李 岩 姚红月 田 园 朱玉峰

(锦州医科大学附属第一医院普外科微创病区，辽宁 锦州 121000)

胆管癌组织中NF-κB和Survivin表达及其与巨噬细胞浸润的关系

李 岩 姚红月 田 园 朱玉峰1

(锦州医科大学附属第一医院普外科微创病区，辽宁 锦州 121000)

目的检测胆管癌术后组织中核因子(NF)-κB、生存素(Survivin)的表达，分析其临床意义及其与巨噬细胞浸润的关系。方法52例胆管癌术后蜡块组织为观察组，17例非肿瘤性胆管组织为对照组。应用免疫组化SP法检测两组NF-κB、Survivin和CD68的表达。结果观察组NF-κB和Survivin表达阳性率明显高于对照组，间质中CD68表达阳性率明显高于对照组。观察组NF-κB、Survivin和CD68阳性率与肿瘤最大径密切相关，NF-κB、Survivin阳性率与肿瘤转移和脉管累犯密切相关，间质中CD68表达与肿瘤间质炎性反应程度密切相关。线性相关性分析显示观察组NF-κB和CD68表达呈正相关，其他指标间无明显相关性。结论胆管癌肿瘤细胞中NF-κB和Survivin高表达，间质中CD68高表达，对肿瘤形成和进展有一定作用，NF-κB表达与间质巨噬细胞浸润有关。

胆管癌；核因子(NF)-κB；生存素(Survivin)；巨噬细胞

胆管癌是由胆管上皮细胞发生的恶性肿瘤，好发于中老年人〔1〕。研究显示病变发展间质中可见巨噬细胞，其可能与肿瘤相关蛋白异常表达相关〔2〕。核因子 (NF)-κB是从成熟B淋巴细胞核的提取物中发现的，可以参与多种肿瘤发生相关基因的调控〔3〕。生存素(Survivin)是目前发现的作用最强的凋亡抑制因子，具有抑制凋亡和调节细胞增殖等多种生物学作用〔4〕。CD68是标记巨噬细胞的特异性蛋白〔5〕。本研究检测胆管癌中NF-κB、Survivin表达，探讨二者表达及与CD68标记的巨噬细胞的关系。

1 资料与方法

1.1临床资料 2012年2月至2016年9月锦州医科大学附属第一医院诊断胆管癌并行手术治疗的患者52例为观察组，其中男28例，女24例，年龄42～71(平均58.3)岁。纳入均符合世界卫生组织中关于胆管癌的诊断标准，同时经病理科医师阅片确诊。17例非肿瘤性胆管组织为对照组，其中男9例，女8例，年龄45～70(平均56.7)岁。两组常规资料无明显差异，具有可比性。

1.2NF-κB、Survivin和CD68检测 NF-κB、Survivin和CD68蛋白的检测应用免疫组化SP法，二氨基联苯胺(DAB)显色，3种蛋白的阳性部位为细胞质，以细胞质中出现棕黄色颗粒为阳性反应细胞，严格按说明书操作，做好质控工作。

1.3NF-κB、Survivin和CD68的判定方法 NF-κB、Survivin阳性细胞是肿瘤细胞，CD68阳性细胞是肿瘤间质的巨噬细胞。在低倍镜下(100倍)选择阳性细胞分布较为集中的区域进行观察，然后选择3个高倍视野(400倍)进行计数，计算阳性率，取平均值。3种蛋白均以阳性率≥5%为阳性，以阳性率<5%为阴性。

1.4统计学方法 应用SPSS17.0统计软件进行χ2检验和线性相关分析。

2 结 果

2.1两组NF-κB、Survivin和CD68表达阳性率的比较 观察组NF-κB和Survivin阳性率明显高于对照组，观察组间质中CD68表达阳性率明显高于对照组(P<0.01)。见表1。

