周贵凤，李荣丽，张仕民，王 秀，季生奇

（四川民族学院农学院，四川 康定626001）

0 引言

动物铸型标本是研究人或动物器官腔隙和管道形态结构的一种重要方法，具有三维立体感强、真实逼真，可长期保存等特点。甘孜州地处高原地区，空气稀薄，藏区动物要适应高原缺氧环境，其肺气管-支气管的微细结构是否与非高原地区动物的结构具有差异性是研究热点，铸型标本是研究气管支树结构的重要手段之一，目前国内外还未见有甘孜州牦牛肺气管-支气管树铸型标本制作的报道。本团队用不同填充材料研究了牦牛肺气管-支气管铸型标本的制作方法。

1 试验材料

1.1 主要药品

自凝牙托粉与自凝牙托水（上海二医张江生物材料有限公司）、邻苯二甲酸二丁酯（DBP）与过氯乙烯（山东西亚化学股份有限公司）、丙酮（四川西陇化工有限公司）、氢氧化钠（天津市大茂化学试剂厂）、油画颜料（天津柯雅美术材料有限公司）、家家亲牌AB胶（成都威思达胶粘剂有限公司）、乒乓球（主要成分赛璐珞）及盐酸等。

1.2 主要器材

手术刀、止血钳、组织剪、橡胶管、结扎线、电子天平、标本处理缸、玻璃棒、注射器、烧杯等。

1.3 肺脏来源

牦牛肺从甘孜州康定市姑咱镇牦牛屠宰场购买所得。

2 制作方法

2.1 使用赛璐珞作为填充剂

2.1.1 填充剂的配置

取3个干净容器，用天平称取100 g、111 g、125 g剪碎的乒乓球（即赛璐珞），分别加入到1 000 mL丙酮中，搅拌至溶解，根据需要加入适量的油画颜料，搅拌均匀，分别配制成1∶10、1∶9、1∶8的填充剂。由于丙酮挥发性极强，应现配现用。

2.1.2 灌注方法

灌注前处理：先将购买回来的新鲜牦牛肺脏周围的筋膜、组织剪掉，充分暴露气管、支气管，再在气管上自制插管，并连接注射器，将肺内空气尽量全部抽出，并及时夹住橡胶插管，防止空气进入［1］。

灌注：采用梯度灌注法由 1∶10、1∶9、1∶8的梯度进行灌注，在灌注时可以一边注入填充剂一遍对肺进行按压，由气管向支气管方向进行挤压，能使填充剂进入更小的管道，填充彻底。当感觉填充困难时，可轻轻提起肺组织，使其中的空气排出。若排出空气后依然无法注入，表明管道已经被填满，不可强行灌入，否则将引起细支气管等结构破裂。填满后应当立即密封气管远心端，每隔3～4 h再进行补注，每个梯度一般可进行2～3次补注。整个灌注过程均需在水中进行。

2.1.3 腐蚀与后期处理

腐蚀：标本灌注完成后，将其置于水中3～7 d，然后在40%盐酸中腐蚀（也可使用40%氢氧化钠溶液进行腐蚀）。腐蚀完成后将标本取出用流水轻轻冲去粘附在上面的组织，并放置在3%NaOH溶液中浸泡10 min，中和盐酸。用清水冲洗后，在水中浸泡1 d，洗出碱液。

后期整形：若在腐蚀、冲洗过程中，不小心有断枝脱落，则使用胶水将其粘好。对于结块的铸型剂则用剪刀将其剪去，并整形。完成后，置于装有2%～4%甲醛的标本瓶中保存。

2.2 使用自凝牙托材料作为填充剂

2.2.1 填充剂的配置

取自凝牙托水50 mL，20%的过氯乙烯20～30 mL，邻苯二甲酸二丁酯20 mL，适量油画颜料四者搅匀后，将25～40 g自凝牙托粉加入到其中进行搅拌，立即灌注［2］。

