陈 曦 赵怡蕊

（山西中医学院，山西 太原 030006）

芪术胶囊对糖尿病肾病大鼠的影响研究

陈 曦 赵怡蕊△

（山西中医学院，山西 太原 030006）

目的通过研究芪术胶囊干预后糖尿病肾病大鼠的体液和肾组织的改变，观察其对核因子κB（NF-κB）表达的影响。方法 选取60只成年健康雄性大鼠，设正常组大鼠10只，50只大鼠剔除死亡1只和造模未成功大鼠19只，将造模成功后大鼠30只随机分为3组：模型组、芪术胶囊组、科素亚组。自成模第9周起，正常组、模型组给予蒸馏水、芪术胶囊组给予芪术胶囊（1 g/kg），科素亚组给予科素亚 （1.67 mg/kg），每日1次，连续灌胃8周。检测各组大鼠NF-κB表达水平及果糖胺，肾功能尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）、血清胱抑素（Cys-c），超敏C反应蛋白（CRP），糖化血红蛋白（HbA1c）。结果 芪术胶囊组可显著降低DN大鼠的HbA1C、24 h尿蛋白、肾功能指标和NF-κB水平，并且优于科素亚组（P＜0.05或P＜0.01）；能有效延缓DN肾组织的纤维化进展。结论 芪术胶囊对糖尿病肾病大鼠的NF-кB表达具有一定积极的影响。

糖尿病肾病 芪术胶囊 核因子κB糖尿病肾病（DN）导致终末期肾病（ESRD）和糖尿病患者死亡的主要原因［1］。根据国际糖尿病联盟（IDF）统计，现我国糖尿病患者大约1.7亿［2］，给国家和社会带来了诸多负担，因此探讨DN的发病机制，并寻求有效的防治措施具有重要意义。芪术胶囊是本课题组经过多年研究筛选治疗DN的经验方，在临床上取得了良好的疗效。目前研究表明，核因子кB（NF-κB）在免疫、炎症、缺血、硬化等相关疾病中发挥重要的作用［3］，该因子引领DN发病机制的研究进入了一个崭新的阶段。正常状态下，NF-κB存在于肾小球细胞的胞浆中，当受到外来信号刺激时被活化，参与调控免疫反应、炎症反应等，导致肾脏功能及组织学异常［4］。本研究旨在进一步探讨芪术胶囊对DN的NF-κB表达的影响，采用对照方法进行实验，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 试药与仪器 芪术胶囊：规格：0.5 g/粒，主要成分：黄芪、苍术、地龙等，晋制剂批号：20100711。科素亚：杭州默沙东有限公司，规格：50 mg/片，批号110024。链脲佐菌素（STZ，批号：20101013，美国Sigma公司）。肌酐试剂盒、甘油三酯试剂盒、总胆固醇试剂盒：北京北化康泰临床试剂有限公司提供；352型酶标仪、AC8洗板机：芬兰；微量高速离心机：YG16W；隔水式恒温培养箱：GNP-9080；免疫组化试剂盒（APAAP法）；RIPA蛋白裂解液：碧云天公司；ELISA检测试剂盒；镊子、眼科剪、70%乙醇（三蒸水配制），1.5 mL离心管、液氮；研磨机、镊子、冰盒、离心机、RIPA；高精度加样器及枪头：0.5～10、2～0、20～200、200～1000 μL；

1.2 实验动物 SD大鼠60只，雄性，体质量120 g；许可证号：SCXK（京）2014-0004，由山西省中医药研究院实验动物室提供。

1.3 模型制备 大鼠适应性喂养1周后，按50 mg/kg腹腔注射枸橼酸钠缓冲液（pH4.4）配制的STZ。72 h后鼠尾静脉取血测定血糖，血糖＞16.7 mmol/L，为糖尿病模型成功。6周后测尿微量白蛋白（Alb）、血糖（FBG），高于正常值者为DN造模成功［5］。

1.4 分组与给药 剔除1只死亡老鼠和19只未成模老鼠，将30只成模大鼠随机分成3组：模型组、芪术胶囊组、科素亚组，每组各10只，另设正常对照组10只，共4组。自成模第9周起，正常组、模型组给予蒸馏水，芪术胶囊组给予芪术胶囊（1 g/kg），科素亚组给予科素亚（1.67 mg/kg），每日1次，连续灌胃8周。所有大鼠均自由饮水和进食普通饲料。

