赵 平 常培叶 蒋 鹏 格日勒

(内蒙古自治区人民医院心内科，内蒙古 呼和浩特 010017)

·心、脑血管及代谢性疾病·

CYP4F2基因多态性与冠心病的相关性

赵 平 常培叶1蒋 鹏 格日勒

(内蒙古自治区人民医院心内科，内蒙古 呼和浩特 010017)

目的 研究CYP4F2基因多态性与冠心病(CAD)的相关性。方法 对285例汉族CAD患者(冠心病组)和264例非CAD患者(对照组)进行问卷调查，采用高温连接酶检测反应技术进行基因扩增和基因分型，分析CYP4F2基因的2个单核苷酸多态性位点rs1558139和rs2108622多态性与CAD的相关性。结果 CAD组吸烟史和体重指数(BMI)均显著高于对照组(P<0.05)，高密度脂蛋白胆固醇(HDL- C)CAD组显著低于对照组(P=0.000)，CAD组男性患者比例明显高于女性(P=0.001)；CAD组CYP4F2基因rs1558139的基因型频率和等位基因频率与对照组无显著差异(P>0.05)，rs2108622的CC基因型频率在CAD组和对照组间差异显著(P<0.05)。结论 CAD患者的危险因素是男性、有吸烟史、高BMI；CYP4F2基因rs1558139多态性与CAD无明显相关性，CYP4F2基因rs2108622多态性与CAD相关，携带CC基因型的患者发生CAD的风险增加。

冠心病；CYP4F2基因；rs1558139;rs2108622

冠心病(CAD)的发病机制与一些基因的表达和调控有关。探讨遗传因素在CAD 发病机制中的作用已成为当前研究的热点。有研究发现细胞色素氧化酶 P450(CYP)基因多态性在CAD发病过程中起着重要作用〔1〕。CYP 是广泛存在于生物体内的一种血红素- 硫铁蛋白酶系。研究证实花生四烯酸在内源性CPY家族基因作用下的产物20- 羟基二十碳四烯酸(20- HETE)在CAD的发生发展中起着重要作用〔2〕。一项研究〔3〕在日本人群中发现CYP4F2基因rs1558139的多态性会影响20- HETE的生成。CYP4F2在基因水平上对冠心病遗传易感性影响的具体调控机制尚需进一步研究。内蒙古自治区是CAD高发地区，且有鲜明的区域聚集特征，可能具有不同的遗传和环境背景。本研究探讨内蒙古自治区汉族人群CYP4F2基因多态性与CAD的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料 内蒙古自治区人民医院2013年6月至2014年6月住院的汉族患者开展CAD流行病学调查，研究对象均无血缘关系，无异族通婚史，25～65岁，至少三代(祖父/母、父/母和子/女)从小生活在调查所在地区。所有参与者均知情同意。调查内容包括一般情况和病史，包括性别、年龄、是否出现胸闷或胸痛、胸闷/胸痛发作频率、次数、诱发因素、缓解因素、发作持续时间、心电图特征、是否具有冠心病家族史、吸烟、饮酒史及血脂状况。

1.2 病例组和对照组的诊断纳入标准 冠状动脉造影结果，严格依据以下诊断标准选取阳性病例(CAD组)：①心肌梗死患者；②冠状动脉造影显示冠脉狭窄≥70%，并有心肌缺血表现〔ST改变及(或)心绞痛〕。次选标准：冠状动脉造影显示：70%>冠脉狭窄≥50%，全部病例均符合1979年WHO缺血性心脏病的诊断标准。对照组纳入标准：在内蒙古自治区人民医院就诊的拟诊CAD患者，经冠脉造影检查证实无狭窄病变；心电图显示没有缺血性改变变。研究中排除了过量饮酒、脑卒中、严重肝肾疾病、甲状腺疾病病史及恶性肿瘤的对象。共收集CAD组285例，对照组264例。

