闫宝琪，王东升，张世栋，董书伟，苗小楼，那立冬，朱新荣，韩吉清，王雪郦，严作廷*

(1.中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所，甘肃兰州 730050；2.甘肃荷斯坦奶牛繁育示范中心，甘肃红古 730080；3.甘肃省秦王川奶牛试验场，甘肃永登 730000；4.兰州市城关区奶牛场，甘肃兰州 730030)

藿芪灌注液治疗奶牛卵巢静止和持久黄体的临床试验

闫宝琪1，王东升1，张世栋1，董书伟1，苗小楼1，那立冬1，朱新荣2，韩吉清3，王雪郦4，严作廷1*

(1.中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所，甘肃兰州 730050；2.甘肃荷斯坦奶牛繁育示范中心，甘肃红古 730080；3.甘肃省秦王川奶牛试验场，甘肃永登 730000；4.兰州市城关区奶牛场，甘肃兰州 730030)

将确诊为患持久黄体和卵巢静止的病牛各40头，随机分为4组，分别为藿芪灌注液高、中(推荐剂量)、低剂量治疗组和促孕灌注液对照治疗组，每组10头。试验组每头牛分别按每次150 mL、100 mL和50 mL的剂量子宫灌服，隔日1次，4次为1个疗程。对照药物治疗组为促孕灌注液，每次100 mL，隔日1次，4次为1个疗程。结果显示，用藿芪灌注液治疗奶牛持久黄体的高、中、低剂量组的治愈率分别是80%、70%和50%，总有效率分别是90%、90%和60%。对照组治愈率80%，总有效率90%。高剂量组、中剂量组和对照组的治愈率和总有效率均显著高于低剂量组(P<0.05)，高剂量组与中剂量组之间无显著性差异(P>0.05)，藿芪灌注液高、中剂量组与对照药物组之间无显著差异(P>0.05)。用藿芪灌注液治疗奶牛卵巢静止高、中、低剂量组的治愈率分别是90%、80%和60%，总有效率分别是100%、100%和70%；对照组治愈率80%，总有效率90%，高剂量组、中剂量组和对照组的治愈率和总有效率均显著高于低剂量组(P<0.05)，高剂量组与中剂量组之间无显著性差异(P>0.05)，高、中剂量组与对照组之间无显著差异(P>0.05)。

奶牛；持久黄体；卵巢静止；疗效

近年来，随着奶牛数量的增长，单产逐年增加，集约化程度不断提高，奶牛产后 60 d～80 d不发情以及产后120 d以上屡配不孕的现象增多，导致绝大多数牛场产犊间隔难以达到理想标准，造成严重经济损失。引起奶牛不孕的主要原因有遗传、管理、营养、疾病和环境因素，而在疾病性不孕中多数为子宫疾病和卵巢性疾病[1-4]。奶牛发生卵巢疾病常引起奶牛的产犊数减少，产犊间隔延长，屡配不孕，发情周期延长、紊乱或长期不发情，致使奶牛不能正常配种受胎，产奶量下降甚至不产奶，饲养管理及配种费用增加，给奶牛养殖业造成巨大的经济损失。据统计，在我国约有20%～40%的高产奶牛存在繁殖障碍，仅次于乳房炎，成为影响我国奶业发展的第二大疾病[5-6]。近年，对奶牛卵巢疾病性不孕症的疗法主要有药物疗法、激光疗法、穴位埋线疗法、电针疗法和电磁波疗法等，其中以药物疗法应用最为广泛，药物疗法以激素疗法为主。这些激素大多是蛋白质或多肽类激素，临床上往往因诊断手段的限制，不易确诊，致使激素使用不当，疗效不理想，还会造成奶牛激素调节紊乱或过敏反应，激素在奶中残留，可危害人类的健康[7]。中药具有副作用少和药物残留少的特点，现代研究证明，中兽药对卵巢性不孕症有较好的治疗效果。根据中兽医学辨证论治的原则和奶牛卵巢静止和持久黄体的病理特点，以补肝益肾，壮阳催情为治法，研制出了中兽药藿芪灌注液，考察其临床效果。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验药物 藿芪灌注液由北京中农劲腾生物技术有限公司提供的中试产品，批号20121002;对照药物：促孕灌注液，北京中农劲腾生物技术有限公司生产，批号20120803。