表1 两组NF-κB、Survivin和CD68表达阳性率的比较〔n(%)〕

2.2观察组NF-κB、Survivin和CD68表达与临床病理特征的关系 NF-κB、Survivin和CD68的阳性率与肿瘤的最大径密切相关，NF-κB、Survivin的阳性率与肿瘤的转移和脉管累犯密切相关，间质中CD68表达与肿瘤间质的炎性反应程度密切相关。见表2。

2.3观察组NF-κB、Survivin和CD68相关性 NF-κB和CD68表达呈正相关(r=0.51，P=0.037 6)，其他指标间均未见明显相关性。

表2 观察组NF-κB、Survivin和CD68表达与临床病理特征的关系〔n(%)〕

3 讨 论

胆管癌病变呈管状或乳头状结构，间质有不同程度的纤维性间质，病变可以直接侵犯周围组织，转移也较多见。血管侵犯是常见的组织学发现，提示早期转移，血行转移发生较晚，以肺转移多见〔6〕。巨噬细胞在肿瘤周围有浸润现象。巨噬细胞是体内重要的免疫细胞，作为T淋巴细胞辅助细胞，通过抗原递呈发挥特异性的免疫功能〔7〕。肿瘤浸润的巨噬细胞主要来源于外周血单核细胞，主要是肿瘤的基质区，只有少数在肿瘤细胞的内部，其浸润的数量与单核细胞浸润到肿瘤部位的数量有关，其次巨噬细胞增殖也是影响其数量的因素〔8〕。巨噬细胞的浸润对肿瘤的生长有双重作用〔9〕。Survivin基因定位于染色体17q25，全长14.7 kb，由3个内含子和4个外显子组成，其编码142个氨基酸。Survivin在正常组织中的表达极低或不表达，在胚胎组织和多数肿瘤组织中的表达较高，其作用为凋亡抑制〔10〕。Survivin表达具有周期依赖性，只在细胞周期的G2/M表达，能引起胚胎发育畸形。研究显示Survivin表达增高时可以使恶性转化的细胞克服凋亡的调控点，使其处在有丝分裂的状态中，形成失控性增生和分裂状态〔11,12〕。NF-κB是在成熟B细胞中存在的一种核蛋白因子，可以与免疫球蛋白κ轻链的κB序列特异性结合，存在于各种生物体内的各种类型的细胞内，是重要的转录调控因子，NF-κB对维持机体免疫稳定及预防炎症性疾病有重要作用〔13,14〕。

本研究提示NF-κB和Survivin作为癌基因样的作用发挥促进肿瘤生长的功能。胆管癌中巨噬细胞数量是促进肿瘤进展的因素，巨噬细胞的数量伴随着炎性反应的程度。虽然巨噬细胞有清除肿瘤细胞和肿瘤相关介质的能力，但是其作用较弱，而在肿瘤发生之前巨噬细胞就已经明显存在功能抑制，其内在因素有：抗原递呈能力减弱、吞噬能力消失、吞噬溶酶体融合不良、氧化代谢缺陷、类抗原表达的差异等〔15〕。本研究提示NF-κB、Survivin的表达升高可以促进肿瘤的生长。NF-κB、Survivin二者对胆管癌转移有一定的促进作用。NF-κB对肿瘤周围的巨噬细胞反应有明显的促进作用。也有学者把这种巨噬细胞称为免疫抑制性巨噬细胞，其作用包括抑制细胞毒T淋巴细胞的产生、淋巴因子的产生、自然杀伤细胞的激活等，巨噬细胞可以增强Th辅助作用及Tc介导的细胞毒作用，这些作用可以直接促进肿瘤的生长〔16〕。

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〔2016-11-17修回〕

(编辑 苑云杰)

R73

A

1005-9202(2017)18-4570-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2017.18.063

1 锦州医科大学附属第一医院普外科微创肝胆病区

朱玉峰(1985-)，男，博士，主治医师，主要从事普外科微创研究。

李 岩(1980-)，女，讲师，主要从事普外科微创研究。