因杂合度、平均基因杂合度以及多态位点百分数

3 讨论

3.1 3种鸡血浆ES同工酶

酯酶的种类很多，在家鸡中已经发现了11种不同的多态性酯酶。程光潮等［8］对我国11个地方鸡种ES-1位点上共检测到AC、BC和CC 3种表现型，而王克华等［4］对部分乌骨鸡血浆酯酶多态性研究时，ES-1位点上共检测到AA、BB、AB、BC、AC 5种表现性。由实验结果可见，珍珠鸡、野鸡、黑凤鸡血清酯酶同工酶上ES-1均有不同的表现型而呈现多态性，其中以BB型纯合子的比例较高，且ES-1B为优势基因，这与张细权［9］等研究的结果一致，但与刘坤凡等［10］研究结果不一致，这可能与不同品种、判型方法有较大的关系，还有待于进一步探究。

3.2 平均基因杂合度和多态位点百分数

平均基因杂合度的大小直接反映了物种内遗传变异的范围，可以客观地反映出群体遗传变异的水平，平均基因杂合度与变异水平成正比。此次试验中珍珠鸡、野鸡、黑凤鸡3种鸡的平均基因杂合度分别是0.356 4、0.341 7、0.463 6，多态位点百分数为0.714 3，表明3种鸡的遗传多样性程度高，选择的潜力较大，具有开发利用的价值。