1.1.2 试验用动物 试验奶牛来自在甘肃省荷斯坦奶牛繁育中心、兰州市城关奶牛场和兰州市秦王川奶牛场自然发病牛，符合临床诊断标准的患卵巢静止和持久黄体的病牛80头，其中卵巢静止病牛40头，持久黄体病牛40头。收治的80头患卵巢静止和持久黄体的奶牛，经临床检查，心跳、呼吸基本正常，营养状况中等。在卵巢静止的40头奶牛中，年龄为3岁～8岁；头胎经产奶牛5头，2胎～4胎经产奶牛18头；5胎以上经产奶牛17头。在持久黄体奶牛中，年龄为3岁～10岁；头胎经产奶牛2头，2胎～4胎经产奶牛20头；5胎以上经产奶牛18头。

1.2 方法

1.2.1 诊断标准

1.2.1.1 卵巢静止病例的临床诊断标准 奶牛长时间不发情或产后3个月以上未发情。直肠检查卵巢大小和质地正常，表面光滑，卵巢上没有黄体也没有卵泡；当发生卵巢萎缩或硬化时，卵巢体积缩小，表面光滑、坚实。间隔7 d～10 d，连续3次直肠检查卵巢一直无变化[8]。

1.2.1.2 卵巢静止病例纳入标准 奶牛曾经有过正常的妊娠、分娩史，并且符合奶牛卵巢静止的临床诊断标准。

1.2.1.3 卵巢静止病例的排除标准 凡是奶牛患有其他疾病，或者曾用激素治疗的病牛均应排除在试验之外。

1.2.1.4 持久黄体的临床诊断标准 母牛发情周期停止循环，长时间不发情。直肠检查，一侧或两侧卵巢增大，卵巢表面上有突出的黄体，质地较卵巢实质硬。间隔7 d，连续3次直肠检查，在卵巢的同一部位触摸到的黄体大小、形状及硬度均无变化[8]。

1.2.1.5 持久黄体病例纳入标准 奶牛曾经有过正常的妊娠、分娩史,并且符合奶牛持久黄体的临床诊断标准。

1.2.1.6 持久黄体病例的排除标准 凡是奶牛并发其他疾病，或者曾用激素治疗的病牛均应排除在试验之外。

1.2.2 动物分组 将临床确诊为患卵巢静止病牛共计40头，随机分为高剂量组、中剂量组、低剂量组和对照组，每组10头。将患持久黄体病牛40头，随机分为高剂量组、中剂量组、低剂量组和对照组，每组10头。

1.2.3 给药方法 用1 mL/L新洁尔灭溶液浸泡消毒输精枪，并将患牛外阴部清洗消毒，以直肠把握法用输精枪将药液送入子宫内。其中高、中、低剂量组每次每头牛子宫灌注藿芪灌注液的剂量分别为150、100、50 mL，对照组每次每头牛子宫灌注促孕灌注液30 mL，隔日1次，4次为一个疗程。

1.2.4 疗效评定标准

1.2.4.1 卵巢静止的疗效判定标准 ①治愈：治疗期间或治疗后14 d内出现发情，出现发情表现，卵泡发育正常，可以配种。②显效:治疗期间或治疗后14 d内出现发情，卵巢的性状有了改善(大小、质地)，但卵泡发育不良，不宜输精。③有效：治疗后14 d仍然未发情，但卵巢的性状有了改善(大小、质地)。④无效:治疗后14 d仍然未发情，卵巢也没有变化。

1.2.4.2 持久黄体的疗效判定标准 ①治愈:治疗期间或治疗后14 d内恢复发情，直肠检查卵巢上黄体消失，卵泡发育正常，可以配种。②显效:治疗期间或治疗后14 d内恢复发情，直肠检查黄体消失，但卵泡发育不良，不宜输精。③有效：治疗后14 d仍然未发情，但直肠检查卵巢的黄体消失、或变小、或减少。④无效:治疗后14 d仍然未发情，直肠检查黄体也没变化。

