张　克，牛国顺，邓　莉，李寅超

(1.河南省中医药研究院附属医院，河南 郑州 450004； 2.郑州大学药学院，河南 郑州 450001)



·实验研究·

鲜芦根水提物对小鼠细胞免疫功能的影响

张克1，牛国顺1，邓莉2，李寅超2

(1.河南省中医药研究院附属医院，河南 郑州 450004； 2.郑州大学药学院，河南 郑州 450001)

目的：研究鲜芦根水提物对小鼠细胞免疫功能的影响。方法：将健康昆明种小鼠随机分为溶剂对照组，鲜芦根水提物高剂量组(22.5 g/1kg)、中剂量组(7.5 g/kg)、低剂量组(3.75 g/kg) 4组，每组12只。灌胃，1 d 1次 ，连续14 d。采用绵羊红细胞诱导小鼠迟发型变态反应实验法，观察鲜芦根水提物对小鼠细胞免疫功能状态的影响；计算淋巴母细胞和过渡态细胞百分率，观察鲜芦根水提物对小鼠淋巴细胞转化反应的影响。结果：①与溶剂对照组对比，鲜芦根水提物高、中剂量组小鼠24 h足跖肿胀度均增高， 其中高剂量组较之差别有统计学意义(P<0.01)。②与溶剂对照组对比，鲜芦根水提物3个剂量组淋巴母细胞百分率和过渡态细胞百分率均有不同程度的提高，其中鲜芦根水提物高、中剂量组淋巴母细胞百分率和高剂量组过渡态细胞百分率差别有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论：鲜芦根水提物对细胞免疫功能有明显的促进作用。

鲜芦根水提取液/作用；细胞免疫功能；24 h足跖肿胀度；淋巴母细胞百分率；过渡态细胞百分率；动物；小鼠

鲜芦根为禾本科多年生草本植物芦苇Phragmitescommunis(L.) Trin的新鲜根茎[1]，甘寒质轻，入肺胃经，有清热养阴、除烦、止呕、利尿的作用，且有清热而不伤胃、养阴而不留邪、药性平和的特点。鲜芦根成分芦根多糖有一定的免疫促进作用，其1 000 g/L水煎剂具有抑制乙型溶血性链球菌作用[2]，而有关鲜芦根水提物的免疫调节作用鲜有报道。本研究以小鼠为实验对象，从SRBC诱导小鼠迟发型变态反应(delayed type hypersensitivity，DTH)和植物血凝素(phytohaemagglutinin，PHA)刺激淋巴细胞转化角度，研究了鲜芦根水提物对小鼠细胞免疫的作用。

1　材　料

1.1动物

SPF级昆明种小鼠，雄性，体质量18～22 g，由河南省实验动物中心提供，动物生产许可证号：SCXK(豫)2010-0002。

1.2药品、试剂与仪器

鲜芦根采自丹江口水库库区，经河南中医学院刘若庸教授鉴定为芦苇的新鲜根茎，埋于湿沙中待用。除去残茎、膜质状叶片、须根和杂质，洗净泥土，切段剪碎，放入烧瓶中，加8倍水浸泡30 min，加热至沸，煎煮30 min，倾出药液；残渣加5倍量水，重复提取1次。合并2次水煎液，80 ℃水浴减压浓缩至1 mL/g(按生药计)，临用前用蒸馏水稀释成所需质量分数。绵羊红细胞(SRBC)的制备方法[3]：无菌条件下取绵羊外颈静脉血，置于内盛玻璃珠的灭菌锥形瓶内摇动10 min除去纤维蛋白，加入相当于羊血体积2倍的Alsever溶液摇匀，置4 ℃冰箱备用。临用时以生理盐水洗涤3次(每次2 000 r/min、10 min)，弃上清，用生理盐水稀释至所需体积比和红细胞质量分数[3]。PHA，Sigma 公司产品，批号L8902。JJ200型电子天平，常熟市双杰测试仪器厂产品；AR1140型电子天平，梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司产品；DM-BA300型数码生物显微镜，厦门麦克奥迪有限公司产品； TGL-16H高速离心机，珠海黑马医学仪器有限公司产品；游标卡尺601，哈尔滨量具刃具集团有限责任公司产品。

