郑正荣 胡清福 赵清泉 曾晓珊

(福建医科大学附属第二医院肿瘤外科，福建 泉州 362000)

NOB1基因在老年结直肠癌患者的表达及临床价值

郑正荣 胡清福 赵清泉 曾晓珊

(福建医科大学附属第二医院肿瘤外科，福建 泉州 362000)

目的探讨NOB1基因在老年结直肠癌(CRC)患者中的表达及临床价值。方法选择老年CRC患者60例，均行手术治疗，取CRC病灶组织及癌旁正常组织，采用免疫组织化学SP法检测两种组织中NOB1基因情况，分析NOB1基因在老年CRC患者中的表达及临床价值。结果老年CRC组织中NOB1弥漫在细胞质中，且清晰可见阳性细胞，呈淡黄色；而癌旁组织中，NOB1多位于细胞核中。老年CRC患者NOB1阳性表达显著高于正常组织(P<0.05)。老年CRC组织中NOB1表达与年龄、性别、组织分化程度、浸润深度不相关(P>0.05)；与组织类型和淋巴结转移关系密切(P<0.05)。结论老年CRC患者中NOB1基因水平表达提高，可能参与肿瘤的发生、发展，有望成为结直肠癌新的靶点。

NOB1基因；结直肠癌

目前临床上对于结直肠癌(CRC)发病机制尚不完全知晓，其发生、发展是一个多步骤、多机制、多基因参与的过程，且细胞的凋亡功能异常与病灶的进程、耐药等紧密联系〔1〕。NOB1是一种同源性基因，在核糖体小亚基核26S蛋白酶体的生物合成中发挥重要作用，且在肿瘤的转移、发生及发展中发挥重要作用，但该结论尚未得到进一步证实〔2〕。本文旨在探讨NOB1基因在老年CRC患者中的表达及临床价值。

1 资料与方法

1.1临床资料 选取2014年1月至2016年6月医院收治老年CRC患者60例，男34例，女26例，年龄60～88〔平均(76.5±2.1)〕岁。其中23例高分化，21例中分化，16例低分化。纳入标准：①符合老年CRC临床诊断标准；②均经过手术病理检查最终确诊；③入组前患者均未接受放疗、化疗或免疫治疗。排除标准：①合并有影响效应指标观测、判断其他生理或病理者；②长期服用精神镇痛药者；③合并高血压、重度心肺功能不全等重大疾病者。

1.2方法 采用免疫组织化学链霉菌素抗生物素蛋白-过氧化物酶连接(SP)法检测两种组织中NOB1基因情况。①仪器与试剂：NOB1多克隆抗体(美国Proteintech Group公司生产提供)；SP免疫组化染色试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司)。②实验方法：围术期取入选患者CRC病灶组织及距离病灶部位>3.0 cm癌旁正常组织，采用浓度为10.0%甲醛进行固定，石蜡包膜，制备厚度为4 μm切片，并将其放入pH为6.0的枸缘酸盐缓冲液中进行抗原修复，相关操作必须严格遵循仪器、试剂盒操作说明进行，采用已经阳性片作为对照，采用磷酸盐缓冲液(PBS)作为阴性对照〔3〕。③判断标准：采用双盲法染色对测定结果进行评估。SP免疫组化染色阳性：细胞质或细胞核为淡黄色或棕黄色。取制备的切片，5个高倍视野下(每个视野至少含有1 000个细胞)，根据阳性细胞所占比进行评定。染色强度：0分无着色；1分着色为淡黄色；2分为棕黄色；3分为棕褐色或深度棕黄色。阳性细胞百分比：阳性细胞占总细胞的25%以下为1分；26%～50%为2分；51%～75%为3分；76%～100%为4分。对于二者评分乘积在0～2分为阴性，3～5分为弱阳性；6～7分为强阳性〔4〕。

1.3统计学方法 应用SPSS18.0软件行t、χ2检验。

2 结 果

2.1NOB1基因在老年CRC与癌旁组织中的表达 老年CRC组织中NOB1弥漫在细胞质中，且清晰可见阳性细胞，呈淡黄色；而癌旁组织中，NOB1多位于细胞核中。老年CRC患者中，32例(53.3%)NOB1阳性表达，显著高于癌症正常组织〔10例(16.7%),χ2=6.391,P<0.05〕。见图1。

2.2老年CRC患者NOB1表达与临床病理特征分析 见表1，表2。单因素结果显示：老年CRC组织中NOB1表达与年龄、性别、组织分化程度、浸润深度差异无统计学意义(P>0.05)；多因素结果显示：老年CRC组织中NOB1表达与组织类型和淋巴结转移关系密切(P<0.05)。

