王璇，严光，孙梦雯，刘晓敏

(安徽医科大学附属省立医院、安徽省立医院，a 老年医学科，b 神经内科，合肥 230001)



亚甲基四氢叶酸还原酶基因A1298C多态性与帕金森病易感性的Meta分析

王璇a，严光a，孙梦雯a，刘晓敏b

(安徽医科大学附属省立医院、安徽省立医院，a 老年医学科，b 神经内科，合肥 230001)

[摘要]目的探讨亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因A1298C位点单核苷酸多态性(SNP)与帕金森病(PD)易感性的关联情况。方法通过中国生物医学文献数据库、中国期刊网全文数据库、万方数据库、维普信息资源系统，PubMed、Cochrane Library、OvidSP、Wiley Online Library、Springer Link、EBSCO、Elsevier Science Direct、Google scholar数据库检索MTHFR基因A1298C位点SNP与PD相关的病例对照研究，利用RevMan 5.3 和Stata 12.0软件，根据异质性大小选用随机效应或固定效应模型对各研究数据进行分析。结果共纳入8篇文献。Meta分析结果提示PD组和对照组AA基因型[OR=0.92,95%CI: 0.78～1.09,P=0.33]和CC基因型[OR=1.19,95%CI: 0.89～1.59,P=0.23]、A等位基因[OR=0.92，95%CI: 0.81～1.04,P=0.19]和C等位基因[OR=1.09，95%CI: 0.96～1.24,P=0.19]差异均无统计学意义。结论MTHFR基因A1298C位点SNP与PD易感性无关联性。

[关键词]帕金森病；亚甲基四氢叶酸还原酶(NADPH)；多态性，单核苷酸；Meta分析

帕金森病(PD)是常见的的神经系统变性性疾病。目前病因不明确，可能是基因和环境因素共同作用而致病，病理上表现为中脑黒质多巴胺能神经元大量变性丢失[1]。控制同型半胱氨酸甲基化的限速酶5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因有不同的单核苷酸多态性(SNP)，其中研究最多的两个位点为MTHFR基因C677T和A1298C。本文主要对MTHFR基因A1298C多态性与帕金森病易感性的关联情况进行Meta分析。

1资料与方法

1.1纳入标准病例对照研究；PD组符合PD的诊断标准；对照组均为与患者无血缘关系的健康人群。

1.2排除标准原始文献研究类型为非病例对照研究；原始文献研究设计差(病例组和对照组的样本含量不明确、基因型或等位基因频率数据不明确以致不能提取)；同一作者或同一单位不同作者以雷同或类似内容发表于不同期刊的文献。

1.3检索方法应用计算机检索中国生物医学文献数据库(CBM)、中国期刊网全文数据库(CNKI)、万方数据库、维普信息资源系统，PubMed、Cochrane Library、OvidSP、Wiley Online Library、Springer Link、EBSCO、Elsevier Science Direct、Google scholar数据库等，文献检索时间均从建库至2015年5月。中文检索词为“帕金森病”、“亚甲基四氢叶酸还原酶”或“MTHFR”、“多态性”；英文检索词为“Parkinson's disease”、“methylenetetrahydrofolate reductase”或“MTHFR”、 “polymorphism”，采用主题词与自由词相结合的检索策略，检索条件不限。

1.4文献筛选由两名研究者分别对文献进行独立检索，阅读标题及摘要，对符合纳入标准的文献进行全文阅读，意见不统一时讨论决定。

1.5资料提取提取的信息包括纳入文献的第一作者，所在的国家及种族，PD组和对照组的样本含量，两组的基因型或等位频率，所采用的基因研究方法。

1.6方法学质量评价采用RevMan 5.3软件进行统计学分析。当提取对照组等位基因频率后，计算对照组次要等位基因频率(MAF)。评估对照组基因型频率是否符合HWE采用χ2检验计算。计数资料采用比值比(OR)和95%置信区间(CI)表示。根据I2值判断异质性的大小，若P≥0.1,I2<50%时，则提示各研究间异质性不明显，采用固定效应模型分析；若P<0.1,I2>50%时，则提示各研究间异质性明显，采用随机效应模型分析，并分析异质性可能来源[2]。应用Stata 12.0软件进行Begg′s检验和Egger′s检验定量分析发表偏倚。检验水准设定为α=0.05。

2结果

2.1文献基本情况按检索策略初步检索出文献255篇，通过阅读文题、摘要排除未涉及MTHFR基因A1298C SNP与PD相关性的文献244篇，通过阅读全文再排除非病例对照研究文献3篇，最终纳入8篇原始文献进行Meta分析，涉及1249例PD患者和1162例对照。PD组和对照组人群基本情况，见表1。