2.2.2 灌注方法

灌注方法与上述赛璐珞的灌注方法相似，只是自凝牙托材料作为填充剂可一次成型，不需要补注。

2.2.3 腐蚀与后期处理

标本灌注完成后，将其放置在水中一周，使其反应完全，而后置于20%盐酸中进行腐蚀。此时需要一边腐蚀一边冲洗，直至腐蚀完全。后期处理与赛璐珞灌注的标本大致相同。

3 试验结果及结果分析

3.1 赛璐珞作为填充剂灌注牦牛肺气管—支气管铸型标本结果与分析

使用赛璐珞作为填充剂灌注牦牛肺气管—支气管时效果并不理想，标本韧性差，极易折断。在补注完成后将标本置于水中等待丙酮挥发，但在丙酮挥发之后气管发生了塌陷，而此时铸型剂已凝固，无法进行后期补注。将其置于腐蚀槽中腐蚀后发现，稍粗大的管道铸型均不饱满，气管铸型甚至呈片状，管道越小越饱满，在一些呼吸性细支气管处才出现少量的饱满管道铸型。而本团队使用该材料制作羊肺脏气管-支气管铸型标本的过程中未出现管道铸型塌陷和管道铸型断开的情况，仅在铸型上发现少量的气泡。此情况可能是由于赛璐珞丙酮材料的收缩率太大、牦牛肺管道粗大以及灌注时赛璐珞浓度不够高造成。由此说明赛璐珞的灌注效果可因动物肺气管-支气管管径的大小不同而有所差异。

本研究发现，当赛璐珞与丙酮的比例大于1∶8时，灌注将变得极为困难。此外，在制作铸型标本前可对牦牛肺进行固定，方法为将4%的甲醛溶液注射入气管至肺表面出现白点，置于水中7 d［3］。经过这样处理的支气管在使用赛璐珞灌注时效果较未处理的更能到达细小分枝。苗兰英等［4］发现用2%甲醛液固定肺脏24 h（夏天为16 h），能使标本更加坚韧，不易变形。本试验因研究对象不同，用2%甲醛液固定牦牛肺未能得到较理想的实际效果，故牦牛肺标本的固定及灌注方法仍需不断探索。

3.2 自凝牙托材料作为填充剂灌注牦牛肺气管—支气管铸型标本结果与分析

与赛璐珞灌注相比，使用自凝牙托材料灌注标本易操作，填充效果较好，制备的标本柔软而坚韧。这是由于自凝牙托材料收缩率小、灌注成型后铸型上无孔洞、能进入更细小的分支。当加入过氯乙烯作为柔软剂之后，可使自凝牙托粉与自凝牙托水的聚合反应减缓，为灌注争取了时间，防止灌注到后面液体黏稠导致灌注困难；加入邻苯二甲酸二丁酯为增韧剂［5］，可增加标本的柔韧性，但添加量过大时，会使得标本过于柔软，无法支撑标本铸型［6］。配置时灌注材料时，一定要注意各材料的添加顺序，一般应最后加入牙托粉［3］，防止反应过快而缩短操作时间。

此外，本团队在使用自凝牙托材料制作铸型的过程中，采用了自然腐蚀法与20%盐酸相结合腐蚀法，不仅可使标本腐蚀彻底，而且还能节约盐酸等用量。

4 结论

本文研究了甘孜州牦牛肺气管—支气管树铸型标本的制作方法，并对比了赛璐珞和自凝牙托等材料作为填充剂对标本的影响，结果发现，使用赛璐珞制作的标本韧性差，极易折断；而用自凝牙托材料、邻苯二甲酸二丁酯、过氯乙烯等制作的标本柔软而坚韧，易操作，效果好。

图1 牦牛肺气管-支气管铸型标本（自凝牙托材料作为填充剂）

与其他标本相比，牦牛肺较大，弹性好，填充后重量大，所用耗材多、易变性；腐蚀过程中，其自身重量可能会影响铸型的正常形态，故还需继续探索节约耗材及克服其自身重量，防止铸型标本塌陷等方法。