1.3 方法

1.3.1 血样DNA的提取 采用试剂盒法进行基因组DNA的提取并进行DNA浓度、纯度检测。

1.3.2 连接酶检测反应(LDR)检测rs1558139和rs2108622多态性

1.3.2.1 PCR扩增SNP所在片段 PCR反应体系如下：1倍缓冲液2 μl，20 ng模板1 μl，3 mmol/L Mg2+0.6 μl，2 mmol/L dNTP 2 μl，1 U Taq酶0.2 μl，1倍Q溶液4 μl，0.5p引物混合液2 μl，H2O 8.2 μl，总体积20 μl。PCR 反应条件：起始95℃变性15 min，然后94℃ 30 s，62℃ 1 min，72℃ 1 min，反应35个循环，最后72℃延伸10 min。反应结束后用3%琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。

1.3.2.2 LDR进行基因分型 反应体系如下：1倍缓冲液1 μl，12.5 pmol/μl探针混合液1 μl，2 U连接酶0.05 μl，100 ng/μl PCR产物1 μl，H2O 6.95 μl，总体积10 μl。反应条件：95℃ 2 min，94℃ 30 s，60℃ 2 min，反应35个循环。反应结束后，用GeneMapper 3.0软件进行数据分析和基因分型。

1.4 统计学方法 应用SPSS16.0统计软件对数据的组间比较进行t及χ2检验。

2 结 果

2.1 两组临床相关指标比较 CAD组与对照组平均年龄、总胆固醇(TC)、 甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL- C)无统计学差异(P>0.05)。CAD组吸烟史、体重指数(BMI)均显著高于对照组(P<0.05)。CAD组高密度脂蛋白胆固醇(HDL- C)显著低于对照组(P=0.000)，CAD组男性患者比例明显高于女性(P<0.01)，见表1。

2.2 两组CYP4F2基因多态性 CAD组和对照组CYP4F2基因rs1558139和rs2108622等位基因频率和基因型频率的分布符合Hardy- Weinberg平衡。CAD组和对照组CYP4F2基因rs1558139的等位基因频率和基因型频率均无统计学差异(P>0.05)，rs2108622的CC基因型频率在CAD组明显高于对照组(P<0.05)，rs2108622的等位基因频率在CAD组和对照组差异无统计学意义(P>0.05)，见表2。

表1 两组临床相关指标比较

表2 两组CYP4F2基因等位基因和基因型频率比较〔n(%)〕

3 讨 论

CAD是在遗传和环境因素基础上，多种危险因素共同作用下发病的。传统危险因素包括年龄、性别、家族史、吸烟、高血压、糖尿病、肥胖、高胆固醇血症等。近来研究发现新的危险因素如感染及炎症、促凝物质、载脂蛋白(LP)a、高同型半胱氨酸(HCY)血症等〔4〕。目前多个研究表明细胞色素酶P450基因与冠心病的发病有关〔5～7〕。有研究对花生四烯酸代谢途径上的 CYP家族基因进行多态性分析发现CYP4F2基因的多态性和CAD等疾病的发生关联密切〔8〕。研究发现 CYP4F2 基因的多态位点会影响该基因的功能，从而影响花生四烯酸生成20- HETE〔9〕，而20- HETE在CAD发生发展中起重要作用〔2〕。

研究表明男性雄激素水平与心血管疾病相关，过高的激素水平可增加CAD的风险〔10〕。另外，男性是心血管事件的独立危险因素〔11〕。女性CAD发病率较低，这和雌激素具有抗动脉粥样硬化作用相关，但在绝经期后发病率明显增加〔12〕。吸烟是心血管疾病重要的危险因素，烟草中的尼古丁作用于动脉内膜，促进动脉粥样硬化的发展。烟草烟雾中的一氧化碳、一氧化氮、氧自由基等物质损害血管内皮功能，促进CAD的形成〔13〕。研究显示戒烟可使心血管疾病患者死亡相对风险下降36%〔14〕。血脂代谢紊乱是CAD的重要危险因素，血脂水平在动脉粥样硬化的发生和发展方面起到了重要的作用。有研究发现低 HDL- C 可增加心血管事件的发病率〔15〕。本研究结果显示，除HDL- C外CAD组与对照组各血脂比较均无统计学差异，可能与患者前期使用他汀类等降脂药物有关。超重与主要心脑血管的发病密切相关，BMI增加引起CAD和高血压，并被认为是高血压、CAD的重要危险因素〔16〕。

