毛晓雪

(自贡市第四人民医院检验科，四川自贡 643000)

·临床研究·

自贡地区妇科就诊患者HPV检测及结果分析

毛晓雪

(自贡市第四人民医院检验科，四川自贡 643000)

目的 探讨自贡地区妇科就诊者HPV检测的结果。方法 采用HPV-PCR扩增技术对2 286例妇科就诊可疑HPV感染者进行HPV 分型检测。结果 2 286例样本中，检出HPV 阳性者589例，总阳性率为25.77%，其中2011、2012、2013、2014年阳性率分别为20.80%、27.10%、28.50%及27.1%。4年中HPV阳性者总共检出HPV感染亚型734例，高危型HPV总共588例(占80.11%)，检出低危型146例(占19.89%)。所有HPV阳性患者亚型感染率前3种分别为HPV-31、HPV-52、HPV-16。结论 自贡地区妇科就诊者HPV感染率与我国其他地区报道的大致相同，但是感染亚型有区域性。根据2012年ASCP指南提到不同HPV感染类型其治疗方法不同，本调查对本地区临床上选择治疗方法上有提示作用。

HPV分型； 宫颈癌； 结果分析

宫颈癌是全世界妇女最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率在全球妇女肿瘤中位列第二。大量的流行病学研究和分子生物学研究已经证明HPV 感染是宫颈鳞癌和上皮内瘤变发生的必要因素，没有持续的HPV感染，女性发生宫颈鳞癌的可能性几乎为零[1]。据报道，目前已完全鉴别到的HPV亚型有超过200种，型与型之间的差异在于基因结构的不同，有54种可感染生殖道黏膜，约20余种与肿瘤有关[2-3]。高危性HPV除引起外生性疣类病变外，主要引起外生殖器癌、宫颈癌及高度子宫颈癌[4]。低危性HPV主要引起肛门皮肤及男性外生殖器、女性大小阴唇、尿道口、阴道下段的外生性疣类病变和低度子宫颈上皮肉瘤，其自然缓解率高，仅有少数概率可以进展为宫颈癌[5]。本文中调查自贡地区2011～2014年4年中2 286例妇科就诊可疑HPV感染者的宫颈拭子，进行以PCR为基础的液态芯片技术检测并进行分型，旨在分析自贡地区的妇科就诊患者可疑HPV感染者其HPV-DNA阳性率及结果分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2011～2014年在自贡第四人民医院及自贡市妇幼保健院可疑HPV感染就诊者，共计2 286例，年龄16～70岁，平均(38.3±2.4)岁。入选条件排除：妊娠、无异常阴道流血、无白带异常等临床症状者。

1．2 仪器与试剂 TEGEN TC-96/T/H(a) PCR扩增仪；丹瑞HHW-420高速离心机；时代北利GT16-3恒温水箱；博日HB-H100恒温金属浴；XH-B型漩涡混匀器；Ⅱ级生物安全柜；透景DNA 提取试剂和HPV 扩增试剂,采用液芯微球技术，同时检测26种人乳头病毒(HPV)亚型(包括19种高危型HPV-16、HPV-18、HPV-26、HPV-31、HPV-33、HPV-35、HPV-39、HPV-45、HPV-51、HPV-52、HPV-55、HPV-56、HPV-58、HPV-59、HPV-66、HPV-53、HPV-68、HPV-82、HPV-83及7种低危型HPV-6、HPV-11、HPV-40、HPV-42、HPV-44、HPV-61、HPV-73)。

1．3 研究方法

1．3．1 标本采集 临床医生将采样刷插入宫颈，轻轻搓动采样刷使其沿顺时针方向转动5圈，取出采样刷后立即置于专用的细胞保存液中，轻轻摇动液体洗涤采样刷以获得更多的宫颈脱落细胞。4 ℃冰箱保存待用。

1．3．2 DNA的提取 取洁净的1.5 mL离心管，编号，对应的加入200 μL宫颈脱落细胞悬液，14 000 r/min离心3 min；吸弃上清液，每管中加入200 μL的提取缓冲液，震荡均匀，放入100 ℃金属浴中保温15 min；将EP管取出14 000 r/min离心5 min；将EP管从离心机中取出，取5 μL上清液进行扩增。