图1 NOB1基因在老年CRC与癌旁组织中的表达(×100)

临床病理特征nNOB1阳性表达χ2值P值总频率 癌旁组织6010(16.7)6.391<0.05 病灶组织6032(53.3)年龄(岁) ≥603618(50.0)1.024>0.05 <602414(58.3)性别 男2616(61.5)0.931>0.05 女3414(41.2)分化程度 高分化2314(60.9)1.931>0.05 中分化219(42.9) 低分化167(43.8)浸润深度 未浸润124(33.3)0.993>0.05 浸润4828(58.3)淋巴结转移 有2214(63.6)0.492>0.05 无3818(47.4)

表2 老年CRC组织中NOB1表达与临床病理特征多因素分析

3 讨 论

CRC发生率呈上升及年轻化趋势，并且对于伴有CRC家族患者发生率更高。同时，CRC复发率较高，发病后约50%患者复发时转移到肝脏，错过了最佳治疗时机〔5〕。

NOB1是近年来研究较多的基因类型，该基因最早于2005年测得，是酵母基因Noblp的人类同源基因。NOB1主要包括9个外显子和8个内含子，主要定位在人体16q22.1，主要在人体肝、肺、脾等组织中表达。同时，NOB1是一个多功能的核蛋白，其表达水平与核糖体小亚基和蛋白酶体生物合成等关系密切〔6〕。文献报道〔7〕，NOB1基因在老年CRC患者发生、发展中起重要作用，能引起癌蛋白聚集，抑癌蛋白异常降解，从而增加细胞凋亡受阻和增殖速度，诱发肿瘤的发生。相关学者利用RNA干扰技术将NOB1-siRNA转染到卵巢癌细胞株中，结果显示NOB1能抑制细胞的生长活性，提高细胞增殖能力，提示：NOB1可能参与卵巢癌的发生、发展〔8〕。由此看出NOB1的异常表达将引起核糖体和蛋白酶体难以正常合成，造成机体内泛素-蛋白酶体途径(UPP)异常，导致细胞凋亡发生异常，并且在CRC的发生、化疗耐药机制中均发挥重要作用。

本研究结果提示，NOB1基因表达的提高能促进肿瘤的进一步发生，是CRC患病过程中的一个新的调控因子，并且该基因与患者的性别、年龄、肿瘤组织分化程度等生物行为无明显关系，但与淋巴结转移有关，可能成为CRC治疗的潜在靶点，针对NOB1异常表达的靶向治疗能有效抑制肿瘤的生长、增殖，降低化疗药物耐药性，但是该结论尚需要进一步研究和探讨。

1Bouassida M，Chtourou M，Hamzaoui L，etal.Clinico-pathological caracteristics，therapeutic features and post-operative course of colorectal cancer in elderly patients〔J〕.J Clin Diagn Res，2014；8(1)：77-9.

2武 月，殷红专，闫兆鹏，等.NOB1 在结直肠癌中的表达及其临床意义〔J〕.现代肿瘤医学，2013；21(9)：2044-7.

3王 欢，马法库，刘 斌，等.结直肠癌组织中DCLK1+/Ki67-肿瘤干细胞样细胞的形态和分布〔J〕.中国组织工程研究，2015；19(10)：1575-9.

4马小杰，韩振国.结直肠癌组织中Nob1基因的表达及临床意义〔J〕.中国医药指南，2015；35(10)：160-1.

5Lin Y，Peng S，Yu H，etal.RNAi-mediated downregulation of NOB1 suppresses the growth and colony-formation ability of human ovarian cancer cells〔J〕.Med Oncol，2012；29(1)：311-7.

6Ye Q，Feng B，Peng YF，etal.Expression of gammas-ynuclein in colorectal cancer tissues and its role on colorectal cancer cell line HCT116〔J〕.World J Gastroenterol，2009；15(40)：5035-43.

7李贵新，刘 锦，李肖燕，等.结肠癌患者术后化疗联合自体级联诱发免疫细胞治疗近期疗效和生活质量观察〔J〕.中华肿瘤防治杂志，2014；21(19)：1548-52.

8钟俊新，段雪飞，李 晶，等.胃癌中NOB1 基因的表达及意义〔J〕.广东医学，2014；35(6)：870-2.

〔2017-03-25修回〕

(编辑 袁左鸣/滕欣航)

R735.3

A

1005-9202(2017)18-4564-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2017.18.060

泉州市科技项目资助项目(No.2012Z49)

郑正荣(1978-)，男，博士，副主任医师，主要从事肿瘤疾病诊断与治疗研究。