1.2.5 数据处理 使用SPSS 17.0软件对试验数据进行统计分析，组间数据比较采用χ2检验。

2 结果

2.1 藿芪灌注液对奶牛持久黄体临床治疗效果

不同剂量藿芪灌注液治疗奶牛持久黄体的效果见表1。结果高剂量组和中剂量组治愈率分别为80%和70%，总有效率都为90%，而低剂量组治愈率为50%，总有效率达60%；对照组治愈率达80%，总有效率达90%。高剂量组、中剂量组和对照组的治愈率和总有效率均显著高于低剂量组(P<0.05)。

表1 不同剂量藿芪灌注液治疗奶牛持久黄体的效果

Table 1 The effect of different doses of Huoqi perfusion liquid in the treatment of cow persistent corpus luteum

组别Groups病例数/头Casenumber治愈Cure显效Excellent有效Valid无效Invalid头数Number治愈率/%Curerate头数Number显效率/%Explicitefficiency头数Number有效率/%Curerate头数Number无效率/%Inefficiency总有效率/%Totaleffectiverate高剂量组High10880a1100011090a中剂量组Middle10770a11011011090a低剂量组Low10550b1011044060b对照组Control10880a0011011090a

注：同列数据肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。

Note:In the same column,data with different letters indicate significant difference(P<0.05).

2.2 藿芪灌注液对奶牛卵巢静止临床治疗效果

不同剂量藿芪灌注液治疗奶牛卵巢静止的效果见表2。结果高剂量组和中剂量组治愈率分别为90%和80%，总有效率都为100%，而低剂量组治愈率达60%，总有效率达70%；对照组治愈率达80%，总有效率达90%。高剂量组、中剂量组和对照组的治愈率和总有效率均显著高于低剂量组(P<0.05)。可见，藿芪灌注液治疗奶牛卵巢静止和持久黄体，高剂量组和中剂量组治愈率和总有效率都显著高于低剂量组(P<0.05)，但与对照组无显著差异(P>0.05)。虽然高剂量组治愈率略高于中剂量组，而有效率相同，考虑到治疗成本，临床用药应以中剂量为好。

表2 不同剂量藿芪灌注液治疗奶牛卵巢静止的效果

Table 2 The effect of different doses of Huoqi perfusion liquid in the treatment of cow ovarian quiescence

组别Group病例数/头Casenumber治愈Cure显效Excellent有效Valid无效Invalid头数Number治愈率/%Curerate头数Number显效率/%Explicitefficiency头数Number有效率/%Curerate头数Number无效率/%Inefficiency总有效率/%Totaleffectiverate高剂量组High10990a0011000100a中剂量组Middle10880a11011000100a低剂量组Low10660b1100033070b对照组Control10880a0011011090a

注：同列数据肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。

Note:In the same column,data with different letters indicate significant difference(P<0.05).

3 讨论

中兽医学认为卵巢疾病性不孕，大多属气滞血瘀或肾气虚，肾阳虚症。卵巢静止和卵巢萎缩多为肾阳不足、气血双虚引起，持久黄体、卵巢囊肿多为冲任不调之气血瘀滞所致。因此，选择了具有壮阳补肾、兴奋性机能的阳起石、淫羊藿、菟丝子，补血调经、活血祛瘀的当归、益母草等，还选用了补气、扶正的黄芪，以扶正固本，从而达到阴平阳秘，进而调节生殖内分泌机能，促进卵巢机能恢复，提高受胎率。本试验结果表明藿芪灌注液高剂量组和中剂量组对持久黄体有良好的疗效其临床治愈率分别为80%和70%，总有效率均为90%。高剂量组和中剂量组对卵巢静止的治愈率分别为90%和80%，总有效率均为100%。