1．3．3 HPV-DNA的扩增 按比例将PCR预反应液10 μL、引物5 μL及酶0.8 μL配制反应液，加入5 μL抽提的上清液上机进行扩增，扩增程序：95 ℃孵育5 min；95 ℃孵育30 s；58 ℃孵育30 s；68 ℃孵育30 s，循环5次；95 ℃孵育30 s，55 ℃孵育30 s，68 ℃孵育30 s，循环35次；68 ℃孵育10 min。

1．3．4 杂交 检测孔中加入22 μL微球杂交液、PCR扩增产物3 μL，混匀；PCR仪中98 ℃变性5 min，48 ℃ 30 min使探针与扩增产物结合；再加入75 μL链霉亲和素标记的藻红蛋白(SP)，48 ℃孵育15 min；最后放入Luminexu200多功能流式点阵仪进行检测。并判读结果，共检测26种HPV亚型，具体包括高危型HPV-16、HPV-18、HPV-26、HPV-31、HPV-33、HPV-35、HPV-39、HPV-45、HPV-51、HPV-52、HPV-55、HPV-56、HPV-58、HPV-59、HPV-66、HPV-53、HPV-68、HPV-82、HPV-83；低危型HPV-6、HPV-11、HPV-40、HPV-42、HPV-44、HPV-61、HPV-73。

1．4 统计学处理 采用Excel 2007进行统计分析，分析方法包括一般频数分布。

2 结 果

2．1 HPV检测结果在被检查的2 286例女性中，HPV阳性共计589例，总阳性率为25.00%，单一感染471例(20.06%)，混合感染118例(5.16%)。其中所有感染阳性标本(589例)中，总共检出感染亚型有734例，其中高危型感染588例(78.71%)，低危型感染95例(21.29%)。

2.3 HPV亚型分布各亚型分布由表2可见，4年中2 286例女性HPV感染的各亚型分布中其感染频度前6位依次为HPV31型(20.00%)、HPV52型(12.00%)、HPV16 型(12.00%)、HPV6型(8.00%)、HPV11型(11%)、HPV58 型(7.00%)。

2.2 HPV检测结果中2014年、2013年、2012年、2011年阳性率分别为27.10%、20.80%、27.10%和28.50%。其中4年中2 286例女性中，单一感染及混合感染具体见表1。

表1 自贡地区2011～2014年HPV单一感染

表2 自贡地区2011～2014年HPV感染者

3 讨 论

女性感染HPV受地区、年龄、相关疾病、个人卫生等影响[6]，其感染类型各个区域内明显不同，HPV不同亚型的致病性及疾病预后均有差异[7-8]。通过参考国内外其他文献，自贡地区感染率(总阳性率25.77%)与国内其他地区报道相似，由于HPV相对便捷且优于传统宫颈癌细胞学检查方法[9]，故大量开展HPV监测，以便及时发现早期病变。全球25个国家的宫颈癌患者中以HPV-16占比为57.4%，HPV-18次之[10]，其中亚洲国家以HPV-52和HPV-58型更常见[8]。北京感染频率则依次为HPV-16、HPV-18、HPV-68、HPV-58和HPV-33型，上海以HPV-52、HPV-58为主，重庆感染频率依次是HPV-16、HPV-52、HPV-31[11-14]。自贡地区，感染亚型前三为HPV-31、HPV-52、HPV-16，呈现明显的地域特点。据2012年ASCP指南，本文通过调查2011年至2014年本院妇科就诊患者HPV的感染率及感染亚型情况，可以指导本地区没有开展HPV分型单位的临床医师经验用药，也能根据HPV感染亚型概率对患者进行随访观察以尽早发现癌前病变，同时也可以作为自贡地区流行病学调查为今后本地区进一步引进疫苗提供依据。

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10.3969/j.issn.1673-4130.2016.07.054 文献标识码：A 文章编号：1673-4130(2016)07-0990-03

2015-12-03)