1.5 标本采集与检测 1）尿液：采用代谢笼法，各组分别于每4周末收集24 h尿液，保存于-80℃冰箱。进行尿常规、24 h尿蛋白定量检测。2）血液：造模后第8周，用10%的水合氯醛腹腔注射麻醉各组大鼠，由腹主动脉采血约6 mL，室温下静置2 h，3000 r/min离心10 min，取上游血浆-80℃保存，测定果糖胺，肾功能尿素氮（BUN）、肌酐（Scr）、血清胱抑素（Cys-c），超敏C反应蛋白（hs-CRP），糖化血红蛋白（HbA1c）。3）肾组织：大鼠取血后，取出肾脏组织置于液氮中，最后-80℃冰箱保存，进行肾组织病理观察及NF-κB水平检测。1.6 统计学处理 应用SPSS17.0统计软件处理。对于计量资料，符合正态分布的，采用两独立样本t检验，不符和正态分布的资料则采用秩和检验；计数资料采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组生化指标测定结果 见表1。与正常组比较，模型组大鼠HbA1c含量显著升高（P＜0.01），芪术胶囊组较模型组有明显降低（P＜0.05），科素亚组差异无统计学意义，表明芪术胶囊可以显著降低DN大鼠HbA1c水平。与正常组相比，模型组大鼠血清BUN、Scr、Cys-c和24 h尿蛋白明显升高（P＜0.01）；与模型组相比，芪术胶囊、科素亚组差异均明显（P＜0.05或P＜0.01），芪术胶囊组不仅具有降低大鼠血清BUN、Scr、Cys-c和24 h尿蛋白的作用，而且在改善HbA1c和Cys-C方面作用优于科素亚组（P＜0.05）。

表1 各组大鼠血清HbA1c、24 h尿蛋白、肾功能指标和NF-κB水平比较（）

表1 各组大鼠血清HbA1c、24 h尿蛋白、肾功能指标和NF-κB水平比较（）

与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与芪术胶囊组比较，#P＜0.05，##P＜0.01；与科素亚组比较，△P＜0.05。

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2.2 各组大鼠肾组织病理形态学观察 见图1。HE染色光镜见：正常组肾小球结构完整，间质无明显炎症细胞浸润；模型组肾小球基底膜弥漫性增厚，系膜轻中度增厚，毛细血管瘤样改变，肾小球有明显体积增大和细胞增多，肾小管上皮细胞有坏死脱落和水肿，小管腔中有透明管型，肾间质存在炎性细胞和淋巴细胞浸润；芪术胶囊组与科素亚组也相似肾组织病理改变，但较模型组有一定程度减轻（P＜0.05）。表明芪术胶囊能延缓DN肾组织纤维化的进展。

图1 各组大鼠肾组织病理形态学观察（HE染色，400倍）

2.3 各组大鼠NF-κB测定结果比较 与正常组相比，模型组大鼠NF-κB测定结果明显升高（P＜0.01）；与模型组相比，芪术胶囊、科素亚组差异明显（P＜0.05或P＜0.01），表明芪术胶囊在改善肾功能方面作用优于科素亚组。

3 讨 论

近年来国内有关DN中医及中西医结合研究的文献资料非常丰富［6］，由于中医的辨证论治常受到医者主观性及经验性的影响，故大多数文献报道中方药繁复，缺少从分子生物学的深入研究，因此缺乏疗效较好又广为公认的有效治疗药物。

中医理论认为脾为后天之本，气血生化之源。现代医学认为胰腺属于中医脾的范畴，“脾虚湿停”，“郁久化热”后天之本无以濡养先天之本“肾”，故DN基本病机为脾肾两虚，湿热瘀阻多见。芪术胶囊是按照健脾活血、清热燥湿法［7］应用于临床十余年有效的基础上，不断精减筛选的药物制剂，适用于早、中期糖尿病患者。方中黄芪配当归健脾养血活血，苍术伍黄柏清热燥湿，水蛭与地龙活血化瘀，大黄利湿清热泄浊活血。全方配伍合理，为本项目的选题提供了理法方药的合理性依据。

芪术复方是经过多年临床筛选的经验方，前期进行了胶囊工艺的制备与研究，同时动物模型实验以及验室和研究人员带队，具有中药化学实验室等国家中医药管理局中医药科研三级实验室，我院分子生物学实验室先后开展过多项细胞和动物大量临床研究证实芪术复方所代表的健脾活血清热燥湿法具有降低尿蛋白，改善肾功能的作用，治疗有效率达87.5%［8-9］。作用于DN大鼠可降低血糖，降低SCr、BUN，减少24h尿蛋白定量，明显改善肾脏病理变化，具有良好的肾脏保护作用［10］。

有研究表明，NF-κB在肾脏炎症的进一步加剧等过程中起重要作用［11］，其参与DN发生发展机制虽然尚未明确，但与DN的发生、发展有着密切联系。本研究说明DN可造成大鼠机体正常生理功能、病理形态的紊乱，并从分子学角度初步分析了各组大鼠肾脏和血清，通过统计分析，找到组间差异，观察到芪术胶囊对糖尿病肾病的NF-κB的影响同时，分析了科素亚、芪术胶囊对DN大鼠的肾脏、血清NF-κB的调节趋势和优劣，为DN的的早期诊断、防治提供有力依据，为后续的研究提供了思路。而芪术胶囊、科素亚都能从一定程度上改善这种情况，且某些方面芪术胶囊组更具有优势。

综上所述。本课题从分子学角度对芪术胶囊治疗糖尿病肾病进行疗效评价［12-13］，为DN的防治提供新的思路与方法，有效延缓DN进展，为芪术胶囊的研究开发具有广阔的市场前景［14-15］。

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·文献分析·

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1004-745X（2016）11-2081-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2016.11.020

（2016-05-31）