本研究提示CYP4F2基因的rs2108622与CAD相关，携带CC基因型的患者发生CAD的风险增加。欲证实CYP4F2基因在CAD中的作用需要扩大样本量进行相关的功能研究，以明确CAD的遗传易感基因，进而对易感人群进行有效的疾病预防。

1 Chaudhary KR，Batchu SN，Seubert JM.Cytochrome P450 enzymes and the heart〔J〕.IUBMB Life，2009；61：954- 60.

2 Elbekai RH，El- Kadi AO.Cytochrome P450 enzymes：central players in cardiovascular health and disease〔J〕.Pharmacol Ther，2006；112(2)：564- 87.

3 Fu Z，Nakayama T，Sato N，etal.Haplotype- based case- control study of the human CYP4F2 gene and essential hypertension in Japanese subjects〔J〕.Hypertens Res，2008；31(9)：1719- 26.

4 李 刚，周兴文.新的冠心病危险因素〔J〕.心血管病学进展，2005；26(3)：226- 71.

5 Yu C，Yan Q，Fu C，etal.CYP4F2 genetic polymorphisms are associated with coronary heart disease in a Chinese population〔J〕.Lipids Health Dis，2014；20(13)：83.

6 Deng S，Zhu G，Liu F，etal.CYP4F2 gene V433M polymorphism is associated with ischemic stroke in the male Northern Chinese Han population〔J〕.Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry，2010；34(4)：664- 8.

7 Zordoky BN，El- Kadi AO.Effect of cytochrome P450 polymorphism on arachidonic acid metabolism and their impact on cardiovascular diseases〔J〕.Pharmacol Ther,2010；125(3)：446- 63.

8 Fava C，Montagnana M，Almgren P，etal.The V433M variant of the CYP4F2 is associated with ischemic stroke in male Swedes beyond its effect on blood pressure〔J〕.Hypertension，2008；52(2)：373- 80.

9 Roman RJ，Stec DE，Flasch A，etal.Functional polymorphism in human CYP4F2 production〔J〕.Physiol Genomics，2008；37(1)：74- 81.

10 Toh S，Hernández- Díaz S，Logan R，etal.Coronary heart disease in postmenopausal recipients of estrogen plus progestin therapy：does the increased risk ever disappear? A randomized trial〔J〕.Ann Intern Med，2010；152(4)：211- 7.

11 Conaway DG，O′Keefe JH，Reid KJ，etal.Frequency of undiagnosed diabetes mellitus in patients with acute coronary syndrome〔J〕.Am J Cardiol，2005；96(3)：363- 5.

12 葛均波，徐永健，梅长林，等.内科学〔M〕.第8版.北京：人民卫生出版社，2013：220- 1.

13 Lavi S，Prasad A，Yang EH，etal.Smoking is associated with epicedial coronary endothelial dysfunction and elevated white blood cell count in patients with chest pain and early coronary artery disease〔J〕.Circulation，2007；115(20)：2621- 7.

14 Teo KK，Ounpuu S，Hawken S，etal.Tobacco use and risk of myocardial infarction in 52 countries in the INTERHEART study：a case control study〔J〕.Lancet，2006；36(9536)：647- 58.

15 de Freitas EV，Brandao AA，Pozzan R，etal.Importance of high- density lipoprotein- cholesterol(HDL- C)levels to the incidence of cardiovascular disease(CVD)in the elderly〔J〕.Arch Gerontol Geriatr，2011；52(2)：217- 22.

16 Eckel R，Krauss R.American Heart Association calls to action：obesity as a major risk factor for coronary heart disease〔J〕.Circulation，1998；97：2099- 100.

〔2015- 12- 07修回〕

(编辑 苑云杰/曹梦园)

内蒙古自治区自然科学基金面上项目(2013MS1154)

赵 平(1973- )，男，副主任医师，主要从事冠心病、高血压发病机制的研究。

R394.5

A

1005- 9202(2017)15- 3703- 03；

10.3969/j.issn.1005- 9202.2017.15.026

1 内蒙古医科大学附属医院核医学科