许 静，曹志全，周 歌，邵向群，彭 园，糜晓霞，钱海燕，陈林佳，陆红霞

（1.江苏省仪征市畜牧兽医站，江苏仪征211400；2.江苏省仪征市新集镇畜牧兽医站，江苏 仪征211403；3.江苏省仪征市青山镇畜牧兽医站，江苏 仪征211417）

0 引言

在国际动物卫生法典中，禽流感和高致病性禽流感同属A类病［1］。目前高致病性禽流感和新城疫在我国仍是危害养鸡业的主要传染病，加上市场流通日益活跃，给养鸡业带来了严峻的考验。为了减少防疫人员的工作量，提高工作效率，减少由于疫苗免疫带来的应激，选择合适的疫苗，采取合理的免疫程序以促使鸡群的这两种疾病的免疫抗体水平能够长时间的维持在较高的水平显得尤为重要。实际生产中常使用的新城疫Ⅰ系苗毒力较强，对雏鸡有一定的致病性，60日龄以上的鸡才可以使用，且该苗不能用于产蛋鸡，可引起产蛋量大幅下降。新城疫CS株疫苗，免疫效果与新城疫Ⅰ系苗相似，但不能用于初生雏鸡和产蛋鸡。新城疫Ⅳ系苗（Lasota株）毒力低，可在雏鸡、青年鸡、产蛋鸡上使用，但维持的时间较短［2］。新城疫油乳剂灭活苗可用于雏鸡预防新城疫，且不受母源抗体的干扰，能长时间的维持较高水平抗体，使产蛋鸡安全地度过整个产蛋期，抵抗新城疫强毒的侵袭［3］，但价格昂贵。针对上述情况为达两病的免疫效果，同时减少基层防疫人员的工作量，本实验将禽流感灭活苗和新城疫同时双针接种雏鸡，新城疫使用新城疫Ⅳ系苗首免，用新城疫油乳剂灭活苗二免，以了解新城疫油乳剂灭活疫苗和禽流感灭活疫苗同时免疫的效果。结果显示，试验中采取的免疫程序能使两种疾病的免疫抗体长时间的维持在较高的水平。

1 试验材料和方法

1.1 试验疫苗

重组禽流感H5亚型三价灭活苗（Re-6株+Re-7株+Re-8株）：郑州乾元浩股份有限公司生产，批号2016067；新城疫Ⅳ系苗（Lasota株）：广西丽源生产，批号20160424；新城疫油乳剂灭活苗扬州威克生产，批号1604039，疫苗按使用说明书的条件进行保存、运输和使用。

1.2 试验鸡的选择

随机选择仪征市新集镇农户饲养的4群相似日龄的雏鸡，分为 A、B、C、D组。

1.3 主要试验仪器和检测抗原

采血器、微量加样器，振荡器，96孔V型一次性反应板，禽流感抗原 H5亚型 RE-6株（2016008）、H5亚型 RE-7株（2016017）、H5亚型 RE-8株（2016006），哈尔滨维科生产，禽流感H5亚型RE-6株HI试验阳性血清（2016002），禽流感H5亚型RE-7株HI试验阳性血清（2016001），禽流感 H5亚型RE-8株HI试验阳性血清（2016005），哈尔滨维科生产，禽流感H5亚型阴性血清（2017001），哈尔滨维科生产，鸡新城疫血凝抑制抗原（20160401），青岛易邦生产，新城疫阳性血清（20160904），青岛易帮生产，新城疫阴性血清（20160701），青岛易帮生产。

1.4 免疫试验设计

A、B、C、D组的鸡分别于15日龄采集血样，用血凝（HA）／血凝抑制（HI）试验检测鸡的禽流感和新城疫母源抗体，结果为0～2log2。A、B、C组在36日龄左右进行禽流感和鸡新城疫Ⅳ系苗（Lasota株）双针免疫，剂量为禽流感灭活苗0.5L／羽肌肉注射，鸡新城Ⅳ系苗（Lasota株）2羽份／羽滴鼻；间隔3周后再进行禽流感和鸡新城疫油乳剂灭活苗双针免疫，剂量为禽流感灭活苗1L／羽肌肉注射，鸡新城疫油乳剂灭活苗1L／羽肌肉注射。D组仅使用禽流感和鸡新城疫油乳剂灭活苗免疫双针免疫1次，剂量为禽流感灭活苗0.5L／羽肌肉注射，鸡新城疫油乳剂灭活苗0.5L／羽肌肉注射。具体分组和免疫情况见表1。

（1）免疫接种试验。在首次接种后的1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月分别采集血液，用HA／HI试验检测其免疫抗体效价。每次采集的血样及时分离血清，保存在冰柜-20℃冷冻待检。