现代研究表明，淫羊藿的有效成分具有拟雌激素样作用，可以上调激素受体的表达，增加基质金属蛋白酶(MMP)的表达，减少睾丸损伤，有补肾的作用。淫羊藿能增强下丘脑-垂体-性腺轴及肾上腺皮质轴、胸腺轴等内分泌系统的分泌功能[9-10]。阳起石常在临床中用来治疗男性阳痿遗精，女性宫冷不孕，其壮阳作用可能与其富含微量元素有关[11]。菟丝子具有雌激素样作用，水提物给小鼠灌服，可促进阴道上皮细胞角化，使子宫重量增加，菟丝子的黄酮类提取物可使成年大鼠腺垂体、卵巢、子宫重量增加，具有壮阳作用，故为君药[12]。黄芪对体液免疫、细胞免疫均有促进作用，而且具有类似激素样作用。当归为妇科要药，具有补血活血、润肠通便的作用，当归水煎剂能兴奋未孕小鼠离体子宫，作用与H1受体有关而与M受体、α受体及前列腺素合成酶无关[13]。益母草多种制剂对多种动物在体子宫均有直接兴奋作用，可使子宫收缩频率、幅度及张力增加。益母草水提取物、水煎醇提物、醇提物均能增加大鼠离体子宫的张力、强度、频率和子宫活动力。益母草还能引起小鼠阴道上皮增生、角化，使成年去卵巢小鼠的子宫内膜出现不同程度的增生[14]。我们研究发现该药能显著促进小鼠子宫发育，并增强雌激素水平及其受体基因表达，而对孕激素水平及其受体基因表达无显著影响[15]。因此，藿芪灌注液可能是:①通过对下丘脑-垂体-性腺轴的作用，提高垂体对黄体生成释放激素的反应性及卵巢黄体生成素的反应性，促进发情。②通过改善子宫-卵巢的局部微循环，降低局部的炎症反应。③雌激素样的作用，促进子宫内膜组织增生和阴道角化上皮细胞生成，促进卵巢功能恢复。

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Clinical Trials on Huoqi Perfusate Treatment of Cow Inactive Ovary and Persistent Corpus Luteum

YAN Bao-qi1，WANG Dong-sheng1，ZHANG Shi-dong1，DONG Shu-wei1， MIAO Xiao-lou1，NA Li-dong1,2，ZHU Xin-rong2，HAN Ji-qing3，WANG Xue-li4，YAN Zuo-ting1

(1.LanzhouInstituteofAnimalHusbandryandPharmaceuticalSciences，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Lanzhou，Gansu,730050，China；2.GansuHolsteinCowBreedingCenter，Honggu,Gansu,730080，China；3.CowTestFieldinQinWangchuanofGansuProvince，Yongdeng，Gansu,730000，China；4.ChengguanCowFarm，Lanzhou,Gansu,73030，China)

Forty sick cows with persistent corpus luteum and ovarian quiescence were divided into four groups, and respectively treated with high, medium (recommended dose), low dose of Huoqi perfusate, and control group treated with promote pregnancy perfusion fluid (n = 10). The cow uteri in experimental groups were perfused with 150 mL, 100 mL and 50 mL, one times every two days, four times for 1 course, and in control treatment group with promoting pregnancy perfusion fluid, 100mL each time, one times every two days, four times for 1 course. The results showed that the cure rates of cow persistent corpus luteum with high, medium and low dose Huoqi perfusion liquid respectively was 80%, 70% and 50%. The total effective rates were 90%, 90% and 60%. In the control group, the cure rate was 80%, and the total effective rate was 90%. The cure rates and total effective rates of high, medium dose groups and control group were significantly higher than that of low dose groups (P<0.05), and there were no significant difference between high dose and middle dose group (P>0.05), also high and medium dose group with Huoqi perfusion fluid and drug control group were no significant difference (P>0.05). When high, middle, low dose Huoqi perfusion liquids were used go treat dairy cows with ovarian rest, the cure rates respectively were 90%, 80% and 60%, and the total efficiency rates were 100%, 100% and 70%. In the control group, the cure rate was 80%, the total efficiency rate was 90%. The cure rates and total effective rates of high, medium dose groups and control group were significantly higher than that of low dose group (P<0.05), and there were no significant difference between high dose and middle dose group (P>0.05), also high and medium dose group with Huoqi perfusion fluid and drug control group were no significant difference (P>0.05).

cow; persistent corpus luteum; ovarian rest; therapeutic effect

2016-04-20

“十二五”国家科技支撑计划重点课题(2012BAD12B03)；中国农业科学院科技创新工程项目；中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目(1610322015003)

闫宝琪(1991-)，女，内蒙古赤峰人，硕士研究生，主要从事兽医临床工作。 *通讯作者

S853.51

B

1007-5038(2016)12-0122-04