程迪迪 刘彩红

(泰山医学院 药学院，山东 泰安 271016)



HPLC法测定半枝莲中木犀草素和芹菜素的含量*

程迪迪 刘彩红

(泰山医学院 药学院，山东 泰安 271016)

目的 建立RP-HPLC法同时测定半枝莲中木犀草素和芹菜素的含量。方法 采用Hypersil ODS2色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，以乙腈-2%醋酸水溶液(30∶70)为流动相，检测波长340 nm，流速1.0 ml/min，柱温30℃。结果 木犀草素和芹菜素进样浓度在0.025 mg/ml～0.200 mg/ml范围时，木犀草素(y=97251x-1134.2，R2=0.9965，n=5)和芹菜素(y=61659x-184.55，R2=0.9949，n=5)均呈良好的线性关系。木犀草素和芹菜素的平均回收率分别为99.83%和100.53%。结论 本方法简单、准确, 可对半枝莲的质量进行控制。

半枝莲；木犀草素；芹菜素；反相高效液相色谱法

半枝莲为唇形科植物Scutellaria barbata D.Don 的干燥全草，有清热解毒、化瘀利尿的功效，用于治疗疔疮肿毒、咽喉肿痛、毒蛇咬伤、跌扑伤痛、水肿和黄疸等[1]。现代药理研究表明半枝莲有广泛的药理作用，主要表现在抗肿瘤、抑菌、抗病毒和免疫调节等方面[2]。半枝莲含有多种化学成分，如黄酮类、萜类、生物碱、有机酸等成分，其中黄酮类化合物为半枝莲的主要生理活性物质[3]。从半枝莲中分离得到的黄酮类化合物有野黄芩苷(scutellarin)、野黄芩素(scutellarein)、木犀草素(luteolin)和芹菜素(apigenin)等30多种。目前《中华人民共和国药典》2010年版一部中仅对半枝莲药材及饮片中的总黄酮和野黄芩苷进行含量测定，尚未对半枝莲中其他黄酮成分进行规定，为了更全面地对半枝莲中的主要黄酮类成分进行分析，本实验建立了HPLC法用于同时测定半枝莲中木犀草素和芹菜素的含量。

1 材料与方法

1.1 仪器和试剂

大连依利特EC2006高效液相色谱仪，包括UV230II紫外—可见检测器，P230II高压恒流泵(A、B泵)。对照品木犀草素(批号120605)、芹菜素(批号120713)购自中国药品生物制品检定所；中药半枝莲购于泰安宏康大药房；乙腈为色谱纯、醋酸为分析纯、水为双蒸水。

1.2 对照品溶液的制备

分别精密称取干燥至恒重的木犀草素、芹菜素对照品10 mg置于棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容，摇匀，配制成浓度为1.0 mg/ml的对照品溶液，4℃ 保存，备用。

1.3 样品溶液的制备

将半枝莲去除杂质、干燥、粉碎，得到半枝莲粉末。精密称定半枝莲粉末约1.0 g，置于100 ml锥形瓶中，精密加入50%的乙醇溶液40 ml，密塞，称重，在45 ℃、200 W条件下超声30 min后，放至室温，用50%乙醇补足重量，抽滤，将滤液离心，并用0.22 μm滤膜过滤，得供试品溶液。

2 方法和结果

2.1 色谱条件

采用Hypersil ODS2色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流动相乙腈-2%醋酸溶液(30∶70)，检测波长340 nm，流速1.0 ml/min，柱温30 ℃。色谱图见图1，结果表明木犀草素和芹菜素分离度良好。

图1 对照品(A)及和半枝莲样品(B)的HPLC 图谱1木犀草素(luteolin)，2芹菜素(apigenin)

2.2 线性关系考察

精密吸取 “1.2”项下木犀草素、芹菜素对照品贮备液,加流动相配制成木犀草素和芹菜素浓度均为0.025 mg/ml、0.05 mg/ml、0.1 mg/ml、0.15 mg/ml、0.2 mg/ml一系列混合溶液。精密吸取上述对照品溶液各20 μl，注入液相色谱仪，记录峰面积，以各对照品进样量为横坐标，峰面积为纵坐标， 绘制标准曲线，做线性回归，得木犀草素、芹菜素的回归方程分别y=97251x-1134.2(R2=0.9965，n=5)和y=61659x-184.55(R2=0.9949 n=5)。