2　方法与结果

2.1统计学方法

2.2对小鼠迟发型变态反应的影响

取健康雄性小鼠48只，按体质量随机分为溶剂对照组和鲜芦根水提物低、中、高剂量组4组，每组12只。根据成人口服剂量(鲜品0.75 g/kg)，设低、中、高剂量分别为3.75，7.50，22.5 g/kg (分别相当于人体推荐量的5，10，30 倍)。按 20 μL/g 体积给小鼠灌胃，对照组灌胃等体积的生理盐水，1 d 1次，连续 14 d 后测定免疫指标。本实验所选指标和测定方法按照参考文献[4]。各组小鼠腹腔注射 20 mL/L (V/V，以生理盐水配制)的SRBC 0.2 mL，致敏后4 d，测量左后足跖厚度，同一部位测量3次，取平均值。在测量部位皮下注射 200 mL/L (V/V，以生理盐水配制)的SRBC 20 μL，注射后24 h 测量左后足跖部厚度。以攻击前后足跖厚度的差值(足跖肿胀度)来表示DTH的程度，结果见表1。结果显示：与溶剂对照组对比，鲜芦根水提物高、中剂量组小鼠24 h足跖肿胀度均增高， 其中高剂量组较之差别有统计学意义(P<0.01)。提示芦根水提取物可增强由SRBC诱导的小鼠DTH，改善细胞免疫功能状态的作用，即可增强小鼠的细胞免疫功能，以高剂量作用明显。

组 别剂量/(g·kg-1)动物数/只24h足跖肿胀度/mm溶剂对照组—120.32±0.15鲜芦根水提物高剂量组22.5120.79±0.22**鲜芦根水提物中剂量组7.5120.48±0.24鲜芦根水提物低剂量组3.75120.30±0.27

注：与溶剂对照组对比，**P<0.01。

2.3对小鼠淋巴细胞转化反应的影响[5]

取健康雄性小鼠48只，分组、剂量、给药途径和给药周期同2.2。各组小鼠肌注PHA 8 μg/g，1 d 1次，连续 3 d；同时，鲜芦根水提物3个剂量组灌胃等体积相应药液，溶剂对照组灌胃等体积蒸馏水，1 d 1次，连续14 d。第14天给药40 min后剪尾，采血推片，Giemsa染色，油镜下计数100个淋巴细胞中淋巴母细胞和过渡态细胞数量，计算淋巴母细胞百分率和过渡态细胞百分率，结果见表2。结果显示：与溶剂对照组对比，鲜芦根水提物3个剂量组淋巴母细胞百分率和过渡态细胞百分率均有不同程度的提高，其中鲜芦根水提物高、中剂量组淋巴母细胞百分率和高剂量组过渡态细胞百分率差别有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结果表明：鲜芦根水提物能提高淋巴细胞的转化程度，提高T细胞的免疫应答功能，即提高细胞免疫功能，高剂量作用较强。

表2　各组淋巴母细胞百分率、过渡态细胞百分率对比　　±s

注：与溶剂对照组对比：*P<0.05，**P<0.01。

3　讨　论

芦根鲜品来源广泛，资源丰富，药性平和，毒副作用小，为《中国药典》和众多本草著作收载的常用中药品种。国家卫生部2002年规定鲜芦根为药食两用原料[2]。DTH是一种由特异性致敏效应T细胞介导的细胞免疫应答类型。T淋巴细胞受抗原刺激后分化为特异性的致敏淋巴细胞，当同种抗原再次攻击时，局部致敏淋巴细胞释放出多种淋巴因子，引起以单核细胞浸润为主的炎症反应。炎症反应的程度反映了机体对该抗原特异性细胞免疫力的大小。PHA刺激淋巴细胞转化实验[6]是利用PHA被肌肉注射后，在小鼠体内诱导活化T淋巴细胞并转化为淋巴母细胞，以淋巴母细胞转化率为指标判断待试药对细胞免疫能力的影响。本研究结果显示，芦根水提取物可增强由SRBC诱导的小鼠DTH，改善细胞免疫功能状态的作用，以高、中剂量作用明显；鲜芦根水提物能提高淋巴细胞的转化程度，提高T细胞的免疫应答功能，高剂量作用较强。以上均证实鲜芦根水提物具有较好的细胞免疫功能增强作用。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[M].北京：中国医药科技出版社，2015：152.

[2]凌关庭.保健食品原料手册[M].2版.北京：化学工业出版社，2006：375.

[3]罗新舟，孙江桥.复方黄芪合剂对小鼠免疫功能影响[J].辽宁中医药大学学报，2014，16(1)：21-22.

[4]中华人民共和国卫生部.保健食品检验与评价技术规范(2003版)[S].卫生部文件,卫法监发〔2003〕42号：22-34.

[5]李仪奎，王钦茂.中药药理试验方法学[M].上海：上海科学技术出版社，1991：164-165.

[6]赵艳玲，肖小河，袁海龙，等.肝得宁片对小鼠免疫功能的影响[J].中草药，2002，33(2)：147-148.

(编辑陶珠)

1001-6910(2016)10-0068-03

R285.5

B

10.3969/j.issn.1001-6910.2016.10.30

2016-02-17；

2016-05-06