（2）免疫反应临床观察。在接种疫苗后注意观察鸡的临床状态，并做记录。

表1 试验鸡禽流感、新城疫双针免疫程序 只、d

表2 各组首免后不同时期的抗体合格率%

2 试验结果与分析

A、B、C组雏鸡在36日龄左右同时进行禽流感和鸡新城疫Ⅳ系苗首免，在首免3～4周后同时进行禽流感灭活苗和新城疫油乳剂灭活苗二免；D组雏鸡仅在51日龄同时进行一次禽流感灭活苗和新城疫油乳剂灭活苗免疫。首免后在30 d、60 d、90 d、120 d、180 d分别采集血液，检测禽流感和新城疫的血凝抑制价，各组首免后不同时期抗体合格率见表2。

2.1 血样禽流感血凝抑制价

免疫30 d时，A、B、C 3组血样的禽流感免疫保护率为100%，抗体滴度都在7log2以上，D组血样的禽流感免疫保护率为100%，抗体滴度在都7log2以上；免疫60 d，A、B、C3组血样的禽流感免疫保护率为100%，且70%的血样抗体滴度在10log2，D组血样的禽流感免疫保护率为100%，且30%的血样抗体滴度在10log2；免疫90 d时，A、B、C 3组血样的禽流感免疫保护率为100%，D组血样的禽流感免疫保护率为100%；免疫120 d时，A、B、C 3组血样的禽流感免疫保护率为100%，抗体滴度在6Log2以上，D组血样的禽流感免疫保护率为100%，D组血样的抗体滴度在4～6log2；免疫150 d时，A、B、C 3组血样的禽流感免疫保护率为100%，且抗体滴度仍然在6log2以上，D组血样的禽流感免疫保护率为40%，此时已缺乏足够的保护力；免疫180 d时，A、B、C 3组血样的禽流感免疫保护率为100%，且抗体滴度在4～6log2，D组血样的禽流感免疫保护率为小于40%。试验结果显示禽流感灭活苗免疫在仅免疫1次，剂量0.5 mL／羽时，能提供有效的免疫保护达4个月，需要在第5个月加强免疫，分析其原因，可能是由于油乳剂灭活疫苗的特性［4］，实际接种剂量0.5 mL／羽时，有效剂量达不到要求，所以实际防疫过程中建议剂量视情况略增至0.7～1 mL／羽，可提供至少6个月的有效免疫保护，达到预期效果。

2.2 血样新城疫血凝抑制价

免疫30 d时，A、B、C 3组血样的新城疫免疫保护率为0%、100%、20%，D组血样的新城疫免疫保护率为90%；免疫60 d，A、B、C 3组血样的新城疫免疫保护率为100%，且血样抗体滴度均为在10log2，D组血样的新城疫免疫保护率为100%，且血样抗体滴度在6log2以上；免疫90 d时，A、B、C 3组血样的新城疫免疫保护率为100%，D组血样的新城疫免疫保护率为100%；免疫120 d时，A、B、C 3组血样的新城疫免疫保护率为100%，抗体滴度仍然在7log2以上，D组血样的新城疫免疫保护率为100%，D组血样的抗体滴度在4～6log2；免疫150 d时，A、B、C 3组血样的新城疫免疫保护率为100%，且抗体滴度仍然在7log2以上，D组血样的新城疫免疫保护率为80%；免疫180 d时，A、B、C 3组血样的新城疫免疫保护率为100%，且抗体滴度在6log2以上，D组血样的新城疫免疫保护率为60%。试验结果显示新城疫的免疫在仅适用新城疫灭活苗免疫1次，剂量为0.5 mL／羽，可提供有效的免疫保护达5个月；在使用新城疫Ⅳ系苗（Lasota株）首免，剂量2羽份／羽，使用新城疫油乳剂灭活苗二免，剂量为1 mL／羽，可提供有效的免疫保护至少达6个月。

3 结论

根据以上试验结果，在秋季散养户集中防疫时对雏鸡实施禽流感免疫时，选择首免剂量为0.5 mL／羽，同时进行新城疫Ⅳ系苗（Lasota株）首免，剂量为2羽份／羽，3～4周后进行禽流感二免，剂量为1 mL／羽；同时使用新城疫油乳剂灭活苗二免，剂量为1 mL／羽。成年鸡实施禽流感免疫首免剂量为1ML／羽，同时进行新城疫油乳剂灭活苗免疫0.7 mL／羽。在免疫21 d后，进行免疫抗体监测，结果均能达到符合农业部要求的禽群抗体合格率。对于商品蛋鸡实施14日龄首次免疫禽流感灭活苗加新城疫油乳剂灭活苗0.5 mL／羽，间隔3～4周后再用禽流感灭活苗加新城疫油乳剂灭活苗进行二免，剂量1 mL／羽，110日龄用禽流感灭活苗加新城疫油乳剂灭活苗进行加强免，剂量1 mL／羽，可为产蛋期提供有效的抗体保护。

通过这样的免疫程序，既能减少防疫员对面广量大散养家禽的防疫工作量，又可达到禽流感和新城疫的免疫效果，还能减少因免疫接种带来的禽群的应激反应等问题，提高了养殖者的经济效益，达到了事半功倍的效果。