2.2Meta分析结果对纳入的研究进行异质性检验，AA基因型的各研究间无异质性(P=0.57,I2=0%)，采用固定效应模型，PD组与对照组相比差异无统计学意义(OR=0.92,95%CI: 0.78～1.09,P=0.33)。CC基因型的各研究间无异质性(P=0.59,I2=0%)，采用固定效应模型，PD组与对照组相比差异无统计学意义(OR=1.19,95%CI: 0.89～1.59,P=0.23)。A等位基因的各研究间无明显异质性(P=0.39,I2=6%)，采用固定效应模型，PD组与对照组相比差异无统计学意义(OR=0.92，95%CI: 0.81～1.04,P=0.19)。C等位基因的各研究间无明显异质性(P=0.39,I2=6%)，采用固定效应模型，PD组与对照组相比,差异无统计学意义(OR=1.09，95%CI: 0.96～1.24,P=0.19)，见图1～4。

2.3敏感性分析在AA和CC基因型、A和C等位基因中，均无明显异质性，逐一剔除纳入的文献，各研究中的异质性均无明显变化，仍无明显异质性。在A等位基因研究中，当剔除Biatecka等[10]时，异质性降低至I2=0%，Meta分析的结果变为有统计学意义(OR=0.85，95%CI: 0.73～0.98,P=0.03)。在C等位基因研究中，当剔除Biatecka等[10]时，异质性也降低至I2=0%，Meta分析的结果也变为有统计学意义(OR=1.18，95%CI: 1.02～1.37,P=0.03)。

表1　PD组和对照组与MTHFR基因A1298C SNP关联的基本情况

注：PCR: 聚合酶链式反应；PCR-RFLP: PCR限制性片段长度多态性

图1　AA基因型与PD易感性的森林图

图2　CC基因型与PD易感性的森林图

图3　A等位基因与PD易感性的森林图

图4　C等位基因与PD易感性的森林图

2.4发表偏倚分析AA基因型的Begg检验(z=1.11,P=0.27)和Egger检验(t=0.56,P=0.60)结果表明尚无明显发表偏倚；CC基因型的Begg检验(z=0.37,P=0.71)和Egger检验(t=0.51,P=0.63)结果表明尚无明显发表偏倚；A等位基因的Begg检验(z=0.62,P=0.54)和Egger检验(t=0.09,P=0.93)结果表明尚无明显发表偏倚；C等位基因的Begg检验(z=0.62,P=0.54)和Egger检验(t=-0.09,P=0.93)结果表明尚无明显发表偏倚。

3讨论

MTHFR是体内催化5,10-亚甲基四氢叶酸成5-甲基四氢叶酸的重要限速酶，位于染色体1p36.3的MTHFR基因突变可能引起同型半胱氨酸的变化以致高同型半胱氨酸血症或降低叶酸代谢水平、DNA碱基合成。MTHFR活性降低可影响DNA碱基的合成与修复以致DNA低甲基化、染色体的不稳定，引起细胞的恶变[11]。位于FAD结合位点的MTHFR基因677C→T突变致第222 位密码子的丙氨酸由缬氨酸代替、位于第7外显子编码S-腺苷甲硫氨酸调控区域的1298A→C致第429 位密码子的谷氨酸由丙氨酸代替，使丝氨酸和半胱氨酸的磷酸化减少以致影响MTHFR的表达[12]。MTHFR的辅酶成分核黄素或黄素腺嘌呤二核苷酸的减少可使MTHFR的活性和DNA的甲基化作用降低，同型半胱氨酸代谢异常可致DNA的低甲基化、促使肿瘤的形成[13]。

对纳入的各病例对照研究文献采用MAF和HWE进行质量评估，各文献的MAF和HWE的P值均大于0.05，说明病例组和对照组均具有代表性，原研究均为高质量文献。一般情况下，关于SNP的Meta分析在合并时均有一定的异质性；但AA和CC基因型、A和C等位基因的比较中，异质性均较低(I2<50%)，提示各研究间同质性较高，Meta分析的结果较可靠。逐一剔除纳入的文献，AA和CC基因型、A和C等位基因的异质性均无明显变化。在A和C等位基因研究中，当剔除文献Biatecka等[10]时，Meta分析的结果均变为有统计学意义，可能是Biatecka等[10]在A等位基因比较中所占的权重较高(23.4%)、在C等位基因比较中所占的权重较高(29.3%)的缘故。