2.3 精密度试验

精密吸取混合对照品溶液 20 μl，连续进样6 次，测定峰面积，计算RSD值。结果表明，木犀草素和芹菜素峰面积的RSD分别为1.75%和1.81%均小于2.0%，表明该方法精密度良好。

2.4 稳定性试验

精密吸取供试品溶液 20 μl， 分别于配制后 0h、 2 h、4 h、 8 h、 16 h、 24 h 进样测定峰面积，结果木犀草素和芹菜素峰面积的RSD分别为1.09%、1.12%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.5 重复性试验

取同一供试品6份， 按照 “1.4”项下方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下分别进样20 μl进行测定，计算木犀草素、芹菜素的含量。其质量分数的RSD值分别为1.56%、1.80%。结果表明，本法重复性良好。

2.6 回收率试验

取已知浓度的样品溶液(木犀草素0.031 mg/ml、芹菜素0.029 mg/ml)9份，每份1 ml，分别加入供试品含量80%、100%、120%的木犀草素和芹菜素对照品溶液，每种浓度各3份，进样20 μl，计算回收率，结果见表1、表2。结果表明，该测定方法准确度较高, 木犀草素、芹菜素3个浓度下的平均回收率分别为 99.83%、100.79%，RSD值分别1.13%、0.98%。

2.7 样品含量测定

取药材样品粉末0.5 g，按照“1.4”项下方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下，进样，测定吸收峰面积，用外标法计算木犀草素和芹菜素的含量。供试液中木犀草素、芹菜素的浓度分别为0.031mg/ml、0.029 mg/ml，药材中木犀草素、芹菜素的含量分别为0.052%、0.165%。

表1 木犀草素回收率实验结果(n=9)

表2 芹菜素回收率实验结果(n=9)

3 讨 论

试验过程中比较了以下不同的流动相系统对测定结果的影响：甲醇-0.4% 磷酸溶液(40∶60)；甲醇-0.4% 醋酸溶液(40∶60)；乙腈-0.4% 磷酸溶液(35∶65)；乙腈-2% 醋酸溶液(30∶70)，结果选用乙腈-2% 醋酸溶液(30∶70)作为流动相时各个色谱峰的分离效果好。木犀草素和芹菜素在340～360 nm之间有较大吸收峰，木犀草素的最大吸收波长为350 nm，芹菜素在340 nm处有最大吸收峰，综合考虑各种因素，最后选定340 nm作为检测波长。从以上方法学考察及试验结果可见，本测定方法准确，重复性好, 稳定性较好，结果可靠，能够准确测定样品中木犀草素和芹菜素的含量。

[1] 仲浩,薛晓霞,姚庆强.半枝莲化学成分的研究[J].中草药,2008,39(1):21-23.

[2] Lee TK, Kim DI, Song YL. Differential inhibition of Scutellaria barbataon HCG-promoted proliferation of cultured uterine leiomyomal andmyometrial smoothmuscle cells[J].Immunopharmacol Immunotoxicol, 2004,26(3):329-342.

[3] 陈莉华,张烨,李三艳.半枝莲黄酮的超声提取及其抗氧化活性[J].生物加工过程,2013,11(4):36-41.

HPLC determination of luteolin and apigenin in Herba Scutellariae barbatae

CHENG Di-di LIU Cai-hong

(College of Pharmaceutical, Taishan Medical University, Taian 271016,China)

Objective: To develop an RH-HPLC method for determination of luteolin and apigenin in Herba Scutellariae barbatae. Methods: The analyses were performed on a Hypersil ODS2 column (4.6×250 mm,5 μm), the mobile phase was acetonitrile-2% acetic acid (30∶70) at the flow rate of 1 ml/min. The detection was carried out at 340 nm, the column temperature was 30 ℃.Results: The linear range was 0.025mg/ml～0.200 mg/ml for luteolin (y=97251x-1134.2, R2=0.9965, n=5) and apigenin (y=61659x-184.55, R2=0.9949, n=5). The average recoveries of luteolin and apigenin were 99.83% and 100.53% respectively. Conclusion: The method is found to be simple and accurate for simultaneous analysis of luteolin and apigenin in Herba Scutellariae barbatae. The method may be applied for quality control.

scutellariae barbatae；luteolin ；apigenin；HPLC determination

程迪迪(1994—)，女，本科，2013级制药工程本科1班。

刘彩红，女，主要从事中药活性成分的研究，E-mail: chliu@tsmc.edu.cn。

R781

A

1004-7115(2016)12-1340-02

10.3969/j.issn.1004-7115.2016.12.008

2016-10-12)