张 睿，毕鑫星，2，叶阿里，孔令君，窦亚玲

1中国医学科学院 北京协和医学院 北京协和医院检验科，北京 1007302北京市通州区新华医院检验科，北京 101100

人乳头瘤病毒在临床患者中的感染现状及主要型别分析

张 睿1，毕鑫星1，2，叶阿里1，孔令君1，窦亚玲1

1中国医学科学院 北京协和医学院 北京协和医院检验科，北京 1007302北京市通州区新华医院检验科，北京 101100

目的 探讨人乳头瘤病毒(HPV)不同基因型别的感染和现状，以期对HPV感染和病变的防治及相关疫苗研制提供参考。方法 收集2013年1月1日至2015年6月30日就诊于北京协和医院的6917份样本，采用高危型HPV分型(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59和68型)和低危型HPV(6+11)型多重PCR核酸测定试剂盒，剔除重复检测样本1331份(588人次)，分析5586份样本中HPV总检出率和各亚型、不同年龄段的检出状况，对复检病例单独进行分析。结果 HPV总检出率为36.29%(2027/5586)，其中高危型检出率是24.92%(1392/5586)、低危型检出率是1.66%(93/5586)、混合型检出率是9.70%(542/5586)和HPV高危型混合检出率是7.75%(433/5586)；女性和男性在HPV高危型检出率分别为25.52%(1366/5353)和11.16%(26/233)(χ2=24.61，P<0.001)，混合型检出率分别为9.99%(535/5353)和3.00%(7/233)(χ2=12.45，P<0.001)。男性HPV低危型检出率3.86%(9/233)明显高于女性的1.57%(84/5353)(χ2=5.84，P=0.007)。HPV高危型感染年龄分布主要在31～50岁，低危型感染主要分布在21～40岁；混合感染以31～40岁居多。HPV52、HPV58型感染阴转率最低。HPV各亚型中检出率最高的前3位为HPV52、HPV16和HPV58型。结论 HPV高危和低危型在男女性别之间的检出率明显不同，男性以低危型为主，女性以高危和高、低危混合感染为主。检出率最高为HPV52型，其次为HPV16和HPV58型；再次阴性检出率最低的为HPV52和HPV58型；HPV感染主要集中在青壮年。

人乳头瘤病毒；基因型；宫颈癌；疫苗

人乳头瘤病毒(human papilloma virus，HPV)是一种在自然界中广泛存在的嗜上皮性DNA病毒，人是它的唯一宿主。HPV是宫颈癌的致病病毒，也使得宫颈癌成为目前人类所有癌症中唯一病因明确的癌种[1]。依据HPV与宫颈癌及其癌前病变的相关性高低，又分为高危型和低危型。高危型HPV的持续性感染是宫颈癌及其癌前病变(宫颈上皮内瘤变)发生的元凶。目前根据HPV的序列差异已鉴定出200多种亚型，其中40多种与包括子宫颈在内的生殖系统疾病有关[2- 3]。HPV分型检测有助于指导已有HPV感染的预防性疫苗的应用，指导新的疫苗的研发和使用。本研究分析2013年1月至2015年6月送检于本院检验科的6917份样本的HPV分型情况，以期对HPV感染和病变的防治及国内HPV疫苗研制提供参考。

对象和方法

对象 选取2013年1月1日至2015年6月30日就诊于本院皮肤性病科、妇产科、泌尿外科、男科门诊等多个临床科室的患者，共计6917份样本，其中1331例患者在本院进行2次以上重复检测。本研究定义：检出HPV两种及以上型别的称为HPV混合型检出；检出HPV高危型两种及以上型别的称为HPV高危型混合检出；持续性感染为HPV同一型别连续两次检测均为阳性且时间跨度≥6个月。排除重复检测样本标准：以第一次检测结果为准，再次送检结果与第一次不同按再次感染计算，纳入统计中。如第一次结果为阳性，之后检测为阴性，按第一次计算。如第三、四次结果与之前任何一次相同，也剔除；如为阴性剔除检出率统计，计入好转中；如检测几次均为阴性，只记1次阴性。所有检测结果按以上标准剔除后，男性233例，年龄19～83岁；女性5353例，年龄8～84岁。

样本采集

宫颈拭子：用专用细胞刷取器沿宫颈口移行带附近旋转刷取1～2周，将刷取的宫颈脱落细胞置于细胞保存液(上海之江生物科技股份有限公司)中，置于4℃冰箱待检。

尿道拭子(只针对男性患者)：用专用的尿道拭子于尿道口内旋转1～2周，将拭子置于无菌容器中，加入1 ml生理盐水，置于4℃冰箱待检。

方法 严格按试剂盒说明书进行DNA的提取，循环扩增及实验结果的判定。应用高危型HPV分型(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59和68)和6、11型核酸测定试剂盒(上海之江生物科技股份有限公司)对样本中的HPV DNA进行测定，采用SLAN- 96P荧光定量PCR仪(上海宏石医疗科技有限公司)和SLAN全自动医用PCR分析系统8.3.1 进行数据分析。