本文设置了严格的文献纳入及排除标准，减少了选择偏倚对结果的影响；发表偏倚是影响Meta结果的另一重要因素，利用Begg′s检验和Egger′s检验定量评估是减少偏倚的重要途径。在AA和CC基因型、A和C等位基因的评估结果均无统计学意义，提示均无明显的发表偏倚。纳入的8篇原始研究采用的检测技术虽均为PCR，但具体技术均不相同，可能存在研究内偏倚；经敏感性分析，Meta结果均无变化。总而言之，经敏感性、发表偏倚分析综合评估后，本Meta分析的结果较为可靠；按人群分亚洲人群和非亚洲人群两个亚组，亚洲人群AA基因型(OR=0.94,95%CI:0.68～1.29,P=0.70)、CC基因型(OR=1.14,95%CI: 0.55～2.36,P=0.73)、A等位基因(OR=0.94,95%CI:0.72～1.23,P=0.65)、C等位基因(OR=1.06,95%CI: 0.81～1.39,P=0.65)，非亚洲人群AA基因型(OR=0.91,95%CI: 0.75～1.11,P=0.36)、CC基因型(OR=1.20,95%CI: 0.88～1.65,P=0.25)、A等位基因(OR=0.91,95%CI: 0.79～1.06,P=0.22)、C等位基因(OR=1.10,95%CI: 0.95～1.27,P=0.22]的结果均无统计学意义，提示MTHFR基因 A1298C SNP与PD易感性无关联性。

MTHFR基因 A1298C SNP与下列疾病易感性无关联性，却与C677T SNP有关联性：神经管缺陷[14]、先天性心脏病[15]、唐氏综合征[16]、唇裂合并或不合并腭裂[17]、胃癌[18]、肺癌[19]、乳腺癌[20]、卵巢癌[21]、弥漫性大B细胞淋巴瘤[22]、急性淋巴细胞白血病复发[23]等。另一Meta分析发现MTHFR基因 C677T SNP与PD易感性也无关联性，但经种族亚组分析后发现C677T SNP与欧洲人群而非亚洲人群PD易感性有关联性；PD组与对照组相比，携有T等位基因的人群同型半胱氨酸血症水平较高，提示T等位基因可能是PD合并高同型半胱氨酸血症的一个独立危险因素[24]。

Meta分析显示MTHFR基因A1298C SNP与PD易感性无关联性，不能明确携有AA基因型和CC基因型、A等位基因和C等位基因的人群罹患PD的风险是否增加。因此类研究仍较少，后期仍可进行设计良好的大样本的病例对照研究或全基因组关联研究进一步证实MTHFR基因 A1298C或其他位点SNP与PD易感性的关联情况。

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Meta-analysis on methlenetetrahydrofolate reductase gene polymorphisms and Parkinson's disease susceptibility

WangXuan*,YanGuang,SunMengqwen,LiuXiamin

(*DepartmentofGeriatrics,theAffiliatedProvincialHospitalofAnhuiMedicalUniversity,Hefei230001,China)Correspondingauthor:YanGuang,Email:ktom38@sohu.com

[Abstract]ObjectiveTo explore the association between A1298C polymorphism of methlenetetrahydrofolate reductase (MTHFR) gene and Parkinson's disease (PD) susceptibility.MethodsThe case-control studies of MTHFR gene and PD were selected from Chinese Biomedical Database,Chinese National Knowledge Infrastructure,Wanfang,Weipu,PubMed,Cochrane Library,OvidSP,Wiley Online Library,EBSCO,Elsevier Science Direct,Springer Link and Google scholar databases.The study data were analysed by random-effects or fixed-effects models depending on heterogeneity use RevMan 5.3 and Stata 12.0 software.ResultsEight articles were included.The meta-analysis results suggested that there were no significant differences in genotype AA[OR=0.92,95%CI: 0.78-1.09,P=0.33],genotype CC[OR=1.19,95%CI: 0.89-1.59,P=0.23],allele A[OR=0.92，95%CI: 0.81-1.04,P=0.19] and allele C[OR=1.09，95%CI: 0.96-1.24,P=0.19] between PD group and control group.ConclusionNo relationship is found between the A1298C polymorphism of MTHFR gene and PD susceptibility.

[Key words]Parkinson's disease;Methylenetetrahydrofolate reductase (NADPH2);Polymorphism,single nucleotide;Meta analysis

基金项目：安徽省国际科技合作计划(11030603025)

作者简介：王璇，硕士在读，主治医师，Email:slyywangxuan @163.com通信作者：严光，主任医师，硕士生导师，Email:ktom38 @sohu.com

中图分类号:R742.5

文献标识码:A

DOI:10.3969/J.issn.1672-6790.2016.02.027

(收稿日期：2016-01-12)