统计学处理 采用Excel 2007及SPSS 17.0统计软件分析，计数资料采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

结 果

HPV总的检出情况 共送检样本6917份，其中重复送检且结果相同的有1331份，去除重复检测样本后共计5586份，HPV总检出率为36.29%(2027/5586)、HPV高危型检出率24.92%(1392/5586)、低危型检出率1.66%(93/5586)、混合型检出率9.70%(542/5586)和HPV高危型混合检出率7.75%(433/5586)；在HPV总阳性样本中所占比例最多的是HPV高危型，占68.67%(1392/2027)，其次是混合型，占26.74%(542/2027)，最少的是低危型，占4.59%(93/2027)。

HPV在不同性别之间检出情况 5586份样本中，男性样本233份、女性样本5353份；HPV总检出率、高危型检出率、低危型检出率、混合型检出率和高危型混合检出率：男性样本为18.03%、11.16%、3.86%、3.00%和0.86%，女性样本为37.08%、25.52%、1.57%、9.99%和8.05%。HPV女性总检出率(χ2=35.07，P<0.001)、高危型检出率(χ2=24.61，P<0.001)、混合型检出率(χ2=12.45，P<0.001)和高危型混合检出率(χ2=16.16，P<0.001)均显著高于男性。男性HPV低危型检出率明显高于女性(χ2=5.84，P=0.007)。

各亚型分布 5586份样本中，HPV各亚型中检出频次最高的前3位依次为HPV52、HPV16、HPV58型；男性感染频次最高的为HPV(6+11)型，女性感染频次最高为HPV52型(表1)。

各亚型的年龄分布 患者年龄在8～84岁，男性中位数年龄为33岁，女性中位数年龄为39岁；在31～40岁和41～50岁送检样本最多；HPV高危型感染主要分布在31～50岁，HPV低危型感染主要分布在21～40岁，HPV混合感染在31～40岁，混合感染最多合并7种HPV型别(表2)。

重复送检样本情况 6917份送检样本中，重复送检样本1331例，持续检测阳性率(两次检测结果时间间隔≥6个月)最高的HPV型别即再次阴性检出率最低的前3位是：HPV58型(21.88%)、52型(35.90%)和31型(38.10%)；再次阴性检出率前3位是HPV45型(83.788%)、51型(75.00%)和 59型(68.75%)(表3)。

表 1 5586份样本中各亚型的构成分布Table 1 The proportions of HPV subtypes among 5586 samples

HPV：人乳头瘤病毒

HPV：human papilloma virus

表 2 不同年龄各亚型的阳性样本数(n)Table 2 Positive samples in patients in different age groups(n)

表 3 不同HPV亚型样本持续检出阳性及再次阴性检出情况Table 3 The rates of persistent positivity and secondary negativity for different HPV subtypes

讨 论

HPV是一种可以通过性行为传播的病毒，感染此种病毒通常没有症状。zur Hausen[4]发现HPV是导致宫颈癌的必要条件并因此获得2008年诺贝尔生理/医学奖。生殖道高危型HPV感染与宫颈癌及宫颈上皮内瘤变的发生相关，尤其是HPV16、HPV18型[5]。欧美国家以感染HPV16和HPV18型为主，其疫苗也是主要针对HPV16和HPV18型。本研究显示HPV在本院总检出率占36.29%，高危型检出为24.92%，混合型检出中以高危混合型(7.75%)检出为主，表明在北京协和医院就诊的患者有超出1/3感染HPV，感染比例较大，多重感染以感染两种及以上高危型HPV较为常见，高危型HPV型别之间是否存在协同感染，其机制有待于进一步研究。HPV高危型、混合型和高危型混合在女性中检出率明显高于男性，而HPV低危型在男性中的检出率明显高于女性，女性检出HPV型别以高危型(25.52%)和混合型(9.99%)为主，所占比例超过1/3；在男性，HPV检出型别则以高危型(11.16%)和低危型(3.86%)为主，比例也超过了15%，表明HPV感染的型别存在性别差异，整体以高危型为主，男性以感染单一型别为主，而女性以高危和高、低危混合感染为主。HPV检出率最高的前3位分别为HPV52、HPV16和HPV58型，其中HPV58、HPV52和HPV31型再次阴性检出率最低，表明在这些患者中，HPV52、HPV16和HPV58型为易感型别，可能与HPV58和HPV52型不易被机体清除有关；另一方面也表明中国人群的感染状况有别于西方，不同地区人群HPV的感染率不同，所携带的型别亦不同[6- 7]。本研究显示送检样本中HPV低危型、高危型及混合感染高峰均在30～50岁，主要是青壮年，女性HPV检出率(37.08%)远高于男性(18.03%)，建议加强年轻女性HPV的定期检查，对于预防宫颈癌具有一定意义。HPV混合型感染也是宫颈癌的高危因素[8]，本研究占到9.70%，国外研究[8]也支持这一观点。本研究男性感染低危HPV(6+11)型明显高于女性，但感染高危型所占的比例已达到61.90%(26/42)，所以男性检测HPV也应引起高度重视。因男性尿道取材具有一定创伤性，使得男性留取HPV标本时依从性较差，导致男性检测HPV的标本量远少于女性，若能改良取材方法，可提高样本检出率。男性作为HPV可能的传播媒介[9]在妇女宫颈癌发生、发展中的作用不可忽视，在宫颈癌的防治工作中务必将男性的影响因素考虑在内。

HPV具有嗜上皮细胞特性，提示HPV不仅能够引起宫颈癌，有上皮细胞的组织都可能感染此病毒。事实上，本院眼科门诊送检的病例中，有两例是在眼结膜息肉中分别检出HPV16和HPV(6+11)型。美国疾病控制和预防中心及多家癌症注册中心的数据显示，HPV-DNA在宫颈癌、肛门癌、阴茎癌、口咽癌、喉癌分布不同[10]。表明HPV感染的防治尤为重要。

综上，HPV多种型别的感染在本院患者中存在性别差异，整体以高危型为主，男性以感染单一型别为主，而女性以高危和高、低危混合感染为主。HPV检出率最高的前3位分别为HPV52、HPV16和HPV58型，而HPV58和HPV52型感染阴转率最低。本研究所收集的标本来自于各地到北京协和医院就诊的患者，具有一定的代表性，希望其结果能够为国内预防性疫苗的研发提供一定的数据支持和参考。

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Infection Modes and Subtypes of Human Papilloma Virus in Patients

ZHANG Rui1，BI Xinxing1，2，YE Ali1，KONG Lingjun1，DOU Yaling1

1Department of Clinical Laboratory，PUMC Hospital，CAMS and PUMC，Beijing 100730，China2Department of Clinical Laboratory，Xinhua Hospital of Beijing Tongzhou District，Beijing 101100，China

DOU Yaling Tel：010- 69159702，E-mail：douyling@163.com

Objective To investigate the prevalence of human papilloma virus(HPV)subtypes in patients and to provide an evidence for the prevention and treatment of HPV infection and the development of HPV vaccine.Methods Multiplex PCR was used to detect HPV DNA in 6917 patients in Peking Union Medical College Hospital from January 1，2013 to June 30，2015.Totally 5586 patients entered the final analysis after the repeat samples were deleted.The total positive rate of HPV subtypes(including high-risk subtypes including HPV- 16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58，59，and 68 and low-risk subtypes including HPV- 6 and 11)and the infection status of different age were analyzed.Results The total positive rate of HPV was 36.29%(2027/5586).The positive rate of high-risk subtype was 24.92%(1392/5586)and low-risk subtype was 1.66%(93/5586).The positive rate of multiple was 9.70%(542/5586)and multiple high-risk subtype was 7.75%(433/5586).The positive rate of high-risk subtype and multiple were 25.52%(1366/5353)and 11.16%(26/233)in female and 9.99%(535/5353)and 3.00%(7/233)in male，there were significantly difference(χ2=24.61，χ2=12.45，allP<0.001).The positive rate of low-risk subtypes(3.86%，9/233)in males was significantly higher than that in females(1.57%，84/5353)(χ2=5.84，P=0.007).The high-risk HPV subtype infection mainly was seen in patients aged 31- 50 years and the low-risk HPV subtype infection mainly in patients aged 21- 40 years.The age of multiple HPV infections from 31- 40 years.The lowest turn negative rates of subtype were HPV52 and HPV58.The top three HPV subtypes with the highest positive rates were HPV52，HPV16，and HPV58.Conclusions The positive rates of HPV type are different between male and female patients.The males are mainly infected with low-risk subtypes，whereas the females with high-risk subtypes and the multiple HPV subtypes.The top three high-risk subtypes are HPV- 52，16，and 58.HPV subtypes with the lowest secondary negative rates are HPV- 52 and 58.HPV infection is mainly seen in young individuals.

human papilloma virus；genotype；cervical cancer；vaccine

506-510

窦亚玲 电话：010- 69159702，电子邮件：douyling@163.com

R446.9

A

1000- 503X(2017)04- 0506- 05

10.3881/j.issn.1000- 503X.2017.04.008

2016- 02- 23)

第一、二位作者对本文贡献相同The first two authors contributed qually to this article